炮姜PCR鑒定試劑盒(he)*

特(te)點(dian)：
1. 即(ji)開(kai)即(ji)用(yong)，用戶(hu)只需(xu)要提供(gong)病(bing)毒(du)樣品(pin)。
2. 根據地黃保守序列設計的(de)專壹(yi)性(xing)引物(wu)，與相關病(bing)毒(du)無(wu)交叉(cha)反應。
3. 靈敏(min)度(du)可(ke)以達到幾百拷貝(bei)/反(fan)應。
4. 壹(yi)管(guan)式(shi)熒光(guang)定量 PCR 檢(jian)測(ce)，避(bi)免(mian)後(hou)續(xu)汙(wu)染。
5. 本試劑盒(he)足(zu)夠(gou) 50 次 20μL 反(fan)應體(ti)系(xi)的(de)熒光(guang)定量 PCR。
6. 本產品(pin)只適用於科研，不能用(yong)於臨(lin)床(chuang)診斷。

使(shi)用(yong)方法：
壹(yi)、樣品(pin)采(cai)集：
1、食(shi)品(pin)樣品(pin)：樣品(pin)的(de)采(cai)集與(yu)預(yu)培(pei)養按照(zhao)樣品(pin)的(de)采(cai)集與(yu)預(yu)培(pei)養按照(zhao)《食(shi)品(pin)衛生微生物(wu)學(xue)檢(jian)驗阪(ban)崎(qi)腸(chang)桿(gan)菌(jun)檢(jian)驗要求(qiu)進行(xing)。
2、血液樣品(pin)：用無(wu)菌註射(she)器(qi)抽取(qu)受(shou)檢(jian)者(zhe)靜脈(mai)血2mL，註入(ru)無(wu)菌EDTA2Na(或(huo)檸(ning)檬(meng)酸鈉)抗凝管，立(li)即混勻(yun)。
3、糞(fen)便(bian)樣品(pin)：取(qu)糞(fen)便(bian)置(zhi)於滅菌(jun)的(de)收(shou)集(ji)管(guan)中送檢(jian)。
4、病(bing)竈(zao)部位(wei)樣品(pin)：取(qu)發(fa)病(bing)部位(wei)新(xin)鮮滲出物(wu)、粘液膿(nong)血送檢(jian)。
壹(yi)、稀(xi)釋(shi) PCR 陽性對(dui)照(zhao)（以 10E2-10E7 拷貝(bei)/μL 這 6 個 10 倍(bei)稀(xi)釋(shi)度(du)為例(li)）
1. 註意(yi)：由於標準(zhun)品(pin)濃(nong)度(du)非常高，因(yin)此(ci)下列稀釋(shi)操(cao)作(zuo)壹(yi)定(ding)要(yao)在(zai)獨(du)立的(de)區(qu)域(yu)進行(xing)，千萬(wan)不(bu)能汙(wu)染樣品(pin)或本試劑盒(he)的(de)其他成(cheng)分(fen)）。為(wei)增加(jia)產品(pin)穩(wen)定性(xing)和避(bi)免(mian)擴(kuo)散(san)傳(chuan)染性病(bing)原，本產品(pin)不提供(gong)活(huo)體(ti)樣品(pin)做陽性對(dui)照(zhao)，只(zhi)提(ti)供(gong)可(ke)以直(zhi)接(jie)使用(yong)的(de) DNA段(duan)作(zuo)為(wei)陽性對(dui)照(zhao)。
2. 標(biao)記(ji) 6 個離心(xin)管，分(fen)別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶(dai)芯槍頭(tou)分(fen)別加(jia)入(ru) 45 μL 熒光(guang) PCR 模(mo)板(ban)稀釋液（用帶(dai)芯槍頭(tou)，下同(tong)）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管(guan)中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E8 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性對(dui)照(zhao)，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de)1×10E7 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性對(dui)照(zhao)。放(fang)冰上待(dai)用。
5. 換(huan)槍頭(tou)，在(zai) 6 號(hao)管(guan)中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E7 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性對(dui)照(zhao)(上步(bu)稀釋所(suo)得(de))，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性對(dui)照(zhao)。放(fang)冰上待(dai)用。
6. 換(huan)槍頭(tou)，在(zai) 5 號(hao)管(guan)中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性對(dui)照(zhao)到(dao) 5 號(hao)管(guan)中，充分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E5 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性對(dui)照(zhao)。放(fang)冰上待(dai)用。
7. 重(zhong)復(fu)上面的(de)操(cao)作(zuo)直(zhi)到得(de)到 6 個稀(xi)釋度的(de)陽性對(dui)照(zhao)。放(fang)冰上待(dai)用。
註：上述(shu)樣品(pin)建議經過增菌後(hou)，收集培養物(wu)用於檢(jian)測(ce)。 
二(er)、DNA提(ti)取(qu)：
可(ke)采(cai)用PCR試劑盒(he)配(pei)備的(de)DNA抽提液，按以下說(shuo)明(ming)進行(xing)DNA核(he)酸的(de)粗(cu)提(ti)。也(ye)可采(cai)購(gou)上海澤葉(ye)生物(wu)科技有限(xian)公(gong)司(si)生(sheng)產的(de)DNA提(ti)取(qu)試劑盒(he)(過(guo)柱法(fa)-熒光(guang)配(pei)套(tao))或(huo)其他合(he)適的(de)商業化產品(pin)，並按(an)照(zhao)相(xiang)應試劑盒(he)說(shuo)明(ming)進行(xing)操(cao)作(zuo)。
1、液體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)：取(qu)液體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)100μL加(jia)到(dao)1.5mL無(wu)菌離心(xin)管中，8000rpm離心(xin)3min，盡(jin)量(liang)吸(xi)棄(qi)上清，加(jia)入(ru)50μL DNA抽提液充分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取(qu)上清5μL進行(xing)PCR反(fan)應。
2、固體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)：挑取(qu)單(dan)克(ke)隆(long)菌落與(yu)50μL DNA抽提液充分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取(qu)上清5μL進行(xing)PCR反(fan)應。
3、糞(fen)便(bian)樣品(pin)：挑取(qu)米(mi)粒(li)大小(xiao)糞(fen)便(bian)於滅菌(jun)離心(xin)管中，加(jia)入(ru)0.5mL生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)，振蕩(dang)混勻(yun)，13000rpm離心(xin)3分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)上清，沈(chen)澱中加(jia)入(ru)50μL DNA抽提液充分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取(qu)上清5μL進行(xing)PCR反(fan)應。
4、其他液體(ti)標(biao)本：取(qu)標(biao)本2-3mL，13000rpm離心(xin)3min，棄(qi)上清，沈(chen)澱中加(jia)入(ru)50μL DNA抽提液充分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取(qu)上清5μL進行(xing)PCR反(fan)應。
註：陽性對(dui)照(zhao)和(he)陰(yin)性對(dui)照(zhao)為(wei)已(yi)經抽提好的(de)核(he)酸(無(wu)需(xu)提取(qu))，直(zhi)接(jie)取(qu)5μL加(jia)入(ru)到(dao)反(fan)應體(ti)系(xi)中即可(ke)。由於陽性對(dui)照(zhao)濃(nong)度(du)較(jiao)高(gao)，建(jian)議在(zai)樣品(pin)制(zhi)備區(qu)域(yu)加(jia)入(ru)陽性對(dui)照(zhao)。 
實驗流(liu)程：
1. 整個檢(jian)測(ce)過程應嚴(yan)格按照(zhao)本說(shuo)明(ming)書(shu)要(yao)求(qiu)分(fen)別在(zai)試劑準(zhun)備區(qu)、樣本處理(li)區(qu)和(he)PCR擴(kuo)增(zeng)區(qu)進行(xing)操(cao)作(zuo)，各區(qu)實驗服(fu)、儀(yi)器(qi) 、耗(hao)材(cai)應獨(du)立(li)使用(yong)，不能混用(yong)；實驗用吸(xi)頭(tou)采(cai)用帶(dai)濾(lv)芯吸(xi)頭(tou)；樣本處理(li)區(qu)應配(pei)有生物(wu)安全櫃(gui)，樣本處理(li)在(zai)生(sheng)物(wu)安全櫃(gui)中進行(xing)操(cao)作(zuo)；三(san)個區(qu)應該(gai)配(pei)有紫外線(xian)殺(sha)菌裝(zhuang)置(zhi)。
2. 為(wei)避(bi)免(mian)RNA降解，樣本處理(li)過(guo)程(cheng)應在(zai)0-4℃條(tiao)件(jian)下操(cao)作(zuo)，且(qie)完(wan)成(cheng)實驗後立(li)即(ji)上機(ji)檢(jian)測(ce)；樣本處理(li)過(guo)程(cheng)中使用(yong)的(de)器(qi)具耗(hao)材(cai)應經(jing)過(guo)無(wu)核(he)酶(mei)處理(li)。
3. 每次實驗應該(gai)設(she)置(zhi)陰(yin)、陽性對(dui)照(zhao)。
4. 試劑盒(he)所(suo)有試劑在(zai)使(shi)用前應該(gai)在(zai)常溫下充(chong)分(fen)融(rong)化混勻(yun)，並應瞬(shun)時(shi)離心(xin)。
5. 試劑盒(he)內(nei)所(suo)配(pei)陰性(xing)和陽性對(dui)照(zhao)在(zai)壹(yi)次使(shi)用(yong)前(qian)應全(quan)部轉(zhuan)移(yi)至(zhi)標(biao)本準備區(qu)，並單(dan)獨存放(fang)。
6. 為(wei)防(fang)止(zhi)熒光(guang)幹擾(rao)，應避(bi)免(mian)裸手直(zhi)接(jie)接(jie)觸PCR反(fan)應管(guan)，並應避(bi)免(mian)在(zai)PCR反(fan)應管(guan)上進行(xing)任(ren)何(he)標(biao)記(ji)。
7. 儀(yi)器(qi) 擴(kuo)增(zeng)相(xiang)關參(can)數應按(an)照(zhao)本說(shuo)明(ming)書(shu)相(xiang)關要(yao)求進行(xing)設(she)置(zhi)；不(bu)同(tong)批(pi)號試劑不(bu)能混用(yong)。
8. ABI系(xi)列熒光(guang)定量PCR儀(yi)參數(shu)設置(zhi)中不選ROX校正，淬(cui)滅(mie)基因(yin)選擇(ze)None。
9. 實驗過程(cheng)中產品(pin)的(de)廢(fei)棄(qi)物(wu)應該(gai)進行(xing)無(wu)害化處理(li)後(hou)方可丟棄(qi)。
儲(chu)存條(tiao)件(jian)：
14℃或(huo)－20℃樣品(pin)收集、處理(li)及(ji)保存方法
1. 血清：使(shi)用不(bu)含(han)熱原和內(nei)毒(du)素(su)的(de)試管，操(cao)作(zuo)過(guo)程(cheng)中避(bi)免(mian)任(ren)何(he)細(xi)胞刺激(ji)，收集(ji)血液後，3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)將血清和(he)紅細(xi)胞迅(xun)速(su)小心(xin)地分(fen)離。
2. 血漿：EDTA、檸(ning)檬(meng)酸鹽(yan)或肝(gan)素(su)抗凝。3000 轉(zhuan)離心(xin)30 分(fen)鐘(zhong)取(qu)上清。
3. 細(xi)胞上清液：3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆(ke)粒(li)和聚合(he)物(wu)。
4. 組織(zhi)勻(yun)漿：將組織(zhi)加(jia)入(ru)適量生(sheng)理(li)鹽水搗(dao)碎(sui)。3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)取(qu)上清。
5. 保存：如果(guo)樣本收集(ji)後不(bu)及(ji)時(shi)檢(jian)測(ce)，請按壹次用(yong)量(liang)分(fen)裝(zhuang)，凍(dong)存於-20℃，避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融，在(zai)室(shi)溫下解凍(dong)並確(que)保樣品(pin)均勻地充分(fen)解凍(dong)。
Hacat 人永生化角(jiao)質細(xi)胞鳶(yuan)尾苷(gan)(標(biao)準(zhun)品(pin))Tectoridin質(zhi)量(liang)規格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

CM-R115大鼠(shu)小(xiao)梁(liang)網細(xi)胞*培(pei)養基(ji)100mL鳶(yuan)尾黃(huang)素(su)（標準(zhun)品(pin)）Tectorigenin質(zhi)量(liang)規格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

MDA-MB-231(ATCC來(lai)源(yuan)), 人癌(ai)細(xi)胞原B2(標(biao)準(zhun)品(pin))Procyanidin B2質(zhi)量(liang)規格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

EB病(bing)毒(du)轉(zhuan)化的(de)人B細(xi)胞;KMY0920 人皮膚(fu)肥大細(xi)胞*培(pei)養基(ji) 100mL原人參二(er)醇（標(biao)準品(pin)）Protopanaxdiol質(zhi)量(liang)規格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

中國倉鼠卵(luan)巢細(xi)胞系(xi);pDSr a2-mpl-X原人參三(san)醇(標(biao)準(zhun)品(pin))Protopanaxatriol質(zhi)量(liang)規格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)
CL-0382MDA-MB-415(人癌(ai)細(xi)胞)5×106cells/瓶×2丹(dan)酚酸B（標(biao)準(zhun)品(pin)）Salvianolic acid B質(zhi)量(liang)規格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

人結(jie)直(zhi)腸腺癌(ai)細(xi)胞;SW620 [SW 620;SW-620] 大鼠(shu)成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞*培(pei)養基(ji) 100mL丹(dan)酚酸C（標(biao)準(zhun)品(pin)）Salvianolic acid C質(zhi)量(liang)規格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

EAC 小(xiao)鼠(shu)艾(ai)氏(shi)腹水癌(ai)細(xi)胞丹(dan)酚酸D(標(biao)準(zhun)品(pin))Salvianolic acid D質(zhi)量(liang)規格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

IL17F Others Human 人 IL-17F / Ierleukin-17F 人細(xi)胞裂(lie)解液 (陽性對(dui)照(zhao)) 膽(dan)(標(biao)準(zhun)品(pin))Cholesterol質(zhi)量(liang)規格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

人晶體(ti)上皮細(xi)胞永生系;SRA01/04(HLE)膽(dan)Cholesterol質(zhi)量(liang)規格：>95%,BR
上皮細(xi)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)敵(di)稗(bai)標準(zhun)溶液(0.100mg/ml)質(zhi)量(liang)規格：0.100mg/mlPropanil solution

293sars181A細(xi)胞，Sars蛋(dan)白(bai)表(biao)達株 人細(xi)胞,HBL-100細(xi)胞 腎(shen)系(xi)膜(mo)細(xi)胞培(pei)養基(ji)MCM-prf伏(fu)殺(sha)(標(biao)準(zhun)品(pin))質(zhi)量(liang)規格：分(fen)析(xi)標準(zhun)品(pin)Phosalone

大額(e)牛皮膚(fu)成(cheng)纖(xian)維樣細(xi)胞;BOS-2（標(biao)準(zhun)品(pin)）質量規格：>98%,標(biao)準(zhun)品(pin)Probenecid

IL2RB Others Human 人 IL2Rβ 人細(xi)胞裂(lie)解液 (陽性對(dui)照(zhao)) 質(zhi)量(liang)規格：>99,USP,BR,可(ke)用(yong)於細(xi)胞培(pei)養Norfloxacin

CM-H020人胰島(dao)β細(xi)胞*培(pei)養基(ji)100mL（標(biao)準(zhun)品(pin)）質量規格：HPLC>98%,標(biao)準(zhun)品(pin)Norfloxacin
炮姜PCR鑒定試劑盒(he)*95-D細(xi)胞，人高轉(zhuan)移(yi)肺癌(ai)細(xi)胞 轉(zhuan)血小板(ban)基因(yin)倉鼠卵(luan)巢細(xi)胞,CHO-pt細(xi)胞 CM-M018小(xiao)鼠(shu)頜(he)下腺上皮細(xi)胞*培(pei)養基(ji)100mL（標(biao)準(zhun)品(pin)）質量規格：HPLC含(han)量測定(ding)Piperacillin

SCaBER(人膀胱鱗(lin)癌(ai)細(xi)胞) 5×106cells/瓶×2質(zhi)量(liang)規格：>95%,BRPiperacillin

Gibco 17001-074 TM-C100 Basal Medium,liquid 450ml鄰(lin)氯(lv) ;鈉(標(biao)準(zhun)品(pin))質(zhi)量(liang)規格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)Cloxacillin  S