山豆(dou)根染(ran)料法(fa)PCR鑒定(ding)試(shi)劑盒直(zhi)銷

儲(chu)存(cun)條件：
14℃或－20℃樣品收集(ji)、處理及保(bao)存(cun)方(fang)法(fa)
1. 血(xue)清(qing)：使(shi)用不含熱(re)原(yuan)和內(nei)毒(du)素(su)的(de)試(shi)管(guan)，操作(zuo)過(guo)程中(zhong)避免任(ren)何(he)細(xi)胞刺激(ji)，收集(ji)血液後(hou)，3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)將(jiang)血清(qing)和紅(hong)細(xi)胞迅速(su)小心(xin)地分(fen)離(li)。
2. 血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬酸(suan)鹽或肝素(su)抗(kang)凝。3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)30 分(fen)鐘(zhong)取(qu)上清。
3. 細(xi)胞上清液：3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)去除(chu)顆粒和聚合物。
4. 組(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)：將(jiang)組(zu)織(zhi)加(jia)入適量生理(li)鹽水(shui)搗(dao)碎(sui)。3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)取(qu)上清。
5. 保(bao)存(cun)：如(ru)果樣本(ben)收集(ji)後(hou)不及時(shi)檢測，請按(an)壹次(ci)用(yong)量分(fen)裝(zhuang)，凍(dong)存於(yu)-20℃，避免反復凍融，在(zai)室(shi)溫下(xia)解凍(dong)並(bing)確保(bao)樣品均(jun)勻(yun)地充分(fen)解凍(dong)。

特(te)點(dian)：
1. 即(ji)開(kai)即用，用戶只(zhi)需(xu)要提供病(bing)毒樣品。
2. 根(gen)據(ju)地黃保(bao)守(shou)序(xu)列(lie)設(she)計(ji)的(de)專(zhuan)壹性引物(wu)，與(yu)相關(guan)病(bing)毒無交(jiao)叉(cha)反應。
3. 靈敏度可(ke)以(yi)達到幾(ji)百拷(kao)貝/反應。
4. 壹管(guan)式熒光(guang)定量 PCR 檢測，避免後(hou)續汙染(ran)。
5. 本(ben)試(shi)劑盒足夠(gou) 50 次(ci) 20μL 反應體系(xi)的(de)熒光(guang)定量 PCR。
6. 本(ben)產品只(zhi)適用於(yu)科(ke)研，不能(neng)用於(yu)臨床(chuang)診(zhen)斷。

使(shi)用方(fang)法(fa)：
壹、樣品采(cai)集(ji)：
1、食(shi)品(pin)樣品：樣品的(de)采(cai)集(ji)與預(yu)培養(yang)按(an)照樣品的(de)采(cai)集(ji)與預(yu)培養(yang)按(an)照《食(shi)品(pin)衛(wei)生(sheng)微生物學(xue)檢驗(yan)阪(ban)崎(qi)腸(chang)桿(gan)菌檢驗(yan)要求(qiu)進(jin)行(xing)。
2、血(xue)液樣品：用(yong)無菌註(zhu)射(she)器(qi)抽(chou)取(qu)受(shou)檢者靜脈(mai)血(xue)2mL，註(zhu)入無菌EDTA2Na(或檸(ning)檬酸(suan)鈉)抗(kang)凝管(guan)，立即(ji)混勻(yun)。
3、糞便樣品：取(qu)糞便置(zhi)於(yu)滅(mie)菌的(de)收集(ji)管(guan)中送(song)檢。
4、病(bing)竈部(bu)位樣品：取(qu)發(fa)病(bing)部(bu)位新(xin)鮮滲出(chu)物(wu)、粘液膿(nong)血(xue)送(song)檢。
壹、稀釋 PCR 陽(yang)性對照（以(yi) 10E2-10E7 拷(kao)貝/μL 這(zhe) 6 個 10 倍稀釋度為例(li)）
1. 註(zhu)意：由(you)於(yu)標(biao)準品(pin)濃(nong)度非常高(gao)，因此下(xia)列(lie)稀釋操作壹定(ding)要在(zai)獨(du)立的(de)區(qu)域(yu)進行(xing)，千萬(wan)不能(neng)汙染(ran)樣品或本(ben)試(shi)劑盒的(de)其他(ta)成分(fen)）。為增(zeng)加(jia)產品穩定性和避免擴(kuo)散(san)傳染(ran)性病(bing)原(yuan)，本(ben)產品不提供活(huo)體樣品做(zuo)陽(yang)性對照，只(zhi)提供可以直(zhi)接(jie)使(shi)用的(de) DNA段作(zuo)為陽(yang)性對照。
2. 標(biao)記 6 個離(li)心(xin)管(guan)，分(fen)別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭(tou)分(fen)別(bie)加(jia)入 45 μL 熒光(guang) PCR 模(mo)板稀釋液（用(yong)帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭(tou)，下同(tong)）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管(guan)中加(jia)入 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對照，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得1×10E7 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對照。放(fang)冰上待(dai)用(yong)。
5. 換(huan)槍(qiang)頭(tou)，在(zai) 6 號(hao)管(guan)中加(jia)入 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對照(上步稀釋所得)，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對照。放(fang)冰上待(dai)用(yong)。
6. 換(huan)槍(qiang)頭(tou)，在(zai) 5 號(hao)管(guan)中加(jia)入 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對照到 5 號(hao)管(guan)中，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得 1×10E5 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對照。放(fang)冰上待(dai)用(yong)。
7. 重(zhong)復(fu)上面(mian)的(de)操(cao)作(zuo)直(zhi)到得到 6 個稀釋度的(de)陽(yang)性對照。放(fang)冰上待(dai)用(yong)。
註(zhu)：上述樣品建(jian)議經過(guo)增(zeng)菌後(hou)，收集(ji)培養(yang)物(wu)用於(yu)檢測。 
二(er)、DNA提取(qu)：
可(ke)采(cai)用PCR試(shi)劑盒配(pei)備的(de)DNA抽(chou)提液，按(an)以(yi)下(xia)說明進(jin)行(xing)DNA核(he)酸(suan)的(de)粗(cu)提。也(ye)可采(cai)購上海澤葉生物科(ke)技有(you)限公(gong)司生(sheng)產的(de)DNA提取(qu)試(shi)劑盒(過(guo)柱法(fa)-熒光(guang)配(pei)套(tao))或其他(ta)合適的(de)商(shang)業(ye)化(hua)產品，並按照相(xiang)應(ying)試劑盒說明進(jin)行(xing)操作。
1、液體培養(yang)物(wu)：取(qu)液體培養(yang)物(wu)100μL加(jia)到1.5mL無菌離(li)心(xin)管(guan)中，8000rpm離(li)心(xin)3min，盡(jin)量吸棄(qi)上清，加(jia)入50μL DNA抽(chou)提液充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上清5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
2、固體培養(yang)物(wu)：挑取(qu)單克(ke)隆(long)菌落與(yu)50μL DNA抽(chou)提液充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上清5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
3、糞便樣品：挑(tiao)取(qu)米(mi)粒大(da)小糞便於(yu)滅(mie)菌離(li)心(xin)管(guan)中，加(jia)入0.5mL生(sheng)理(li)鹽水，振蕩(dang)混勻(yun)，13000rpm離(li)心(xin)3分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)上清，沈澱(dian)中(zhong)加(jia)入50μL DNA抽(chou)提液充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上清5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
4、其他(ta)液體標(biao)本(ben)：取(qu)標(biao)本(ben)2-3mL，13000rpm離(li)心(xin)3min，棄(qi)上清，沈澱(dian)中(zhong)加(jia)入50μL DNA抽(chou)提液充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上清5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
註(zhu)：陽(yang)性對照和陰性對照為已(yi)經抽(chou)提好的(de)核(he)酸(suan)(無需(xu)提取(qu))，直(zhi)接(jie)取(qu)5μL加(jia)入到反應體系(xi)中(zhong)即可。由(you)於(yu)陽(yang)性對照濃(nong)度較(jiao)高(gao)，建議在(zai)樣品制(zhi)備區(qu)域(yu)加(jia)入陽(yang)性對照。 
HO-8910細(xi)胞，卵巢(chao)癌(ai)細(xi)胞 人胃(wei)腺癌(ai)細(xi)胞,MCG803細(xi)胞 大(da)耳山羊肺(fei)細胞;LDG-1利奧(ao)西(xi)呱(gua)，BAY 63-2521Riociguat質量規格：>98%,可(ke)溶(rong)性鳥苷(gan)酸(suan)環化(hua)酶(mei)激(ji) (sGC)活(huo)劑

tTA基因修飾(shi)的(de)小鼠畸(ji)胎(tai)瘤(liu)細(xi)胞(B類);P19-CAG-tTA-3C8馬(ma)來酸(suan)非尼拉(la)敏Pheniramine Maleate質量規格：>98%,BR

HA Others H5N1 甲(jia)型(xing)流感(gan) H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/14/2008) 血(xue)凝(ning)素(su) (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽(yang)性對照) DANSYL-GCVLSFTase Substrate, Fluorogenic質量規格：>98%,進(jin)分(fen)

人生發基質細胞HHGMC利那(na)洛(luo)肽(tai)Linaclotide 質量規格：>98%,BR

IFNA8 Others Human 人 Ierferon alpha-B / IFNA8 人細胞裂解液 (陽(yang)性對照) 苯(ben)甲(jia)酰芍(shao)藥(yao)苷(標(biao)準品(pin))benzoylpaeoniflorin 質量規格：HPLC≥98%，標(biao)準品(pin)
RM-1細(xi)胞，前(qian)列(lie)腺癌(ai)細(xi)胞 人胚胎(tai)腸(chang)粘(zhan)膜(mo)細(xi)胞,CCC-HIE-2細(xi)胞 恒(heng)河猴(hou)腎(shen)細胞;RM-2甜菜(cai)堿(jian)質量規格：>99%,無水(shui)高(gao)Betaine

大(da)鼠(shu)腦膠(jiao)質瘤細(xi)胞;C6尿(niao)酸(suan)質量規格：0.99Uric acid

SCARB1 Others Mouse 小鼠 SCARB1 / CD36L1 / CLA-1 人細胞裂解液 (陽(yang)性對照) 溴(xiu)化(hua)亞銅(>98%,BR)質量規格：>98%,BRCopper(I) bromide

成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞培養(yang)基FM-sf-prf無水(shui)乙(yi)酸(suan)銅(>99%,BR)質量規格：>99%,BRCopper(II) acetate

HA Others H2N2 甲(jia)型(xing)流感(gan) H2N2 (A/Guiyang/1/1957) 血(xue)凝(ning)素(su)HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽(yang)性對照) 溴(xiu)化(hua)銅(>99%,BR)質量規格：>99%,BRCopper(II) bromide
FO(小鼠骨髓瘤(liu)細(xi)胞) 5×106cells/瓶(ping)×2安(an)普(pu)那(na)韋-d4質量規格：美國(guo)進(jin)口(kou)Amprenavir-d4

HRCEpC Pellet 人腎(shen)皮質上皮細(xi)胞團塊(kuai) > 1 mio.cells 人晶狀體上皮細(xi)胞cDNAHLEpiC cDNA4'-羥(qiang)基質量規格：美國(guo)進(jin)口(kou)4'-Hydroxy Warfarin

CL-0034BHK-21(倉鼠(shu)腎(shen)細胞)5×106cells/瓶(ping)×26-羥(qiang)基質量規格：美國(guo)進(jin)口(kou)6-Hydroxy Warfarin

FCGR3A Others Human 人 CD16a / FCGR3A CHO細(xi)胞裂解液 (陽(yang)性對照) 7-羥(qiang)基質量規格：美國(guo)進(jin)口(kou)7-Hydroxy Warfarin

1酸(suan)鹽緩沖(chong)註(zhu)DPBS依(yi)替(ti)米星(xing)（標(biao)準品(pin)）質量規格：效價(jia)測定(ding)Etimicin
山豆(dou)根染(ran)料法(fa)PCR鑒定(ding)試(shi)劑盒直(zhi)銷TE-1(人食管(guan)癌(ai)細(xi)胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 小鼠原(yuan)B細(xi)胞株(zhu);BaF3嶙(lin)酸(suan)二(2-乙(yi)基己基)酯(zhi)25毫(hao)升

人臍動(dong)脈(mai)平滑(hua)肌細(xi)胞裂解物(wu)HUASMCL2,2,6-三(san)基-4H-1,3-兒(er)惡(e)英-4-同(tong) 2,2,6-Trimqthyl-4H-1,3-7ioxin-4-onq 2394-63-8

IL1RL1 Others Mouse 小鼠 IL1RL1 / ST2 人細胞裂解液 (陽(yang)性對照) 檸(ning)檬酸(suan)銅25克(ke)

615小鼠滑(hua)膜肉(rou)瘤(liu)瘤(liu)株(zhu);ZM755嗜(shi)酸(suan)粒細(xi)胞直接(jie)計(ji)數液500克(ke)

小鼠誘導(dao)性多潛(qian)能(neng)幹細(xi)胞;PUMC-mi
實(shi)驗(yan)流程(cheng)：
1. 整(zheng)個檢測過(guo)程應(ying)嚴(yan)格按照本(ben)說明書(shu)要求(qiu)分(fen)別(bie)在(zai)試(shi)劑準備區(qu)、樣本(ben)處理區(qu)和PCR擴(kuo)增(zeng)區(qu)進(jin)行(xing)操作，各區(qu)實(shi)驗服、儀器(qi) 、耗(hao)材(cai)應獨(du)立使(shi)用，不能(neng)混用(yong)；實驗用吸頭(tou)采(cai)用帶(dai)濾(lv)芯(xin)吸(xi)頭(tou)；樣本(ben)處理區(qu)應(ying)配(pei)有(you)生物(wu)安(an)全櫃(gui)，樣本(ben)處理在(zai)生(sheng)物安(an)全櫃(gui)中(zhong)進行(xing)操作；三個區(qu)應(ying)該(gai)配(pei)有(you)紫(zi)外(wai)線(xian)殺(sha)菌裝置(zhi)。
2. 為避免RNA降(jiang)解，樣本(ben)處理過(guo)程應(ying)在(zai)0-4℃條(tiao)件下(xia)操(cao)作，且完(wan)成(cheng)實驗(yan)後(hou)立即(ji)上機檢測；樣本(ben)處理過(guo)程中(zhong)使(shi)用的(de)器(qi)具(ju)耗(hao)材應(ying)經過(guo)無核(he)酶(mei)處理。

3. 每(mei)次實驗(yan)應該(gai)設(she)置(zhi)陰、陽(yang)性對照。
4. 試(shi)劑盒所(suo)有(you)試劑在(zai)使(shi)用前(qian)應該(gai)在(zai)常(chang)溫下(xia)充(chong)分(fen)融化(hua)混(hun)勻，並應瞬(shun)時(shi)離(li)心(xin)。
5. 試(shi)劑盒內(nei)所(suo)配(pei)陰性和陽(yang)性對照在(zai)壹次(ci)使(shi)用前(qian)應全部(bu)轉(zhuan)移(yi)至標(biao)本(ben)準備區(qu)，並(bing)單獨(du)存放(fang)。
6. 為防止熒光(guang)幹擾，應(ying)避免裸(luo)手直(zhi)接(jie)接(jie)觸(chu)PCR反應管(guan)，並應(ying)避免在(zai)PCR反應管(guan)上進行(xing)任(ren)何(he)標(biao)記。
7. 儀(yi)器(qi) 擴(kuo)增(zeng)相關(guan)參(can)數應按照本(ben)說明書(shu)相(xiang)關(guan)要求(qiu)進(jin)行(xing)設置；不同(tong)批(pi)號(hao)試劑不能(neng)混用(yong)。
8. ABI系(xi)列(lie)熒光(guang)定量PCR儀(yi)參(can)數設置中不選(xuan)ROX校(xiao)正，淬滅(mie)基因選擇(ze)None。
9. 實(shi)驗(yan)過(guo)程中(zhong)產品的(de)廢(fei)棄(qi)物(wu)應該(gai)進(jin)行(xing)無害(hai)化(hua)處理後(hou)方(fang)可丟(diu)棄(qi)。