馬(ma)疥(jie)蟎(man)PCR檢(jian)測試劑盒圖片(pian)

馬(ma)疥(jie)蟎(man)PCR檢(jian)測試劑盒圖片(pian)組成(cheng)及(ji)試(shi)劑配制(zhi):
1、 酶標(biao)板：壹(yi)塊(kuai)（96孔(kong)）
2、 標(biao)準(zhun)品(pin)（凍(dong)幹(gan)品）： 2瓶，請(qing)臨(lin)用(yong)前15分鐘(zhong)內(nei)配制(zhi)。每瓶(ping)以(yi)樣品稀(xi)釋(shi)液稀(xi)釋(shi)至0.5ml，蓋(gai)好(hao)後室(shi)溫靜置(zhi)大約(yue)10分鐘(zhong)，同(tong)時反復顛倒(dao)/搓動以(yi)助(zhu)溶解，其(qi)濃(nong)度為(wei)200 U/L，然後(hou)做(zuo)系(xi)列(lie)倍(bei)比(bi)稀(xi)釋(shi)（註(zhu)：不要(yao)直(zhi)接(jie)在板中進(jin)行倍(bei)比(bi)稀(xi)釋(shi)），分別配制(zhi)成(cheng)200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀(xi)釋(shi)液直(zhi)接(jie)作(zuo)為(wei)空(kong)白(bai)孔(kong) 0 U/L。如配制(zhi)100 U/L標準(zhun)品(pin)：取0.3ml （不要(yao)少於0.3ml ）200 U/L的(de)上述標準(zhun)品(pin)加入含(han)有(you)0.3ml樣品稀(xi)釋(shi)液的(de)Eppendorf管(guan)中，混(hun)勻(yun)即(ji)可，其(qi)余(yu)濃(nong)度以(yi)此類推(tui)。
3、 樣品稀(xi)釋(shi)液：1×20ml。
4、 馬(ma)疥(jie)蟎(man)PCR檢(jian)測試劑盒圖片(pian)檢(jian)測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢(jian)測稀釋液B：1×10ml。

馬(ma)疥(jie)蟎(man)PCR檢(jian)測試劑盒圖片(pian)樣本采(cai)集(ji)、存(cun)放(fang)及(ji)運輸(shu)：
1、樣本采(cai)集(ji)：各(ge)類型樣本按照常規方(fang)法(fa)采集(ji)；
2、存(cun)放(fang)：樣本在(zai)2~8℃條(tiao)件下保(bao)存(cun)應(ying)不超(chao)過(guo)72h，-70℃以(yi)下可保(bao)存(cun)，但應(ying)避(bi)免反復凍融（zui多(duo)凍融3次）；
3、運輸(shu)：采用(yong)泡沫(mo)箱加冰密(mi)封(feng)進(jin)行運輸(shu)。

特(te)點優(you)勢(shi)：
    1.特(te)異性(xing)：所(suo)有(you)產(chan)品使用(yong)的(de)引物均(jun)經(jing)過(guo)詳盡的(de)生(sheng)物信(xin)息學(xue)分析，經過(guo)GenBank及(ji)自(zi)建龐大(da)數(shu)據庫的(de)比(bi)對(dui)，確保(bao)所用(yong)的(de)每(mei)壹條(tiao)引物均(jun)為(wei)種屬或血清(qing)型特(te)異的(de)基(ji)因序(xu)列區(qu)段(duan)，可實(shi)現對(dui)細菌(jun)種屬及(ji)血清(qing)型的(de)特(te)異檢(jian)測，特(te)異性(xing)均(jun)達(da)到100%。
    2.   重現性(xing)：該(gai)系(xi)列(lie)所(suo)有(you)產(chan)品均(jun)經(jing)過(guo)大(da)量實(shi)驗(yan)菌(jun)株的(de)驗(yan)證，重(zhong)現性(xing)為(wei)100%。
    3.   靈敏性(xing)：該(gai)系(xi)列(lie)產(chan)品(pin)可實(shi)現對(dui)檢(jian)測菌(jun)的(de)高(gao)靈敏檢(jian)測，當樣品中(zhong)細(xi)菌(jun)的(de)濃(nong)度達(da)到103cfu/ml時，可實(shi)現對(dui)其(qi)的(de)直(zhi)接(jie)檢(jian)測，無需(xu)繁瑣的(de)增菌(jun)過程。
    4.   實(shi)用(yong)性(xing)：檢(jian)測範圍廣(guang)，涵(han)蓋了(le)對(dui)人體危害(hai)較為(wei)嚴重(zhong)的(de)17種呼(hu)吸道及(ji)腸(chang)道致病(bing)菌(jun)，可實(shi)現對(dui)臨床樣品及(ji)其(qi)他(ta)環(huan)境取樣的(de)快(kuai)速(su)檢(jian)測，整個(ge)檢(jian)測過程為(wei)3-4個(ge)小時(shi)。
    5.   優(you)勢(shi)1：序(xu)列資(zi)源豐(feng)富(fu)，除(chu)GenBank公(gong)布的(de)序(xu)列外(wai)，公(gong)司(si)還進(jin)行了(le)大(da)量菌(jun)株的(de)序(xu)列破譯(yi)，從(cong)理(li)論(lun)上保(bao)證所(suo)選(xuan)引物具有良(liang)好(hao)的(de)保(bao)守(shou)性(xing)和(he)特(te)異性(xing)。

    6.   優(you)勢(shi)2：該系(xi)列(lie)試(shi)劑盒均(jun)經(jing)過(guo)大(da)量的(de)保(bao)守(shou)性(xing)及(ji)特(te)異性(xing)實(shi)驗(yan)驗(yan)證(zheng)，憑(ping)借(jie)公(gong)司(si)擁有(you)的(de)豐(feng)富(fu)的(de)菌(jun)種資(zi)源，每壹(yi)種檢(jian)測試劑盒均(jun)經(jing)過(guo)了(le)20余(yu)種標(biao)準(zhun)菌(jun)株和臨(lin)床菌(jun)株的(de)保(bao)守(shou)性(xing)驗(yan)證(zheng)及(ji)40余(yu)種近(jin)緣標準(zhun)菌(jun)株和臨(lin)床菌(jun)株的(de)特(te)異性(xing)驗(yan)證(zheng)，確(que)保(bao)在使用(yong)過程(cheng)中不會(hui)出(chu)現任何(he)的(de)假(jia)陽性(xing)及(ji)假(jia)陰(yin)性(xing)報(bao)告(gao)結果(guo)。

反應(ying)五(wu)要(yao)素：
參加PCR反應(ying)的(de)物質(zhi)主要(yao)有五種即(ji)引物、酶、dNTP、模板(ban)和Mg2+
引物：引物是PCR特(te)異性(xing)反應(ying)的(de)關(guan)鍵，PCR 產(chan)物的(de)特(te)異性(xing)取決於引物與模板(ban)DNA互補的(de)程(cheng)度。理(li)論(lun)上，只要(yao)知(zhi)道任何(he)壹(yi)段(duan)模板(ban)DNA序(xu)列， 就(jiu)能按其(qi)設計(ji)互補的(de)寡(gua)核苷酸(suan)鏈做(zuo)引物，利用(yong)PCR就可將(jiang)模板(ban)DNA在體外大(da)量擴增。設計(ji)引物應(ying)遵循(xun)以(yi)下原(yuan)則(ze)：
①引物長度(du)： 15-30bp，常用(yong)為(wei)20bp左(zuo)右。
②引物擴增跨度(du)： 以(yi)200-500bp為(wei)宜(yi)，特(te)定(ding)條(tiao)件(jian)下(xia)可擴(kuo)增長至10kb的(de)片(pian)段(duan)。
③引物堿基：G+C含(han)量以(yi)40-60%為(wei)宜(yi)，G+C太少擴(kuo)增效果不佳(jia)，G+C過(guo)多(duo)易出現非特(te)異條(tiao)帶。ATGC隨機分布(bu)，避(bi)免5個(ge)以(yi)上的(de)嘌呤(ling)或嘧啶核(he)苷酸(suan)的(de)成(cheng)串排列(lie)。
④避(bi)免引物內(nei)部出現二(er)級結(jie)構，避(bi)免兩(liang)條引物間互補，特(te)別是3'端(duan)的(de)互補，否(fou)則(ze)會(hui)形成(cheng)引物二(er)聚體，產生(sheng)非特(te)異的(de)擴(kuo)增條帶(dai)。
⑤引物3'端的(de)堿(jian)基，特(te)別是末(mo)及(ji)倒(dao)數(shu)第二(er)個(ge)堿基(ji)，應(ying)嚴(yan)格(ge)要(yao)求配對(dui)，以(yi)避(bi)免因末端(duan)堿(jian)基不配(pei)對(dui)而(er)導致PCR失(shi)敗(bai)。
⑥引物中有或能加上合適的(de)酶(mei)切位點(dian)， 被擴(kuo)增的(de)靶(ba)序(xu)列有(you)適宜(yi)的(de)酶(mei)切位點(dian)， 這(zhe)對(dui)酶切分析或分(fen)子(zi)克隆很有(you)好(hao)處(chu)。
⑦引物的(de)特(te)異性(xing)：引物應(ying)與(yu)核(he)酸(suan)序(xu)列數(shu)據庫的(de)其(qi)它(ta)序(xu)列無(wu)明顯(xian)同(tong)源(yuan)性(xing)。
引物量：每條(tiao)引物的(de)濃(nong)度0.1～1umol或10～100pmol，以(yi)低引物量產生(sheng)所需(xu)要(yao)的(de)結(jie)果為(wei)好(hao)，引物濃(nong)度偏(pian)高(gao)會引起(qi)錯(cuo)配(pei)和(he)非特(te)異性(xing)擴(kuo)增，且可增加引物之間(jian)形(xing)成(cheng)二(er)聚體的(de)機會。

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