燈(deng)心(xin)草(cao)探針(zhen)法PCR鑒定(ding)試劑(ji)盒(he)直(zhi)銷

實(shi)驗(yan)流(liu)程(cheng)：
1. 整個(ge)檢(jian)測(ce)過(guo)程(cheng)應(ying)嚴格(ge)按(an)照本說明(ming)書(shu)要求(qiu)分(fen)別(bie)在試(shi)劑(ji)準備(bei)區、樣(yang)本(ben)處理區和PCR擴增(zeng)區進(jin)行(xing)操作，各(ge)區實(shi)驗(yan)服、儀器(qi) 、耗材(cai)應(ying)獨(du)立使用(yong)，不(bu)能混用(yong)；實(shi)驗(yan)用(yong)吸(xi)頭采用(yong)帶(dai)濾(lv)芯(xin)吸(xi)頭；樣(yang)本(ben)處理區應(ying)配(pei)有(you)生(sheng)物(wu)安全櫃(gui)，樣(yang)本(ben)處理在生(sheng)物(wu)安全櫃(gui)中進(jin)行(xing)操作；三(san)個(ge)區應(ying)該配(pei)有(you)紫(zi)外(wai)線(xian)殺(sha)菌裝置。
2. 為避(bi)免(mian)RNA降解，樣(yang)本(ben)處理過(guo)程(cheng)應(ying)在0-4℃條(tiao)件(jian)下(xia)操作，且(qie)完(wan)成實(shi)驗(yan)後立即上機檢測(ce)；樣(yang)本(ben)處理過(guo)程(cheng)中(zhong)使(shi)用(yong)的器具(ju)耗材(cai)應(ying)經(jing)過(guo)無(wu)核(he)酶處(chu)理(li)。
3. 每(mei)次(ci)實(shi)驗(yan)應(ying)該設(she)置陰、陽性對(dui)照。
4. 試劑(ji)盒(he)所(suo)有(you)試(shi)劑(ji)在使(shi)用(yong)前(qian)應(ying)該在常(chang)溫(wen)下(xia)充(chong)分(fen)融(rong)化(hua)混(hun)勻，並(bing)應(ying)瞬(shun)時離(li)心(xin)。
5. 試劑(ji)盒(he)內(nei)所(suo)配(pei)陰(yin)性和陽性對(dui)照在壹次(ci)使(shi)用(yong)前(qian)應(ying)全部(bu)轉(zhuan)移(yi)至標本(ben)準備(bei)區，並單獨(du)存(cun)放(fang)。
6. 為防(fang)止(zhi)熒(ying)光幹(gan)擾(rao)，應(ying)避免(mian)裸手(shou)直接(jie)接觸(chu)PCR反(fan)應(ying)管，並(bing)應(ying)避免(mian)在PCR反(fan)應(ying)管上進(jin)行(xing)任(ren)何(he)標(biao)記(ji)。
7. 儀器(qi) 擴增(zeng)相(xiang)關(guan)參數(shu)應(ying)按(an)照本說明(ming)書(shu)相關(guan)要求(qiu)進(jin)行(xing)設(she)置；不同(tong)批號試劑(ji)不能(neng)混(hun)用(yong)。
8. ABI系列熒(ying)光定量PCR儀參數(shu)設(she)置中不選ROX校正(zheng)，淬(cui)滅(mie)基(ji)因(yin)選擇(ze)None。
9. 實(shi)驗(yan)過(guo)程(cheng)中(zhong)產(chan)品(pin)的廢棄(qi)物應(ying)該進(jin)行(xing)無(wu)害化(hua)處(chu)理後(hou)方(fang)可丟棄(qi)。

特點：
1. 即開即用(yong)，用(yong)戶(hu)只需(xu)要(yao)提(ti)供病毒樣(yang)品(pin)。
2. 根據(ju)地黃保守(shou)序列設計(ji)的專(zhuan)壹性引(yin)物(wu)，與(yu)相(xiang)關(guan)病毒無(wu)交叉(cha)反(fan)應(ying)。
3. 靈敏(min)度(du)可以達到幾百拷(kao)貝/反(fan)應(ying)。
4. 壹管(guan)式熒(ying)光定量 PCR 檢測(ce)，避(bi)免(mian)後續汙(wu)染。
5. 本試(shi)劑(ji)盒(he)足夠 50 次(ci) 20μL 反(fan)應(ying)體系(xi)的熒(ying)光定量 PCR。
6. 本產(chan)品(pin)只(zhi)適(shi)用(yong)於(yu)科(ke)研(yan)，不(bu)能用(yong)於(yu)臨(lin)床診斷。
使用(yong)方(fang)法：
壹、樣(yang)品(pin)采集：
1、食品(pin)樣(yang)品(pin)：樣(yang)品(pin)的采集(ji)與預培養(yang)按(an)照樣(yang)品(pin)的采集(ji)與預培養(yang)按(an)照《食品衛(wei)生微生(sheng)物(wu)學檢(jian)驗(yan)阪崎腸(chang)桿菌(jun)檢驗(yan)要求(qiu)進(jin)行(xing)。
2、血(xue)液樣(yang)品(pin)：用(yong)無(wu)菌註射(she)器抽(chou)取受(shou)檢(jian)者(zhe)靜(jing)脈(mai)血(xue)2mL，註入(ru)無菌(jun)EDTA2Na(或檸檬(meng)酸(suan)鈉(na))抗(kang)凝(ning)管，立即混(hun)勻。
3、糞便(bian)樣(yang)品(pin)：取糞便(bian)置於(yu)滅(mie)菌(jun)的收(shou)集管中送檢(jian)。
4、病竈部(bu)位(wei)樣(yang)品(pin)：取發病部位(wei)新鮮滲出物、粘液膿(nong)血(xue)送檢(jian)。
壹、稀(xi)釋 PCR 陽性對(dui)照（以 10E2-10E7 拷貝(bei)/μL 這 6 個 10 倍稀(xi)釋(shi)度(du)為例）
1. 註意(yi)：由於(yu)標(biao)準(zhun)品(pin)濃(nong)度非常(chang)高(gao)，因(yin)此(ci)下(xia)列稀釋(shi)操作壹定(ding)要在獨(du)立的區域進(jin)行(xing)，千萬(wan)不能(neng)汙(wu)染樣(yang)品(pin)或本試(shi)劑(ji)盒的其(qi)他成分(fen)）。為增加產(chan)品(pin)穩定(ding)性和避免(mian)擴散(san)傳(chuan)染(ran)性病原，本產品(pin)不提(ti)供活(huo)體(ti)樣(yang)品(pin)做陽性對(dui)照，只提供(gong)可以直接(jie)使(shi)用(yong)的 DNA段作為(wei)陽(yang)性對(dui)照。
2. 標記(ji) 6 個離(li)心(xin)管，分(fen)別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭分(fen)別(bie)加入(ru) 45 μL 熒(ying)光 PCR 模(mo)板(ban)稀(xi)釋(shi)液（用(yong)帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭，下(xia)同(tong)）。
4. 在 7 號管中(zhong)加入(ru) 5 μL 1×10E8 拷貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照，充分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得(de)1×10E7 拷貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照。放冰(bing)上待(dai)用(yong)。
5. 換(huan)槍(qiang)頭，在 6 號管中(zhong)加入(ru) 5 μL 1×10E7 拷貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照(上步(bu)稀釋所(suo)得(de))，充分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得(de) 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照。放冰(bing)上待(dai)用(yong)。
6. 換(huan)槍(qiang)頭，在 5 號管中(zhong)加入(ru) 5 μL 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照到 5 號管中(zhong)，充分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得(de) 1×10E5 拷貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照。放冰(bing)上待(dai)用(yong)。
7. 重復(fu)上面(mian)的操作直(zhi)到得(de)到 6 個稀(xi)釋(shi)度(du)的陽性對(dui)照。放冰(bing)上待(dai)用(yong)。
註：上述(shu)樣(yang)品(pin)建議經(jing)過(guo)增(zeng)菌(jun)後，收(shou)集培養物用(yong)於(yu)檢(jian)測(ce)。 
二(er)、DNA提取(qu)：
可采(cai)用(yong)PCR試劑(ji)盒(he)配(pei)備(bei)的DNA抽提(ti)液，按(an)以下(xia)說(shuo)明進(jin)行(xing)DNA核酸(suan)的粗提(ti)。也可采(cai)購上海(hai)澤(ze)葉生(sheng)物科(ke)技有限(xian)公(gong)司生產的DNA提取(qu)試(shi)劑(ji)盒(過(guo)柱法-熒(ying)光配(pei)套(tao))或其(qi)他合(he)適(shi)的商業化(hua)產(chan)品，並(bing)按(an)照相應(ying)試劑(ji)盒說(shuo)明進(jin)行(xing)操作。
1、液體培(pei)養物(wu)：取(qu)液體培(pei)養物(wu)100μL加到1.5mL無菌(jun)離(li)心(xin)管中，8000rpm離(li)心(xin)3min，盡量吸(xi)棄(qi)上清(qing)，加入(ru)50μL DNA抽提(ti)液充分(fen)混勻，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
2、固體(ti)培(pei)養(yang)物：挑(tiao)取單克(ke)隆菌(jun)落與50μL DNA抽提(ti)液充分(fen)混勻，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
3、糞便(bian)樣(yang)品(pin)：挑(tiao)取米(mi)粒大小糞便於(yu)滅(mie)菌(jun)離(li)心(xin)管中，加(jia)入0.5mL生理(li)鹽(yan)水(shui)，振(zhen)蕩混(hun)勻，13000rpm離(li)心(xin)3分(fen)鐘，棄(qi)上清(qing)，沈澱(dian)中加(jia)入(ru)50μL DNA抽提(ti)液充分(fen)混勻，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
4、其(qi)他液體標(biao)本：取(qu)標(biao)本(ben)2-3mL，13000rpm離(li)心(xin)3min，棄(qi)上清(qing)，沈澱(dian)中加(jia)入(ru)50μL DNA抽提(ti)液充分(fen)混勻，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
註：陽(yang)性對(dui)照和陰性對(dui)照為已(yi)經(jing)抽(chou)提好的核酸(suan)(無需(xu)提(ti)取(qu))，直接(jie)取(qu)5μL加入(ru)到反(fan)應(ying)體系(xi)中即(ji)可。由於(yu)陽(yang)性對(dui)照濃(nong)度較高，建議在樣(yang)品(pin)制(zhi)備(bei)區域加入陽(yang)性對(dui)照。 
HBE(人支(zhi)氣(qi)管(guan)上皮(pi)樣(yang)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 軟骨(gu)細(xi)胞(bao)培養基CM去噻(sai)唑基(ji)甲(jia)基 Desthiazolylmethyl Ritonavir質量規格(ge)：美國進(jin)口(kou)

腎動(dong)脈(mai)平滑肌細(xi)胞(bao)Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)N-去甲(jia)基(ji)-d4N-Desmethyl Rosiglitazone-d4質量規格(ge)：美國進(jin)口(kou)

RPRD1B Others Human 人 RPRD1B 人細(xi)胞(bao)裂解液 (陽性對(dui)照) （鉀(jia)鹽）Rosiglitazone (potassium salt)質量規格(ge)：美國進(jin)口(kou)

小鼠(shu)腹水(shui)瘤細(xi)胞(bao);S-180鹽酸(suan)鹽(yan)rosiglitazone 質量規格(ge)：美國進(jin)口(kou)

HPAEC細(xi)胞(bao)，人肺動(dong)脈(mai)內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao) 猴(hou)腎細(xi)胞(bao)系,BSC-1細(xi)胞(bao) CL-0082F9(小鼠(shu)畸(ji)胎(tai)瘤細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶×25-羥基(ji)5-Hydroxy Rosiglitazone質量規格(ge)：美國進(jin)口(kou)
人口腔(qiang)角(jiao)質細(xi)胞(bao)(HOK)( 5×105 ) NSC，大鼠神經(jing)幹(gan)細(xi)胞(bao) Rattus9-(2-羥丙(bing)基(ji)-d6)腺嘌(piao)呤(ling)9-[2-(Hydroxypropyl-d6] Adenine質量規格(ge)：美國進(jin)口(kou)

猴(hou)腎細(xi)胞(bao);Vero IgCD4(R)-9-(2-羥丙(bing)基(ji))腺嘌(piao)呤(ling)(R)-9-[2-(Hydroxypropyl] Adenine質量規格(ge)：美國進(jin)口(kou)

FST Others Mouse 小鼠(shu) Follistatin / FST 人細(xi)胞(bao)裂解液 (陽性對(dui)照) 3-1酸(suan)甘(gan)油酸(suan)激(ji)酶(mei)3-Phosphoglyceric Phosphokinase質量規格(ge)：1000u/mg,Sigma分(fen)裝

HPB-ALL(懸浮) T細(xi)胞(bao)白血(xue)病1,5-二(er)1酸(suan)-D-核酮(tong)糖(tang)/1,5二(er)1酸(suan)核(he)酮(tong)糖(tang)d-ribulose 1,5-diphosphate/RuDP質量規格(ge)：90.0%,Sigma

769-P人腎細(xi)胞(bao)腺癌細(xi)胞(bao) 769-P human renal cell carcima cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS酸(suan)性蛋(dan)白酶；蛋(dan)白酶來自佐(zuo)氏(shi)曲(qu)黴(mei)Acidic Protease from Aspergillus 質量規格(ge)：BR,50u/mg
OLFM4 Others Human 人 OLFM4 / Olfactomedin-4 人細(xi)胞(bao)裂解液 (陽性對(dui)照) 氘代DMSO-D6(0.6ml x 10 )質量規格(ge)：D,99.9%Dimethyl Sulfoxide-D6

CM-H053人平滑肌細(xi)胞(bao)*培養基100mL氘代DMSO-D6(10 g )質量規格(ge)：D,99.8%+TMS 0.03%Dimethyl Sulfoxide-D6

DIRAS3 Others Human 人 ARHI / DIRAS3 人細(xi)胞(bao)裂解液 (陽性對(dui)照) 蛋(dan)白酶K(進(jin)分(fen))質量規格(ge)：≥30units/mg protein,sigma分(fen)裝Proteinase K

人海(hai)馬星形膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞(bao)HA-h蛋(dan)白酶K(Sigma)質量規格(ge)：≥30units/mg protein,sigma原裝Proteinase K

Hs 181.Tes細(xi)胞(bao)，正(zheng)常(chang)人細(xi)胞(bao) 人癌細(xi)胞(bao),HCC1937細(xi)胞(bao) 平滑肌細(xi)胞(bao)培養基SMCM-sf抑制(zhi)劑(ji)質(zhi)量規格(ge)：進(jin)分(fen)Chymostatin
燈(deng)心(xin)草(cao)探針(zhen)法PCR鑒定(ding)試(shi)劑(ji)盒直銷人脂(zhi)肪微血(xue)管內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)HAMEC抗(kang)壞血(xue)酸(suan)；維(wei)生素C質量規格(ge)：AR;>99%Ascorbic acid；vitamin C

CD274 Others Cymolgus 食蟹(xie)猴(hou) / 恒河(he)猴(hou) PD-L1 / B7-H1 / CD274 人細(xi)胞(bao)裂解液 (陽性對(dui)照) 維生(sheng)素C(標準(zhun)品(pin))質量規格(ge)：含量測定(ding)Ascorbic acid；vitamin C

非洲(zhou)綠(lv)猴(hou)腎細(xi)胞(bao);VERO十(shi)八胺(an); 十(shi)八烷基胺(an); 硬脂(zhi)胺質(zhi)量規格(ge)：AROctadecanamine

NCI-H157細(xi)胞(bao)，人非小(xiao)細(xi)胞(bao)肺腺癌細(xi)胞(bao) 小鼠(shu)肉瘤細(xi)胞(bao),S-180細(xi)胞(bao)
儲存(cun)條(tiao)件(jian)：
14℃或－20℃樣(yang)品(pin)收(shou)集、處理及(ji)保存(cun)方(fang)法
1. 血(xue)清：使(shi)用(yong)不(bu)含熱原和內(nei)毒素的試管(guan)，操作過(guo)程(cheng)中(zhong)避(bi)免(mian)任何(he)細(xi)胞(bao)刺激(ji)，收(shou)集血(xue)液後，3000 轉離(li)心(xin)10 分(fen)鐘將血(xue)清和紅細(xi)胞(bao)迅(xun)速小(xiao)心地分(fen)離(li)。
2. 血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸檬(meng)酸(suan)鹽(yan)或肝素抗(kang)凝(ning)。3000 轉離(li)心(xin)30 分(fen)鐘取上清(qing)。
3. 細(xi)胞(bao)上清(qing)液：3000 轉離(li)心(xin)10 分(fen)鐘去除(chu)顆(ke)粒(li)和聚合(he)物(wu)。
4. 組織(zhi)勻漿(jiang)：將組織(zhi)加入適(shi)量生理(li)鹽水(shui)搗碎(sui)。3000 轉離(li)心(xin)10 分(fen)鐘取上清(qing)。
5. 保存(cun)：如(ru)果(guo)樣(yang)本(ben)收(shou)集後不及(ji)時檢(jian)測(ce)，請按(an)壹次(ci)用(yong)量分(fen)裝，凍存(cun)於(yu)-20℃，避免(mian)反(fan)復凍融(rong)，在室(shi)溫(wen)下(xia)解凍並確(que)保樣(yang)品(pin)均勻地充分(fen)解凍。