靈芝探(tan)針(zhen)法(fa)PCR鑒定(ding)試(shi)劑盒(he)說明(ming)書(shu)

實(shi)驗流(liu)程：
1. 整(zheng)個檢測過程應嚴(yan)格(ge)按照(zhao)本說明(ming)書(shu)要(yao)求(qiu)分別(bie)在(zai)試(shi)劑準(zhun)備區、樣(yang)本處理區和(he)PCR擴增(zeng)區進(jin)行操(cao)作，各(ge)區實(shi)驗服(fu)、儀(yi)器 、耗材(cai)應獨立使用，不(bu)能混(hun)用；實(shi)驗用吸頭(tou)采用帶濾芯吸(xi)頭(tou)；樣(yang)本處理區應(ying)配(pei)有(you)生物(wu)安(an)全櫃(gui)，樣(yang)本處理在(zai)生物(wu)安(an)全櫃(gui)中進行操(cao)作；三(san)個區應(ying)該(gai)配(pei)有(you)紫外(wai)線殺(sha)菌裝置。
2. 為(wei)避免RNA降解(jie)，樣(yang)本處理過程應在(zai)0-4℃條(tiao)件(jian)下操(cao)作，且(qie)完成實(shi)驗後(hou)立即上機檢(jian)測(ce)；樣(yang)本處理過程中使用的器具(ju)耗材(cai)應經過(guo)無(wu)核酶(mei)處理。
3. 每次(ci)實(shi)驗應(ying)該(gai)設(she)置陰(yin)、陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)。
4. 試劑盒(he)所有(you)試劑在(zai)使用前應(ying)該在(zai)常(chang)溫(wen)下充(chong)分融(rong)化(hua)混勻(yun)，並(bing)應(ying)瞬(shun)時離(li)心(xin)。
5. 試劑盒(he)內所配(pei)陰(yin)性和陽性(xing)對(dui)照(zhao)在(zai)壹(yi)次(ci)使用前應(ying)全部(bu)轉(zhuan)移(yi)至標本準備區，並(bing)單獨(du)存(cun)放(fang)。
6. 為(wei)防止熒(ying)光(guang)幹(gan)擾(rao)，應(ying)避(bi)免裸(luo)手直(zhi)接(jie)接(jie)觸PCR反應(ying)管，並(bing)應(ying)避(bi)免在(zai)PCR反應(ying)管上進行任(ren)何(he)標記(ji)。
7. 儀(yi)器 擴增(zeng)相(xiang)關(guan)參(can)數(shu)應(ying)按照(zhao)本說明(ming)書(shu)相(xiang)關(guan)要(yao)求(qiu)進(jin)行設(she)置；不(bu)同批號試(shi)劑不(bu)能混(hun)用。
8. ABI系列(lie)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)PCR儀(yi)參(can)數(shu)設(she)置中(zhong)不(bu)選(xuan)ROX校(xiao)正(zheng)，淬滅(mie)基(ji)因(yin)選(xuan)擇None。
9. 實(shi)驗過(guo)程中產品(pin)的(de)廢(fei)棄物應(ying)該進行無(wu)害(hai)化(hua)處理後方(fang)可丟棄。

特點：
1. 即開即用，用戶(hu)只(zhi)需(xu)要(yao)提供(gong)病(bing)毒樣(yang)品。
2. 根據(ju)地(di)黃保守(shou)序列(lie)設(she)計的專(zhuan)壹(yi)性引(yin)物，與(yu)相(xiang)關(guan)病(bing)毒(du)無交叉反應(ying)。
3. 靈敏(min)度可以(yi)達到(dao)幾百拷貝(bei)/反應(ying)。
4. 壹管式熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang) PCR 檢測(ce)，避免後續(xu)汙染。
5. 本試劑盒(he)足夠 50 次 20μL 反應(ying)體(ti)系的(de)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang) PCR。
6. 本產品(pin)只(zhi)適用於(yu)科研，不(bu)能用於(yu)臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷。
使用方(fang)法(fa)：
壹、樣(yang)品采(cai)集：
1、食品樣(yang)品：樣(yang)品的(de)采集(ji)與(yu)預培(pei)養(yang)按照(zhao)樣(yang)品的(de)采集(ji)與(yu)預培(pei)養(yang)按照(zhao)《食品衛生微(wei)生物(wu)學檢驗阪崎(qi)腸(chang)桿菌檢(jian)驗要(yao)求(qiu)進(jin)行。
2、血液樣(yang)品：用無菌註(zhu)射器抽取受(shou)檢者(zhe)靜(jing)脈血2mL，註(zhu)入(ru)無(wu)菌EDTA2Na(或檸(ning)檬酸鈉)抗(kang)凝(ning)管，立即混(hun)勻(yun)。
3、糞(fen)便樣(yang)品：取(qu)糞(fen)便置於(yu)滅菌的(de)收(shou)集(ji)管中送(song)檢。
4、病竈(zao)部(bu)位樣(yang)品：取(qu)發病部(bu)位新(xin)鮮(xian)滲出物、粘(zhan)液膿血送檢(jian)。
壹、稀釋 PCR 陽性(xing)對(dui)照(zhao)（以(yi) 10E2-10E7 拷貝(bei)/μL 這(zhe) 6 個 10 倍稀釋度為(wei)例）
1. 註(zhu)意(yi)：由(you)於(yu)標準品濃度非(fei)常(chang)高，因此(ci)下列(lie)稀釋操(cao)作壹(yi)定(ding)要(yao)在(zai)獨(du)立的(de)區域(yu)進行，千(qian)萬不(bu)能汙(wu)染樣(yang)品或(huo)本試劑盒(he)的其他(ta)成(cheng)分）。為(wei)增加(jia)產品(pin)穩(wen)定(ding)性(xing)和(he)避(bi)免擴散(san)傳(chuan)染性病原，本產品(pin)不(bu)提供(gong)活(huo)體樣(yang)品做(zuo)陽(yang)性對(dui)照(zhao)，只(zhi)提供(gong)可(ke)以(yi)直接(jie)使用的 DNA段作(zuo)為(wei)陽性(xing)對(dui)照(zhao)。
2. 標記(ji) 6 個離(li)心(xin)管，分別(bie)為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍(qiang)頭(tou)分別(bie)加入(ru) 45 μL 熒光(guang) PCR 模板稀釋液（用帶芯槍(qiang)頭(tou)，下同）。
4. 在(zai) 7 號管中加(jia)入 5 μL 1×10E8 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)，充(chong)分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘，得(de)1×10E7 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)。放(fang)冰(bing)上待(dai)用。
5. 換槍(qiang)頭(tou)，在(zai) 6 號管中加(jia)入 5 μL 1×10E7 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)(上步稀釋所得(de))，充分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘，得(de) 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)。放(fang)冰(bing)上待(dai)用。
6. 換槍(qiang)頭(tou)，在(zai) 5 號管中加(jia)入 5 μL 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)到(dao) 5 號管中，充(chong)分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘，得(de) 1×10E5 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)。放(fang)冰(bing)上待(dai)用。
7. 重(zhong)復(fu)上面的(de)操(cao)作直(zhi)到(dao)得(de)到(dao) 6 個稀釋度的陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)。放(fang)冰(bing)上待(dai)用。
註(zhu)：上述樣(yang)品建(jian)議經過(guo)增(zeng)菌後(hou)，收(shou)集(ji)培(pei)養(yang)物(wu)用於(yu)檢測。 
二、DNA提取：
可采(cai)用PCR試劑盒(he)配(pei)備的DNA抽提液，按以(yi)下說(shuo)明(ming)進(jin)行DNA核酸(suan)的粗(cu)提。也可采(cai)購(gou)上海澤葉生物(wu)科(ke)技(ji)有(you)限(xian)公(gong)司生產的(de)DNA提取試劑盒(he)(過柱(zhu)法(fa)-熒光(guang)配(pei)套)或其(qi)他(ta)合適的商(shang)業化(hua)產品(pin)，並(bing)按照(zhao)相(xiang)應(ying)試(shi)劑盒(he)說明(ming)進(jin)行操(cao)作。
1、液體培(pei)養(yang)物(wu)：取液體培(pei)養(yang)物(wu)100μL加到(dao)1.5mL無菌離(li)心(xin)管中，8000rpm離(li)心(xin)3min，盡量(liang)吸棄(qi)上清，加(jia)入(ru)50μL DNA抽提液充分混(hun)勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取上清5μL進行PCR反應(ying)。
2、固(gu)體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)：挑取單克(ke)隆菌落(luo)與(yu)50μL DNA抽提液充分混(hun)勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取上清5μL進行PCR反應(ying)。
3、糞(fen)便樣(yang)品：挑取米粒大(da)小(xiao)糞(fen)便於(yu)滅菌離(li)心(xin)管中，加(jia)入0.5mL生理鹽水(shui)，振蕩(dang)混(hun)勻(yun)，13000rpm離(li)心(xin)3分鐘，棄上清，沈澱中(zhong)加入(ru)50μL DNA抽提液充分混(hun)勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取上清5μL進行PCR反應(ying)。
4、其他(ta)液體標本：取標(biao)本2-3mL，13000rpm離(li)心(xin)3min，棄上清，沈澱中(zhong)加入(ru)50μL DNA抽提液充分混(hun)勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取上清5μL進行PCR反應(ying)。
註(zhu)：陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)和(he)陰(yin)性(xing)對(dui)照(zhao)為(wei)已(yi)經抽(chou)提好的核酸(無需(xu)提取)，直接(jie)取5μL加入(ru)到(dao)反應(ying)體(ti)系中(zhong)即可(ke)。由(you)於(yu)陽性對(dui)照(zhao)濃度較(jiao)高，建(jian)議在(zai)樣(yang)品制(zhi)備區域(yu)加入陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)。 
Hacat(人永生化(hua)角(jiao)質(zhi)形成(cheng)細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0352HFF-1(人成(cheng)纖維細胞)5×106cells/瓶×2 白牦牛(niu)皮膚(fu)細胞;Yak-2天青(qing)石藍Celestine blue質(zhi)量(liang)規格：BS

小(xiao)鼠T細胞;Cl.Ly1+2-/9天青(qing) B 曙紅Azure B eosinate質(zhi)量(liang)規格：sigma分裝

TMED1 Others Human 人 TMED1 人細胞裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) 利馬(ma)前列(lie)素Limaprost質(zhi)量(liang)規格：>99%

人腸(chang)微(wei)血管內皮細胞*培(pei)養(yang)基(ji) 100mL天青(qing)II曙紅Azure II eosinate質(zhi)量(liang)規格：BS

AMS2細胞，人(ren)幹(gan)細胞因(yin)子(zi)單克(ke)隆抗(kang)體(ti)細胞株 阪崎(qi)腸(chang)桿菌 大(da)耳山羊皮膚(fu)細胞;LDG-3菲律(lv)賓(bin)菌素;非(fei)律(lv)平(ping);FilipinFilipin complex from Streptomyces filipinensis質(zhi)量(liang)規格：sigma分裝
HKC(人胚(pei)腎上皮細胞) 5×106cells/瓶×2 小(xiao)腸(chang)結腸(chang)炎耶(ye)爾(er)森(sen)氏(shi)菌BES free acid; N,N-(2-羥乙基(ji))-2-氨(an)基(ji)乙磺(huang)酸BES free acid質(zhi)量(liang)規格：>99%

內皮細胞生長(chang)添加物(wu)ECGSCEP-18770CEP-18770質(zhi)量(liang)規格：>98.5%

CLEC12A Others Human 人 CLEC12A / CLL-1 / DCAL2 人細胞裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) 地馬(ma)格列(lie)Managlinat Dialanetil/CS-917質(zhi)量(liang)規格：>98.5%,BR

CSSTSP1 中華(hua)鱉(bie)脾來(lai)源細胞鹽(yan)酸(suan)諾(nuo)拉曲(qu)噻(sai)latrexed di質(zhi)量(liang)規格：>99%,BR,可用於(yu)細胞培(pei)養(yang)

CM-M124小(xiao)鼠脈絡膜(mo)血管細胞*培(pei)養(yang)基(ji)100mLPD 173074PD 173074質(zhi)量(liang)規格：>98%,BR,可用於(yu)細胞培(pei)養(yang)
TNFRSF17 Others Human 人 TNFRSF17 / BCMA / CD269 人細胞裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) 黃芪多(duo)糖(50%)質(zhi)量(liang)規格：>50%2-(Chloromethyl)-4-(4-Nitrophenyl)-1,3-thiazole

小(xiao)鼠胚(pei)胎成(cheng)纖維細胞;3T6-Swiss albi黃芪多(duo)糖(30%)質(zhi)量(liang)規格：>30%2-(Chloromethyl)-4-(4-Nitrophenyl)-1,3-thiazole

SAE1 Others Human 人 SAE1 桿狀病毒(du)-昆(kun)蟲細胞裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) 3-奎寧(ning)環酮鹽酸鹽質(zhi)量(liang)規格：>98%3-Quinuclidine HCl

QGY-7701, 人肝癌(ai)細胞伊(yi)索(suo)拉定(ding)質(zhi)量(liang)規格：≥99%,BRIrsogladine

NSC，大(da)鼠(shu)神經幹(gan)細胞 人腦視神經膠(jiao)質(zhi)瘤(liu)細胞，Hs 683細胞 RF/6A(猴脈絡膜(mo)-視網(wang)膜(內皮)細胞)黃柏(bai)酮（標準品）質(zhi)量(liang)規格：HPLC≥98%，標準(zhun)品Obacune
靈芝探(tan)針(zhen)法(fa)PCR鑒定(ding)試(shi)劑盒(he)說明(ming)書(shu)PDIA4 Others Human 人 ERP72 / PDIA4 人細胞裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) Camphore2-莰(kan)酮100克(ke)CP，96%

C57BL/6小(xiao)鼠骨(gu)髓(sui)間質(zhi)幹(gan)細胞 C57BL/6 mouse bone marrow mesenchymal stem cells芐(bian)基(ji)三(san)基(ji)錄(lu)化(hua)銨(an);三基(ji)下基(ji)錄(lu)化(hua)銨(an) BqnzyltriMqthylcMMoniuM chloridq 26-93-9

HME6細胞，人(ren)色素瘤細胞 動物(wu)雙歧桿菌 EB病毒(du)轉(zhuan)化(hua)的人(ren)B細胞;KMY0919 10B Naphthol Blue Bl
儲(chu)存(cun)條(tiao)件(jian)：
14℃或－20℃樣(yang)品收(shou)集(ji)、處(chu)理及(ji)保(bao)存(cun)方(fang)法(fa)
1. 血清：使用不(bu)含(han)熱原(yuan)和(he)內(nei)毒素的試(shi)管，操(cao)作過(guo)程中避免任何(he)細胞刺(ci)激，收(shou)集(ji)血液後，3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分鐘將血清和(he)紅(hong)細胞迅(xun)速(su)小(xiao)心(xin)地(di)分離(li)。
2. 血漿：EDTA、檸(ning)檬酸鹽或(huo)肝素抗(kang)凝(ning)。3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分鐘去除(chu)顆粒和聚(ju)合物(wu)。
4. 組織(zhi)勻漿：將組織(zhi)加入適量(liang)生理鹽水(shui)搗(dao)碎。3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分鐘取上清。
5. 保存(cun)：如(ru)果(guo)樣(yang)本收(shou)集(ji)後(hou)不(bu)及(ji)時(shi)檢(jian)測(ce)，請(qing)按壹(yi)次用量(liang)分裝，凍存(cun)於(yu)-20℃，避免反復(fu)凍融，在(zai)室(shi)溫(wen)下解(jie)凍並(bing)確(que)保樣(yang)品均(jun)勻地(di)充分解(jie)凍。