片姜(jiang)黃(huang)探針(zhen)法PCR鑒(jian)定試(shi)劑盒說(shuo)明書(shu)

儲(chu)存(cun)條件：
14℃或－20℃樣(yang)品(pin)收集(ji)、處理(li)及保(bao)存(cun)方法(fa)
1. 血清：使用(yong)不(bu)含(han)熱原和(he)內(nei)毒(du)素的試(shi)管(guan)，操(cao)作(zuo)過程中避(bi)免(mian)任(ren)何(he)細胞刺(ci)激(ji)，收(shou)集(ji)血液(ye)後(hou)，3000 轉離(li)心(xin)10 分鐘將血(xue)清和(he)紅(hong)細胞迅(xun)速小(xiao)心(xin)地(di)分離(li)。
2. 血漿：EDTA、檸檬(meng)酸(suan)鹽或肝素抗凝。3000 轉離(li)心(xin)30 分鐘取(qu)上清。
3. 細胞上(shang)清液：3000 轉離(li)心(xin)10 分鐘去(qu)除(chu)顆(ke)粒(li)和(he)聚(ju)合物。
4. 組織(zhi)勻漿：將(jiang)組織(zhi)加入(ru)適量生理(li)鹽水(shui)搗(dao)碎。3000 轉離(li)心(xin)10 分鐘取(qu)上清。
5. 保存(cun)：如果樣(yang)本收(shou)集(ji)後(hou)不(bu)及時檢測，請(qing)按壹次用(yong)量分(fen)裝，凍存(cun)於(yu)-20℃，避免反復凍融，在(zai)室(shi)溫(wen)下(xia)解(jie)凍並(bing)確(que)保(bao)樣(yang)品(pin)均勻地(di)充(chong)分(fen)解凍。

特點：
1. 即開即用(yong)，用(yong)戶(hu)只需(xu)要提(ti)供(gong)病(bing)毒(du)樣(yang)品(pin)。
2. 根據地(di)黃(huang)保守(shou)序列設計(ji)的專壹性引物(wu)，與相關病(bing)毒(du)無交叉(cha)反應(ying)。
3. 靈(ling)敏度可(ke)以(yi)達到幾百拷貝(bei)/反應(ying)。
4. 壹管(guan)式(shi)熒光(guang)定量(liang) PCR 檢測，避(bi)免後(hou)續汙(wu)染。
5. 本試(shi)劑盒足(zu)夠 50 次 20μL 反應(ying)體系的熒(ying)光(guang)定量(liang) PCR。
6. 本產(chan)品(pin)只適用(yong)於(yu)科(ke)研(yan)，不(bu)能(neng)用(yong)於(yu)臨(lin)床診斷(duan)。

使用(yong)方法(fa)：
壹、樣(yang)品(pin)采(cai)集(ji)：
1、食品(pin)樣(yang)品(pin)：樣(yang)品(pin)的采(cai)集(ji)與預培養(yang)按照樣(yang)品(pin)的采(cai)集(ji)與預培養(yang)按照《食品(pin)衛生微生(sheng)物(wu)學檢驗(yan)阪崎腸桿菌檢驗(yan)要求(qiu)進行(xing)。
2、血液樣(yang)品(pin)：用(yong)無菌(jun)註射(she)器抽(chou)取(qu)受檢者靜(jing)脈(mai)血2mL，註入(ru)無(wu)菌EDTA2Na(或檸檬(meng)酸(suan)鈉)抗凝管(guan)，立(li)即混(hun)勻。
3、糞便樣(yang)品(pin)：取(qu)糞便置於(yu)滅(mie)菌的收(shou)集(ji)管(guan)中送(song)檢。
4、病(bing)竈部(bu)位(wei)樣(yang)品(pin)：取(qu)發(fa)病(bing)部(bu)位(wei)新鮮(xian)滲出(chu)物(wu)、粘(zhan)液(ye)膿血送(song)檢。
壹、稀釋 PCR 陽性對照(zhao)（以 10E2-10E7 拷貝(bei)/μL 這 6 個 10 倍稀(xi)釋度為例(li)）
1. 註意(yi)：由於(yu)標(biao)準(zhun)品(pin)濃(nong)度非(fei)常高(gao)，因(yin)此(ci)下(xia)列稀釋操作(zuo)壹定要在(zai)獨立(li)的區(qu)域(yu)進行(xing)，千(qian)萬不(bu)能(neng)汙(wu)染樣(yang)品(pin)或本試(shi)劑盒的其他(ta)成分）。為(wei)增(zeng)加產(chan)品(pin)穩(wen)定性和(he)避(bi)免(mian)擴散傳(chuan)染性病(bing)原，本產(chan)品(pin)不(bu)提(ti)供(gong)活體樣(yang)品(pin)做陽性對照(zhao)，只提(ti)供(gong)可(ke)以(yi)直接使用(yong)的 DNA段作(zuo)為陽(yang)性對照(zhao)。
2. 標(biao)記(ji) 6 個離(li)心(xin)管(guan)，分(fen)別(bie)為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶(dai)芯槍頭(tou)分別(bie)加(jia)入(ru) 45 μL 熒光(guang) PCR 模板稀(xi)釋液（用(yong)帶(dai)芯槍頭(tou)，下(xia)同）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管(guan)中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E8 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性對照(zhao)，充(chong)分(fen)震蕩(dang) 1 分鐘，得1×10E7 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性對照(zhao)。放(fang)冰(bing)上(shang)待用(yong)。
5. 換槍頭(tou)，在(zai) 6 號(hao)管(guan)中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E7 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性對照(zhao)(上步稀釋所得(de))，充(chong)分(fen)震蕩(dang) 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性對照(zhao)。放(fang)冰(bing)上(shang)待用(yong)。
6. 換槍頭(tou)，在(zai) 5 號(hao)管(guan)中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性對照(zhao)到 5 號(hao)管(guan)中，充(chong)分(fen)震蕩(dang) 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝(bei)/μL 的陽(yang)性對照(zhao)。放(fang)冰(bing)上(shang)待用(yong)。
7. 重復上面(mian)的操(cao)作(zuo)直到(dao)得(de)到 6 個稀釋度的陽(yang)性對照(zhao)。放(fang)冰(bing)上(shang)待用(yong)。
註：上述樣(yang)品(pin)建議經過增菌後(hou)，收集(ji)培養(yang)物(wu)用(yong)於(yu)檢測。 
二、DNA提(ti)取(qu)：
可(ke)采(cai)用(yong)PCR試(shi)劑盒配(pei)備的DNA抽(chou)提(ti)液(ye)，按以下(xia)說(shuo)明進(jin)行DNA核酸(suan)的粗提(ti)。也(ye)可(ke)采(cai)購上(shang)海(hai)澤(ze)葉生(sheng)物科(ke)技(ji)有限(xian)公司(si)生(sheng)產(chan)的DNA提(ti)取(qu)試(shi)劑盒(過柱法-熒光(guang)配套)或其他(ta)合適的商(shang)業(ye)化(hua)產(chan)品(pin)，並(bing)按照相應(ying)試(shi)劑盒說(shuo)明進(jin)行操作(zuo)。
1、液體培養(yang)物(wu)：取(qu)液體培養(yang)物(wu)100μL加到1.5mL無菌離(li)心(xin)管(guan)中，8000rpm離(li)心(xin)3min，盡量吸(xi)棄上(shang)清，加入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上清5μL進行PCR反應(ying)。
2、固體培養(yang)物(wu)：挑(tiao)取(qu)單克隆(long)菌(jun)落與50μL DNA抽(chou)提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上清5μL進行PCR反應(ying)。
3、糞便樣(yang)品(pin)：挑取(qu)米粒大小(xiao)糞便於(yu)滅(mie)菌離(li)心(xin)管(guan)中，加(jia)入(ru)0.5mL生理(li)鹽水(shui)，振(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，13000rpm離(li)心(xin)3分鐘，棄上(shang)清，沈澱中加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上清5μL進行PCR反應(ying)。
4、其他(ta)液(ye)體標(biao)本：取(qu)標(biao)本2-3mL，13000rpm離(li)心(xin)3min，棄上清，沈澱中加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上清5μL進行PCR反應(ying)。
註：陽性對照(zhao)和(he)陰性對照(zhao)為已經抽(chou)提(ti)好的核(he)酸(suan)(無需提(ti)取(qu))，直接取(qu)5μL加入(ru)到(dao)反應(ying)體系中即可(ke)。由於(yu)陽(yang)性對照(zhao)濃(nong)度較(jiao)高(gao)，建(jian)議在(zai)樣(yang)品(pin)制(zhi)備區域(yu)加(jia)入(ru)陽(yang)性對照(zhao)。 
HA Others H5N1 甲(jia)型流(liu)感(gan) H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂(lie)解液(ye) (陽性對照(zhao)) 酞菁銅(tong)(II)(β-型)(>90.0%(T))Copper(II) Phthalocyanine (β-form)質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：>90.0%(T)

小鼠子細胞;U14三(1,3-二苯基(ji)-1,3-丙二酮基(ji))(1,10-鄰二氮雜菲(fei))銪(you)(Ⅲ)(>95.0%(T))Tris(1,3-diphenyl-1,3-propanedionato)(1,10-phenanthroline)europium(III)質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：>95.0%(T)

METAP2 Others Mouse 小鼠 METAP2 / MAP2 桿狀病(bing)毒(du)-昆蟲(chong)細胞裂(lie)解液(ye) (陽性對照(zhao)) 3-(2-苯並(bing)噻唑基(ji))-7-(二乙氨基(ji))(>98.0%(HPLC)(T))3-(2-Benzothiazolyl)-7-(diethylamino)coumarin質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：>98.0%(HPLC)(T)

CM-M001小鼠肺(fei)微血(xue)管(guan)內(nei)皮細胞*培養(yang)基(ji)100mL 3-(2-苯並(bing)咪(mi)唑基(ji))-7-(二乙氨基(ji))(>98.0%(T))3-(2-Benzimidazolyl)-7-(diethylamino)coumarin質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：>98.0%(T)

Hela, 人細胞系(xi) 小鼠成纖維(wei)細胞,3T3TK細胞 SPA-A1(肺(fei)腺(xian)癌(ai)細胞)4,4'-雙(5-甲(jia)基(ji)-2-苯並(bing)惡唑基(ji))芪(升(sheng)華提(ti))(>96.0%(HPLC))4,4'-Bis(5-methyl-2-benzoxazolyl)stilbene (purified by sublimation)質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：>96.0%(HPLC)
JEG-3(人絨(rong)毛(mao)膜癌細胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 IL-21R / Ierleukin-21 Receptor 人細胞裂(lie)解液(ye) (陽性對照(zhao)) 輪環藤(teng)寧(ning)四(si)乙酸(suan)/1,4,7,10-四(si)氮雜環(huan)十二烷-1,4,7,10-四(si)乙酸(suan)Tetraxetan/DOTA/1,4,7,10-Tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：>95%

人成骨(gu)肉瘤(liu)細胞;Saos-2p, p’-DDE(標(biao)準(zhun)品(pin))p, p’-DDE質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：分(fen)析(xi)標(biao)準(zhun)品(pin)

PPP3CA Others Human 人 PPP3CA / 桿狀病(bing)毒(du)-昆蟲(chong)細胞裂(lie)解液(ye) (陽性對照(zhao)) p, p’-DDE標(biao)準(zhun)溶液(ye)(100μg/ml,u=3%)p, p’-DDE solution質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：100μg/ml,u=3%

CL-0429Romas(人瘤細胞)5×106cells/瓶×2敵草腈(jing)(標(biao)準(zhun)品(pin))Dichlobenil質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：分(fen)析(xi)標(biao)準(zhun)品(pin)

人絨(rong)毛(mao)膜內皮細胞 人胚胎皮膚成纖維(wei)細胞，CCC-ESF-1細胞 Sol8(小鼠骨(gu)骼肌肌肉(rou)母(mu)細胞)乙二醇苯(標(biao)準(zhun)品(pin))Ethylene glycol monophenyl ether質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：分(fen)析(xi)標(biao)準(zhun)品(pin),≥99.5%(GC)
人急(ji)性母(mu)細胞性白血(xue)病(bing)細胞;MOLT-4（標(biao)準(zhun)品(pin)）Budesonide質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：HPLC>98%,標(biao)準(zhun)品(pin)

FGFR1 Others Human 人 FGFR1 / CD331 桿狀病(bing)毒(du)-昆蟲(chong)細胞裂(lie)解液(ye) (陽性對照(zhao)) 亞鈣(gai)Calcium Folinate質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：>98%，水(shui)合物,BR

CM-H110人皮膚肥(fei)大細胞*培養(yang)基(ji)100mL亞鈣(gai)（標(biao)準(zhun)品(pin)）Calcium Folinate質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：>98%,含(han)量測(ce)定

5-8F, 人高轉移(yi)鼻(bi)咽癌細胞系(xi) 瘤,EL4IL-2細胞 PC-12(大鼠腎上腺(xian)嗜(shi)鉻細胞瘤(liu))Camptothecin質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：> 99%,喜(xi)樹(shu)提(ti)取(qu)

小鼠漿細胞瘤(liu);MPC-11（標(biao)準(zhun)品(pin)）Camptothecin質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：HPLC≥99%,標(biao)準(zhun)品(pin)
片姜(jiang)黃(huang)探針(zhen)法PCR鑒定試(shi)劑盒說(shuo)明書(shu)CCL18 Protein Human 重組人 CCL18 / PARC / MIP4 蛋(dan)白 (His 標(biao)簽)偏釩酸(suan)鈉shēng huà shì jì容量：0.25毫(hao)升(sheng)

MCF-7(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 EpCAM / OP-1 / TACSTD1 人細胞裂(lie)解液(ye) (陽性對照(zhao)) 2,5-二溴 2,5-Dibromopyridinq 64-8-

貓腎細胞;CRFK正(zheng)shēng huà shì jì容量：100克

人顱骨(gu)造骨(gu)細胞 (HCO) ( 5×105 )馬(ma)丁肉(rou)湯shēng hu
實驗(yan)流程：
1. 整(zheng)個檢測過程應(ying)嚴格(ge)按照本說(shuo)明書(shu)要求(qiu)分別(bie)在(zai)試(shi)劑準(zhun)備區、樣(yang)本處理(li)區(qu)和(he)PCR擴增區進(jin)行操(cao)作，各(ge)區(qu)實驗(yan)服(fu)、儀(yi)器 、耗(hao)材應(ying)獨立(li)使(shi)用(yong)，不(bu)能(neng)混用(yong)；實驗(yan)用(yong)吸(xi)頭(tou)采(cai)用(yong)帶(dai)濾芯吸(xi)頭(tou)；樣(yang)本處理(li)區(qu)應(ying)配有生物(wu)安全(quan)櫃(gui)，樣(yang)本處理(li)在(zai)生物(wu)安全(quan)櫃(gui)中進(jin)行(xing)操作(zuo)；三(san)個區(qu)應(ying)該配(pei)有紫外線(xian)殺(sha)菌(jun)裝置。
2. 為避免RNA降解，樣(yang)本處理(li)過程應(ying)在(zai)0-4℃條件下(xia)操(cao)作(zuo)，且(qie)完(wan)成實驗(yan)後(hou)立即上(shang)機檢測；樣(yang)本處理(li)過程中使(shi)用(yong)的器具(ju)耗(hao)材應(ying)經過無核酶處理(li)。

3. 每(mei)次實(shi)驗(yan)應(ying)該設置陰、陽(yang)性對照(zhao)。
4. 試(shi)劑盒所(suo)有試(shi)劑在(zai)使用(yong)前應(ying)該在(zai)常溫(wen)下(xia)充(chong)分(fen)融化(hua)混(hun)勻(yun)，並(bing)應(ying)瞬(shun)時離(li)心(xin)。
5. 試(shi)劑盒內(nei)所(suo)配陰性和(he)陽(yang)性對照(zhao)在(zai)壹次使(shi)用(yong)前應(ying)全(quan)部轉移(yi)至標(biao)本準(zhun)備區，並(bing)單獨(du)存(cun)放(fang)。
6. 為防止熒(ying)光(guang)幹(gan)擾(rao)，應(ying)避免(mian)裸(luo)手(shou)直接接觸PCR反應(ying)管(guan)，並(bing)應(ying)避免(mian)在(zai)PCR反應(ying)管(guan)上(shang)進(jin)行(xing)任(ren)何(he)標(biao)記(ji)。
7. 儀(yi)器 擴增相關參數應(ying)按照本說(shuo)明書(shu)相(xiang)關要求(qiu)進行(xing)設置；不(bu)同批(pi)號(hao)試(shi)劑不(bu)能(neng)混用(yong)。
8. ABI系列熒光(guang)定量(liang)PCR儀(yi)參數設置中不(bu)選(xuan)ROX校正(zheng)，淬(cui)滅基(ji)因(yin)選(xuan)擇(ze)None。
9. 實驗(yan)過程中產(chan)品(pin)的廢(fei)棄(qi)物應(ying)該進(jin)行(xing)無(wu)害(hai)化(hua)處理(li)後(hou)方可(ke)丟(diu)棄。