山(shan)豆(dou)根(gen)探(tan)針法(fa)PCR鑒定(ding)試(shi)劑(ji)盒保(bao)存

實驗流(liu)程：
1. 整(zheng)個(ge)檢測過(guo)程應(ying)嚴(yan)格(ge)按照本(ben)說(shuo)明書(shu)要(yao)求(qiu)分(fen)別(bie)在試(shi)劑(ji)準備(bei)區、樣本處(chu)理區和(he)PCR擴增(zeng)區進行(xing)操(cao)作(zuo)，各區實驗服(fu)、儀(yi)器 、耗(hao)材(cai)應獨(du)立(li)使用(yong)，不(bu)能混(hun)用(yong)；實驗用(yong)吸(xi)頭采(cai)用帶濾芯(xin)吸(xi)頭；樣本處(chu)理區應配有生(sheng)物(wu)安全(quan)櫃，樣本處(chu)理在(zai)生物(wu)安全(quan)櫃(gui)中進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo)；三個(ge)區應該(gai)配有紫(zi)外線殺菌(jun)裝置。
2. 為(wei)避(bi)免RNA降(jiang)解，樣本處(chu)理過(guo)程應(ying)在(zai)0-4℃條(tiao)件下(xia)操(cao)作(zuo)，且完成(cheng)實驗後立(li)即(ji)上(shang)機(ji)檢測；樣本處(chu)理過(guo)程中使用(yong)的器具耗(hao)材(cai)應經(jing)過(guo)無(wu)核(he)酶(mei)處(chu)理。
3. 每(mei)次實驗應(ying)該設(she)置陰(yin)、陽(yang)性(xing)對(dui)照。
4. 試(shi)劑(ji)盒所(suo)有試(shi)劑(ji)在使用(yong)前(qian)應該(gai)在常溫(wen)下(xia)充分(fen)融(rong)化混(hun)勻(yun)，並應(ying)瞬時離(li)心(xin)。
5. 試(shi)劑(ji)盒內(nei)所(suo)配陰(yin)性和(he)陽(yang)性(xing)對(dui)照在(zai)壹(yi)次使用(yong)前(qian)應全(quan)部轉移至標(biao)本(ben)準備(bei)區，並單(dan)獨(du)存(cun)放(fang)。
6. 為(wei)防止熒光幹(gan)擾，應避(bi)免裸(luo)手直(zhi)接接觸(chu)PCR反(fan)應管，並應(ying)避(bi)免在(zai)PCR反(fan)應管上進行任何(he)標(biao)記(ji)。
7. 儀(yi)器 擴增(zeng)相(xiang)關參(can)數應按照本(ben)說(shuo)明書(shu)相(xiang)關要求(qiu)進行設(she)置；不(bu)同(tong)批號試(shi)劑(ji)不(bu)能混(hun)用(yong)。
8. ABI系(xi)列熒光定(ding)量PCR儀(yi)參數設(she)置中不(bu)選(xuan)ROX校(xiao)正(zheng)，淬(cui)滅(mie)基因選(xuan)擇None。
9. 實驗過(guo)程中產(chan)品(pin)的(de)廢(fei)棄物(wu)應該(gai)進行無(wu)害(hai)化(hua)處理後方可丟棄(qi)。

特點：
1. 即(ji)開(kai)即用(yong)，用戶(hu)只需(xu)要(yao)提供(gong)病毒(du)樣品(pin)。
2. 根(gen)據(ju)地(di)黃保(bao)守(shou)序(xu)列設(she)計(ji)的(de)專(zhuan)壹(yi)性引物(wu)，與(yu)相(xiang)關(guan)病毒無(wu)交(jiao)叉反應。
3. 靈敏(min)度可以(yi)達到幾(ji)百(bai)拷貝/反(fan)應。
4. 壹(yi)管式(shi)熒光定(ding)量 PCR 檢(jian)測，避(bi)免後續(xu)汙(wu)染。
5. 本(ben)試(shi)劑(ji)盒足(zu)夠 50 次(ci) 20μL 反(fan)應體系(xi)的(de)熒光定(ding)量 PCR。
6. 本(ben)產品(pin)只(zhi)適(shi)用於科(ke)研，不(bu)能用(yong)於(yu)臨床診(zhen)斷。
使用(yong)方法(fa)：
壹(yi)、樣品(pin)采(cai)集：
1、食(shi)品(pin)樣品(pin)：樣品(pin)的(de)采(cai)集與(yu)預(yu)培(pei)養(yang)按照樣品(pin)的(de)采(cai)集與(yu)預(yu)培(pei)養(yang)按照《食(shi)品(pin)衛(wei)生(sheng)微生物(wu)學檢驗(yan)阪(ban)崎腸桿(gan)菌(jun)檢驗要求(qiu)進行。
2、血(xue)液樣品(pin)：用(yong)無(wu)菌(jun)註射器抽取受檢(jian)者(zhe)靜脈(mai)血(xue)2mL，註入(ru)無(wu)菌(jun)EDTA2Na(或檸檬酸鈉(na))抗凝管，立(li)即(ji)混(hun)勻(yun)。
3、糞便樣品(pin)：取糞便置於(yu)滅(mie)菌(jun)的收集管中送(song)檢(jian)。
4、病(bing)竈部位樣品(pin)：取發(fa)病部位新(xin)鮮(xian)滲(shen)出(chu)物(wu)、粘液膿(nong)血送檢(jian)。
壹(yi)、稀釋 PCR 陽(yang)性(xing)對(dui)照（以(yi) 10E2-10E7 拷(kao)貝/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍(bei)稀釋度為(wei)例）
1. 註意：由於標(biao)準(zhun)品(pin)濃(nong)度(du)非常高，因此(ci)下(xia)列稀釋操(cao)作(zuo)壹(yi)定要(yao)在(zai)獨(du)立(li)的(de)區域(yu)進(jin)行，千萬不(bu)能汙(wu)染樣品(pin)或本(ben)試(shi)劑(ji)盒的(de)其他(ta)成(cheng)分(fen)）。為增(zeng)加(jia)產品(pin)穩(wen)定性(xing)和(he)避(bi)免擴散傳染性病(bing)原(yuan)，本產(chan)品(pin)不(bu)提供(gong)活體樣品(pin)做(zuo)陽(yang)性(xing)對(dui)照，只(zhi)提(ti)供(gong)可以(yi)直接使用(yong)的 DNA段作(zuo)為陽(yang)性(xing)對(dui)照。
2. 標(biao)記(ji) 6 個(ge)離心管，分(fen)別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶芯槍(qiang)頭分(fen)別(bie)加入(ru) 45 μL 熒光 PCR 模(mo)板稀釋液（用(yong)帶芯槍(qiang)頭，下(xia)同(tong)）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對(dui)照，充分(fen)震蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得1×10E7 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對(dui)照。放(fang)冰(bing)上待(dai)用(yong)。
5. 換(huan)槍(qiang)頭，在(zai) 6 號(hao)管中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對(dui)照(上(shang)步稀釋所(suo)得)，充分(fen)震蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對(dui)照。放(fang)冰(bing)上待(dai)用(yong)。
6. 換(huan)槍(qiang)頭，在(zai) 5 號(hao)管中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對(dui)照到 5 號(hao)管中，充分(fen)震蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得 1×10E5 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對(dui)照。放(fang)冰(bing)上待(dai)用(yong)。
7. 重(zhong)復(fu)上面的(de)操(cao)作(zuo)直到得到 6 個(ge)稀釋度的(de)陽(yang)性(xing)對(dui)照。放(fang)冰(bing)上待(dai)用(yong)。
註：上述樣品(pin)建(jian)議經(jing)過(guo)增菌(jun)後，收(shou)集培(pei)養(yang)物(wu)用於檢測。 
二(er)、DNA提(ti)取：
可采(cai)用PCR試(shi)劑(ji)盒配備(bei)的(de)DNA抽提液，按以(yi)下(xia)說明進行(xing)DNA核(he)酸的(de)粗(cu)提(ti)。也(ye)可采(cai)購上(shang)海(hai)澤葉生物(wu)科(ke)技(ji)有限(xian)公(gong)司(si)生產(chan)的DNA提(ti)取試(shi)劑(ji)盒(過(guo)柱法(fa)-熒光配套)或其(qi)他(ta)合適(shi)的商業(ye)化(hua)產品(pin)，並按照相(xiang)應(ying)試(shi)劑(ji)盒說(shuo)明進行(xing)操(cao)作(zuo)。
1、液體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)：取液體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)100μL加(jia)到1.5mL無(wu)菌(jun)離心管中，8000rpm離(li)心3min，盡(jin)量吸(xi)棄上(shang)清(qing)，加(jia)入(ru)50μL DNA抽提液充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min，取上(shang)清5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
2、固(gu)體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)：挑取單(dan)克隆菌(jun)落(luo)與(yu)50μL DNA抽提液充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min，取上(shang)清5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
3、糞便樣品(pin)：挑(tiao)取米(mi)粒大(da)小(xiao)糞便於(yu)滅(mie)菌(jun)離心管中，加(jia)入(ru)0.5mL生(sheng)理鹽(yan)水，振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)，13000rpm離(li)心3分(fen)鐘，棄(qi)上(shang)清，沈(chen)澱中加(jia)入(ru)50μL DNA抽提液充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min取上(shang)清5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
4、其(qi)他(ta)液體(ti)標(biao)本(ben)：取標(biao)本(ben)2-3mL，13000rpm離(li)心3min，棄(qi)上清，沈(chen)澱(dian)中加(jia)入(ru)50μL DNA抽提液充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min取上(shang)清5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
註：陽(yang)性(xing)對(dui)照和(he)陰(yin)性對(dui)照為(wei)已(yi)經抽提好的(de)核(he)酸(無(wu)需(xu)提取)，直(zhi)接取5μL加(jia)入(ru)到反應(ying)體(ti)系中即(ji)可。由(you)於陽(yang)性(xing)對(dui)照濃(nong)度(du)較(jiao)高，建(jian)議在(zai)樣品(pin)制(zhi)備(bei)區域(yu)加(jia)入(ru)陽(yang)性(xing)對(dui)照。 
大(da)耳(er)山(shan)羊(yang)腎細胞;LDG-2麗(li)絲胺羅丹(dan)明B/酸性(xing)紅(hong)52/磺酰(xian)羅丹(dan)明B Sulforhodamine B質(zhi)量規格(ge)：BS

A549/DDP細胞，耐(nai)DDP肺癌(ai)細胞 中國倉鼠肺細胞,CHL細胞 CM-M002小(xiao)鼠肺血管平滑(hua)肌細胞*培(pei)養(yang)基(ji)100mL麗(li)絲胺羅丹(dan)明B/酸性(xing)紅(hong)52/磺酰(xian)羅丹(dan)明B Sulforhodamine B質(zhi)量規格(ge)：BS

S-180(小(xiao)鼠肉(rou)瘤(liu)細胞) 5×106cells/瓶(ping)×2氯(lv)化羅丹(dan)明110；羅丹(dan)明110Rhodamine 110 chloride質(zhi)量規格(ge)：>99%

Gibco 10639011 STEM PRO-34- COMBO 500ml羅丹(dan)明123Rhodamine 123質(zhi)量規格(ge)：用於熒光標(biao)記(ji)

人(ren)腎臟上皮(pi)細胞HREpiC曲美(mei)布汀堿Trimebutine base質(zhi)量規格(ge)：>98%,BR
人(ren)EB病(bing)毒轉化(hua)的(de)B細胞;CGM1檸檬酸銅(>98.5%,BR)質(zhi)量規格(ge)：>98.5%,BRCopper(II) , hydrate

正(zheng)常(chang)大(da)鼠(shu)腎細胞;NRK 結(jie)腸腺癌(ai)細胞，COLO-320細胞 ST細胞，豬(zhu)細胞系(xi)(ST)氫氧(yang)化(hua)銅(>96.5%,Tech Grade)質(zhi)量規格(ge)：>96.5%,工(gong)業(ye)級(ji)Copper(II) hydroxide

Ca Ski, 人(ren)細胞 Human(光譜(pu)SP)質(zhi)量規格(ge)：光譜(pu)SPPotassium bromide

HAVCR1 Others Cymolgus 食(shi)蟹(xie)猴(hou) HAVCR1 / TIM1 / TIMD1 人(ren)細胞裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 偶氮胂(shen)Ⅰ水合物(wu)(90%)質(zhi)量規格(ge)：0.9Arsenazo I Hydrate

成(cheng)纖維細胞培(pei)養(yang)基(ji)FM-sf(SP)質(zhi)量規格(ge)：SP sulfate anhydrous
FLT4 Others Human 人(ren) VEGFR3 / FLT4 人(ren)細胞裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照) L-核(he)糖(tang)質(zhi)量規格(ge)：>98%,BRL-(+)-Ribose

CL-0308TE-13(人(ren)食(shi)管癌(ai)細胞)5×106cells/瓶(ping)×2L-核(he)糖(tang)(標(biao)準(zhun)品(pin))質(zhi)量規格(ge)：>98%,標(biao)準(zhun)品(pin)L-(+)-Ribose

VNN1 Others Mouse 小(xiao)鼠 VNN1 / Vanin-1 人(ren)細胞裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 2-脫氧-L-核(he)糖(tang)質(zhi)量規格(ge)：>98%,BR2-Deoxy-L-ribose

小(xiao)鼠胰(yi)島細胞*培(pei)養(yang)基(ji) 100mLD-葡萄糖壹(yi)水質(zhi)量規格(ge)：>99%,BRD-Glucose, mohydrate

PC9人(ren)肺癌(ai)細胞 PC9 human lung cancer cells DMEM+10% FBS十(shi)二(er)烷基(ji)硫(liu)酸鈉(na)(分(fen)子生(sheng)物(wu)學級(ji))質(zhi)量規格(ge)：>99%,分(fen)子生(sheng)物(wu)學級(ji)SDS
山(shan)豆(dou)根(gen)探(tan)針法(fa)PCR鑒定(ding)試(shi)劑(ji)盒保(bao)存人(ren)細胞;Hela 229 [HeLa229]4'-羧(suo)基苯(ben)並-15-冠(guan)5-(>98.0%(GC)(T))質(zhi)量規格(ge)：>98.0%(GC)(T)4'-Carboxybenzo-15-crown 5-Ether

IFNB1 Others Mouse 小(xiao)鼠 IFNB1 / IFN-beta / Ierferon beta 人(ren)細胞裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 4'-羧(suo)基苯(ben)並-18-冠(guan)6-(>97.0%(GC)(T))質(zhi)量規格(ge)：>97.0%(GC)(T)4'-Carboxybenzo-18-crown 6-Ether

CRT
儲(chu)存條件(jian)：
14℃或－20℃樣品(pin)收(shou)集(ji)、處理及保(bao)存方法(fa)
1. 血(xue)清：使用(yong)不(bu)含熱(re)原(yuan)和(he)內(nei)毒素(su)的試(shi)管，操(cao)作(zuo)過(guo)程中避(bi)免任何(he)細胞刺激，收(shou)集(ji)血液後，3000 轉(zhuan)離心10 分(fen)鐘將(jiang)血(xue)清和(he)紅(hong)細胞迅速小(xiao)心地(di)分(fen)離。
2. 血(xue)漿：EDTA、檸檬酸鹽(yan)或肝素(su)抗凝。3000 轉(zhuan)離心30 分(fen)鐘取上(shang)清。
3. 細胞上(shang)清液：3000 轉(zhuan)離心10 分(fen)鐘去除顆(ke)粒(li)和(he)聚合物(wu)。
4. 組(zu)織(zhi)勻(yun)漿：將組(zu)織(zhi)加(jia)入(ru)適(shi)量生理鹽(yan)水搗(dao)碎(sui)。3000 轉(zhuan)離心10 分(fen)鐘取上(shang)清。
5. 保(bao)存：如(ru)果樣本收(shou)集後不(bu)及時檢(jian)測，請按壹(yi)次用(yong)量分(fen)裝，凍(dong)存(cun)於(yu)-20℃，避(bi)免反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)，在室(shi)溫(wen)下(xia)解凍(dong)並確(que)保(bao)樣品(pin)均(jun)勻(yun)地(di)充分(fen)解凍(dong)。