明黨(dang)參染料法(fa)PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑(ji)盒(he)保(bao)存

儲存條(tiao)件：
14℃或－20℃樣品收(shou)集、處(chu)理及保存方(fang)法(fa)
1. 血清：使(shi)用不含熱原(yuan)和(he)內(nei)毒(du)素(su)的試(shi)管，操作過程中(zhong)避(bi)免任(ren)何(he)細胞(bao)刺激(ji)，收(shou)集血(xue)液(ye)後，3000 轉離心(xin)10 分鐘(zhong)將(jiang)血清和(he)紅(hong)細胞(bao)迅(xun)速(su)小心(xin)地(di)分離。
2. 血漿(jiang)：EDTA、檸檬(meng)酸鹽或肝素抗(kang)凝。3000 轉離心(xin)30 分鐘(zhong)取上清。
3. 細胞(bao)上(shang)清液(ye)：3000 轉離心(xin)10 分鐘(zhong)去除顆(ke)粒(li)和(he)聚(ju)合(he)物(wu)。
4. 組(zu)織勻漿(jiang)：將(jiang)組(zu)織加(jia)入(ru)適量(liang)生(sheng)理鹽水(shui)搗(dao)碎。3000 轉離心(xin)10 分鐘(zhong)取上清。
5. 保存：如(ru)果樣本收(shou)集後(hou)不及時檢測，請按壹次用量分裝，凍(dong)存於(yu)-20℃，避免反復凍(dong)融，在(zai)室溫(wen)下(xia)解(jie)凍(dong)並確保(bao)樣品均勻地(di)充(chong)分解(jie)凍(dong)。

特(te)點(dian)：
1. 即開即用，用戶只需(xu)要提(ti)供(gong)病(bing)毒(du)樣(yang)品。
2. 根(gen)據地(di)黃保守序(xu)列(lie)設計(ji)的專壹性(xing)引(yin)物(wu)，與相關病(bing)毒(du)無(wu)交(jiao)叉(cha)反(fan)應。
3. 靈敏(min)度可(ke)以達(da)到幾百拷(kao)貝(bei)/反應(ying)。
4. 壹管式(shi)熒(ying)光(guang)定量(liang) PCR 檢測，避(bi)免後續汙(wu)染。
5. 本試(shi)劑(ji)盒(he)足夠(gou) 50 次 20μL 反應(ying)體(ti)系(xi)的熒(ying)光(guang)定量(liang) PCR。
6. 本產(chan)品只適用於(yu)科(ke)研(yan)，不(bu)能(neng)用於(yu)臨(lin)床診(zhen)斷。

使(shi)用方法(fa)：
壹、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集(ji)與預培(pei)養(yang)按(an)照(zhao)樣品的采集(ji)與預培(pei)養(yang)按(an)照(zhao)《食品衛生(sheng)微(wei)生(sheng)物學(xue)檢驗阪崎(qi)腸(chang)桿(gan)菌(jun)檢驗要求(qiu)進行(xing)。
2、血液(ye)樣品：用無(wu)菌(jun)註射(she)器抽取受(shou)檢者靜脈(mai)血(xue)2mL，註入(ru)無(wu)菌(jun)EDTA2Na(或檸(ning)檬(meng)酸鈉)抗凝管，立(li)即混(hun)勻。
3、糞(fen)便樣(yang)品：取糞(fen)便置(zhi)於(yu)滅(mie)菌(jun)的(de)收(shou)集管中(zhong)送(song)檢。
4、病(bing)竈部(bu)位(wei)樣品：取發病(bing)部(bu)位(wei)新鮮(xian)滲(shen)出(chu)物、粘(zhan)液(ye)膿(nong)血(xue)送(song)檢。
壹、稀釋 PCR 陽性(xing)對(dui)照(zhao)（以 10E2-10E7 拷貝(bei)/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為(wei)例）
1. 註意：由(you)於(yu)標準品濃度非(fei)常高(gao)，因(yin)此(ci)下列(lie)稀釋操作壹定要(yao)在(zai)獨立(li)的(de)區(qu)域(yu)進行，千萬(wan)不能(neng)汙(wu)染樣品或本試(shi)劑(ji)盒(he)的(de)其他(ta)成分）。為(wei)增加產(chan)品穩定性(xing)和(he)避(bi)免擴(kuo)散傳(chuan)染性(xing)病(bing)原(yuan)，本產(chan)品不提供(gong)活(huo)體(ti)樣品做陽性(xing)對(dui)照(zhao)，只提(ti)供(gong)可(ke)以直(zhi)接使(shi)用的 DNA段(duan)作為(wei)陽性(xing)對(dui)照(zhao)。
2. 標記(ji) 6 個離心(xin)管，分別(bie)為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍(qiang)頭分別(bie)加(jia)入(ru) 45 μL 熒(ying)光(guang) PCR 模板稀釋液(ye)（用帶芯槍(qiang)頭，下(xia)同）。
4. 在(zai) 7 號管中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E8 拷貝(bei)/μL 的陽性(xing)對(dui)照(zhao)，充(chong)分震蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得(de)1×10E7 拷貝(bei)/μL 的陽性(xing)對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待(dai)用。
5. 換槍(qiang)頭，在(zai) 6 號管中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E7 拷貝(bei)/μL 的陽性(xing)對(dui)照(zhao)(上步(bu)稀釋所得(de))，充(chong)分震蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得(de) 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的陽性(xing)對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待(dai)用。
6. 換槍(qiang)頭，在(zai) 5 號管中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的陽性(xing)對(dui)照(zhao)到 5 號管中(zhong)，充(chong)分震蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得(de) 1×10E5 拷貝(bei)/μL 的陽性(xing)對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待(dai)用。
7. 重(zhong)復上(shang)面(mian)的操作直(zhi)到得(de)到 6 個稀釋度的(de)陽性(xing)對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待(dai)用。
註：上(shang)述(shu)樣(yang)品建議(yi)經(jing)過增菌後，收(shou)集培(pei)養(yang)物(wu)用於(yu)檢測。 
二、DNA提取：
可采(cai)用PCR試(shi)劑(ji)盒(he)配(pei)備的(de)DNA抽提(ti)液(ye)，按以下說明進(jin)行DNA核(he)酸的粗提。也(ye)可采(cai)購(gou)上(shang)海澤葉生(sheng)物科(ke)技(ji)有(you)限公司(si)生(sheng)產(chan)的(de)DNA提取試(shi)劑(ji)盒(he)(過柱法(fa)-熒(ying)光(guang)配套(tao))或其(qi)他(ta)合(he)適的(de)商(shang)業(ye)化(hua)產(chan)品，並按照(zhao)相應試(shi)劑(ji)盒(he)說明進(jin)行操作。
1、液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)：取液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)100μL加到1.5mL無(wu)菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，8000rpm離心(xin)3min，盡量(liang)吸棄上清，加入(ru)50μL DNA抽提(ti)液(ye)充(chong)分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心(xin)3min，取上清5μL進行(xing)PCR反應(ying)。
2、固(gu)體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)：挑(tiao)取單克隆菌落(luo)與50μL DNA抽提(ti)液(ye)充(chong)分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心(xin)3min，取上清5μL進行(xing)PCR反應(ying)。
3、糞(fen)便樣(yang)品：挑(tiao)取米(mi)粒(li)大(da)小糞(fen)便於(yu)滅(mie)菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，加(jia)入(ru)0.5mL生(sheng)理鹽水(shui)，振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻，13000rpm離心(xin)3分鐘(zhong)，棄上清，沈澱(dian)中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽提(ti)液(ye)充(chong)分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心(xin)3min取上清5μL進行(xing)PCR反應(ying)。
4、其他(ta)液(ye)體(ti)標本：取標本2-3mL，13000rpm離心(xin)3min，棄上清，沈澱(dian)中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽提(ti)液(ye)充(chong)分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心(xin)3min取上清5μL進行(xing)PCR反應(ying)。
註：陽性(xing)對(dui)照(zhao)和(he)陰(yin)性(xing)對(dui)照(zhao)為已經(jing)抽(chou)提(ti)好的(de)核(he)酸(無(wu)需(xu)提取)，直(zhi)接取5μL加入(ru)到反(fan)應體(ti)系(xi)中(zhong)即可。由(you)於(yu)陽性(xing)對(dui)照(zhao)濃度較(jiao)高(gao)，建議(yi)在(zai)樣品制(zhi)備(bei)區域(yu)加(jia)入(ru)陽性(xing)對(dui)照(zhao)。 
人胰腺腺(xian)泡上(shang)皮(pi)癌(ai);HPAC滅草(cao)煙(yan),咪唑(zuo)Imazapyr acid質量(liang)規格：>98%

EPHB4 Others Human 人 EphB4 / HTK (aa 563-987) 桿(gan)狀(zhuang)病(bing)毒(du)-昆蟲細胞裂解(jie)液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) 咪唑(zuo)(標準品)Imazapyr acid質量(liang)規格：HPLC>99%,標準品

RDFs, 大(da)鼠成(cheng)纖維細胞(bao)石(shi)膽酸(標準品)Lithocholic Acid質量(liang)規格：>97(GC),標準品

rRTEC, 大(da)鼠腎小(xiao)管上皮(pi)細胞(bao) [CIP 104786]細胞(bao) 293 [HEK-293] (人胚腎細(xi)胞(bao))氧嗪酸鉀(jia)Potassium Oxonate質量(liang)規格：>98%

人T瘤轉基(ji)因細(xi)胞(bao);Jurkat D,E氧嗪酸鉀(jia)(標準品)Potassium Oxonate質量(liang)規格：>98%,標準品
非洲(zhou)綠(lv)猴(hou)腎細(xi)胞(bao);VERO E6α-促(cu)激(ji)素(su)α-MSH質量(liang)規格：>95%,BR

SEMA3A Others Mouse 小鼠(shu) Semaphorin 3A / SEMA3A 人細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) β-澱(dian)粉(fen)樣(yang)蛋白(1-42),人β-Amyloid Peptide (1-42), human質量(liang)規格：>95%,BR

HOS 骨肉(rou)瘤[Nle8’18,Tyr34]-甲狀(zhuang)旁腺(xian)激(ji)素(su)(7-34)酰(xian)胺(an) (牛(niu))[Nle8’18,Tyr34]-pTH (7-34) amide (bovine)質量(liang)規格：>95%,BR

NCI-H460 [H460]人大(da)細胞(bao)肺癌(ai)細胞(bao) NCI-H460 [H460] large cell lung cancer cell 1640+10% FBS[Phe2,Orn8]-催(cui)產(chan)素(su)[Phe2,Orn8]-Oxytocin質量(liang)規格：>95%,BR

VEGFC Protein Rat 重(zhong)組(zu)大(da)鼠 VEGFC / VEGF-C 蛋白 (aa 108-223, His 標簽(qian))[Ser4,Ile8]-催(cui)產(chan)素(su)[Ser4,Ile8]-Oxytocin質量(liang)規格：>95%,BR
IL25 Protein Mouse 重(zhong)組(zu)小鼠(shu) IL25 蛋白 (His 標簽(qian))天(tian)狼猩(xing)紅(hong)質量(liang)規格：BSDirect red 80

人神經(jing)系(xi)統周(zhou)邊(bian)細胞(bao) (HPNC)( 5×105 ) 小鼠(shu)海(hai)馬(ma)神經(jing)膠(jiao)質細(xi)胞(bao)(EGFP標記(ji)) MouseDL-苯(ben)(>98%，BC)質量(liang)規格：>98%，BCDL-alpha-Phenylglycine

CM-H081人主(zhu)動(dong)脈(mai)平滑(hua)肌(ji)細胞*培(pei)養(yang)基(ji)100mL丁草(cao)胺(an)標準溶液(ye)(0.100mg/ml)質量(liang)規格：0.100mg/mlButachlor solution

IFNA2 Others Cymolgus 食蟹猴(hou) IFNA2 / Ierferon alpha 2 人細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) 丁草(cao)胺(an)(標準品)質量(liang)規格：分析標準品,95%Butachlor

人成(cheng)纖(xian)維細胞(bao)HLF丁草(cao)胺(an)標準溶液(ye)(100μg/ml,u=4%)質量(liang)規格：100μg/ml,u=4%Butachlor solution
明黨(dang)參染料法(fa)PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑(ji)盒(he)保(bao)存SERPINF2 Others Mouse 小鼠(shu) SerpinF2 人細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) N-三苯(ben)甲基(ji)洛(luo)沙坦(洛(luo)沙坦雜質(zhi)H)質量(liang)規格：美(mei)國(guo)進(jin)口(kou)N-Trityl Losartan (Losartan Impurity H)

軟骨細(xi)胞(bao)Many types of cells包(bao)裝：5 × 105方(1ml)洛(luo)沙坦-d3質量(liang)規格：美(mei)國(guo)進(jin)口(kou)Losartan-d3

JTB Others Human 人 Jumping anslocation Breakpoi / JTB 人細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) 羧酸洛(luo)沙坦質量(liang)
實驗流程：
1. 整個(ge)檢測過程應(ying)嚴格按(an)照(zhao)本說明書要求(qiu)分別(bie)在(zai)試(shi)劑(ji)準備區(qu)、樣本處(chu)理區(qu)和(he)PCR擴(kuo)增區進行操作，各區實驗服(fu)、儀(yi)器 、耗材應獨立(li)使(shi)用，不能混(hun)用；實驗用吸頭采(cai)用帶濾(lv)芯(xin)吸(xi)頭；樣(yang)本處(chu)理區(qu)應配有生(sheng)物安(an)全(quan)櫃，樣本處(chu)理在(zai)生(sheng)物安(an)全(quan)櫃中(zhong)進(jin)行(xing)操作；三(san)個區(qu)應(ying)該(gai)配(pei)有紫外(wai)線殺(sha)菌(jun)裝置(zhi)。
2. 為避(bi)免RNA降(jiang)解(jie)，樣本處(chu)理過程應(ying)在(zai)0-4℃條(tiao)件下操作，且完(wan)成(cheng)實(shi)驗後立(li)即上機(ji)檢測；樣(yang)本處(chu)理過程中(zhong)使(shi)用的器具(ju)耗材應經(jing)過無(wu)核(he)酶(mei)處(chu)理。

3. 每次(ci)實(shi)驗應該設置(zhi)陰(yin)、陽性(xing)對(dui)照(zhao)。
4. 試(shi)劑(ji)盒(he)所(suo)有試(shi)劑(ji)在(zai)使(shi)用前(qian)應(ying)該(gai)在(zai)常溫下充(chong)分融(rong)化(hua)混(hun)勻，並應瞬時離心(xin)。
5. 試(shi)劑(ji)盒(he)內(nei)所(suo)配(pei)陰(yin)性(xing)和(he)陽性(xing)對(dui)照(zhao)在(zai)壹次使(shi)用前(qian)應(ying)全(quan)部(bu)轉移至(zhi)標本準備區(qu)，並單獨存放(fang)。
6. 為防(fang)止(zhi)熒(ying)光(guang)幹擾(rao)，應避(bi)免裸(luo)手直(zhi)接接(jie)觸(chu)PCR反應(ying)管，並應避(bi)免在(zai)PCR反應(ying)管上進行任(ren)何(he)標記(ji)。
7. 儀(yi)器 擴(kuo)增相關參數(shu)應(ying)按照(zhao)本說明書相關要求(qiu)進行(xing)設置(zhi)；不同批(pi)號(hao)試(shi)劑(ji)不(bu)能(neng)混(hun)用。
8. ABI系(xi)列(lie)熒(ying)光(guang)定量(liang)PCR儀(yi)參數(shu)設(she)置(zhi)中(zhong)不(bu)選ROX校(xiao)正，淬(cui)滅(mie)基(ji)因選擇(ze)None。
9. 實驗過程中(zhong)產(chan)品的廢棄物應(ying)該(gai)進(jin)行無(wu)害(hai)化處(chu)理後(hou)方可丟棄。