威靈仙(xian)PCR鑒定(ding)試劑盒(he)*

特點(dian)：
1. 即開即用(yong)，用(yong)戶(hu)只(zhi)需(xu)要(yao)提(ti)供病(bing)毒(du)樣(yang)品(pin)。
2. 根據(ju)地(di)黃保(bao)守(shou)序(xu)列設計(ji)的專壹性(xing)引物(wu)，與(yu)相(xiang)關病毒無(wu)交叉反應(ying)。
3. 靈敏度可(ke)以(yi)達到幾百(bai)拷貝/反應(ying)。
4. 壹管(guan)式(shi)熒(ying)光定(ding)量(liang) PCR 檢測，避免後(hou)續汙染。
5. 本試劑盒(he)足夠(gou) 50 次 20μL 反應(ying)體系(xi)的熒(ying)光定(ding)量(liang) PCR。
6. 本產(chan)品(pin)只(zhi)適(shi)用(yong)於(yu)科(ke)研，不能用(yong)於(yu)臨(lin)床診斷(duan)。

使用(yong)方(fang)法(fa)：
壹、樣(yang)品(pin)采(cai)集：
1、食(shi)品(pin)樣(yang)品(pin)：樣(yang)品(pin)的采(cai)集與(yu)預培養按照樣(yang)品(pin)的采(cai)集與(yu)預培養按照《食(shi)品(pin)衛生(sheng)微(wei)生(sheng)物學(xue)檢(jian)驗阪崎(qi)腸桿(gan)菌(jun)檢(jian)驗(yan)要(yao)求進行。
2、血液(ye)樣(yang)品(pin)：用無(wu)菌註射器抽取受(shou)檢(jian)者靜脈(mai)血2mL，註入(ru)無菌(jun)EDTA2Na(或(huo)檸檬(meng)酸(suan)鈉)抗凝(ning)管(guan)，立即混(hun)勻(yun)。
3、糞便樣(yang)品(pin)：取糞便置(zhi)於(yu)滅菌的收(shou)集管(guan)中(zhong)送檢。
4、病竈部(bu)位(wei)樣(yang)品(pin)：取發(fa)病(bing)部位新(xin)鮮(xian)滲(shen)出(chu)物、粘(zhan)液(ye)膿(nong)血送(song)檢(jian)。
壹、稀釋(shi) PCR 陽性(xing)對照（以(yi) 10E2-10E7 拷貝/μL 這(zhe) 6 個 10 倍(bei)稀釋(shi)度(du)為(wei)例(li)）
1. 註意(yi)：由於(yu)標準品(pin)濃度(du)非常高(gao)，因(yin)此下列稀釋(shi)操(cao)作(zuo)壹定(ding)要(yao)在(zai)獨(du)立(li)的區(qu)域進行，千萬不能汙(wu)染樣(yang)品(pin)或(huo)本試劑盒(he)的其他(ta)成分）。為(wei)增(zeng)加產品(pin)穩定(ding)性(xing)和避(bi)免(mian)擴(kuo)散傳(chuan)染性(xing)病原(yuan)，本(ben)產(chan)品(pin)不提供活(huo)體樣(yang)品(pin)做陽性(xing)對照，只(zhi)提(ti)供可(ke)以(yi)直接使用(yong)的 DNA段(duan)作(zuo)為陽性(xing)對照。
2. 標記 6 個離(li)心(xin)管(guan)，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶(dai)芯槍(qiang)頭(tou)分別加入(ru) 45 μL 熒(ying)光 PCR 模板(ban)稀釋(shi)液(ye)（用(yong)帶(dai)芯槍頭，下同）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管(guan)中(zhong)加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性(xing)對照，充分震(zhen)蕩 1 分鐘(zhong)，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性(xing)對照。放冰(bing)上(shang)待用(yong)。
5. 換槍(qiang)頭，在(zai) 6 號(hao)管(guan)中(zhong)加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性(xing)對照(上(shang)步稀釋(shi)所(suo)得)，充分震(zhen)蕩 1 分鐘(zhong)，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性(xing)對照。放冰(bing)上(shang)待用(yong)。
6. 換槍(qiang)頭，在(zai) 5 號(hao)管(guan)中(zhong)加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性(xing)對照到 5 號(hao)管(guan)中(zhong)，充分震(zhen)蕩 1 分鐘(zhong)，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性(xing)對照。放冰(bing)上(shang)待用(yong)。
7. 重復(fu)上(shang)面(mian)的操作(zuo)直到得(de)到 6 個稀釋(shi)度(du)的陽性(xing)對照。放冰(bing)上(shang)待用(yong)。
註：上(shang)述(shu)樣(yang)品(pin)建(jian)議經過(guo)增(zeng)菌後(hou)，收(shou)集培(pei)養(yang)物用於(yu)檢(jian)測。 
二(er)、DNA提取：
可(ke)采(cai)用PCR試劑盒(he)配備(bei)的DNA抽提(ti)液，按(an)以(yi)下說(shuo)明(ming)進行DNA核(he)酸(suan)的粗提(ti)。也可(ke)采(cai)購上(shang)海澤(ze)葉生(sheng)物科(ke)技(ji)有(you)限公司(si)生(sheng)產的DNA提取試劑盒(he)(過柱(zhu)法(fa)-熒(ying)光配套)或(huo)其他(ta)合適(shi)的商(shang)業(ye)化產(chan)品(pin)，並(bing)按(an)照相(xiang)應(ying)試劑盒(he)說明(ming)進行操作(zuo)。
1、液體培養(yang)物：取液體培養(yang)物100μL加到(dao)1.5mL無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，8000rpm離(li)心(xin)3min，盡量(liang)吸棄上(shang)清，加(jia)入50μL DNA抽提(ti)液充分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取上(shang)清5μL進行PCR反應(ying)。
2、固(gu)體培養(yang)物：挑(tiao)取單克(ke)隆菌(jun)落與(yu)50μL DNA抽提(ti)液充分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取上(shang)清5μL進行PCR反應(ying)。
3、糞便樣(yang)品(pin)：挑取米(mi)粒(li)大(da)小糞便於(yu)滅菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，加入0.5mL生(sheng)理(li)鹽(yan)水，振蕩混勻(yun)，13000rpm離(li)心(xin)3分鐘(zhong)，棄上(shang)清，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加入50μL DNA抽提(ti)液充分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取上(shang)清5μL進行PCR反應(ying)。
4、其他(ta)液體標本：取標本2-3mL，13000rpm離(li)心(xin)3min，棄上(shang)清，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加入50μL DNA抽提(ti)液充分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取上(shang)清5μL進行PCR反應(ying)。
註：陽性(xing)對照和陰性(xing)對照為已經抽提好(hao)的核(he)酸(suan)(無需(xu)提取)，直接取5μL加入(ru)到反(fan)應(ying)體系(xi)中(zhong)即可(ke)。由於(yu)陽性(xing)對照濃度(du)較高(gao)，建(jian)議在(zai)樣(yang)品(pin)制備(bei)區(qu)域加入(ru)陽性(xing)對照。 
實(shi)驗(yan)流程：
1. 整個檢測過程應嚴格按照本說(shuo)明(ming)書要(yao)求分別在(zai)試劑準備(bei)區(qu)、樣(yang)本處理(li)區(qu)和PCR擴增(zeng)區(qu)進行操作(zuo)，各區(qu)實(shi)驗(yan)服(fu)、儀器 、耗材(cai)應獨立使用(yong)，不能混(hun)用(yong)；實(shi)驗(yan)用吸頭(tou)采(cai)用帶(dai)濾(lv)芯(xin)吸頭(tou)；樣(yang)本處理(li)區(qu)應配有(you)生(sheng)物安全櫃，樣(yang)本處理(li)在(zai)生(sheng)物安全櫃中(zhong)進行操作(zuo)；三個區(qu)應該配(pei)有(you)紫外線(xian)殺菌裝置。
2. 為避(bi)免RNA降(jiang)解，樣(yang)本處理(li)過程應(ying)在(zai)0-4℃條(tiao)件(jian)下操(cao)作(zuo)，且(qie)完成實(shi)驗(yan)後(hou)立即上(shang)機(ji)檢(jian)測；樣(yang)本處理(li)過程中(zhong)使用(yong)的器具耗材(cai)應經過無(wu)核(he)酶(mei)處理(li)。
3. 每次實(shi)驗(yan)應該設置(zhi)陰、陽性(xing)對照。
4. 試劑盒(he)所(suo)有(you)試劑在(zai)使用(yong)前應該(gai)在(zai)常溫(wen)下充分融(rong)化混(hun)勻(yun)，並(bing)應(ying)瞬時(shi)離(li)心(xin)。
5. 試劑盒(he)內所(suo)配陰性(xing)和陽性(xing)對照在(zai)壹次使用(yong)前應全(quan)部(bu)轉移至(zhi)標本準備(bei)區(qu)，並(bing)單獨(du)存(cun)放。
6. 為防(fang)止熒(ying)光幹(gan)擾(rao)，應避(bi)免(mian)裸(luo)手(shou)直接接觸(chu)PCR反應(ying)管(guan)，並(bing)應(ying)避免在(zai)PCR反應(ying)管(guan)上(shang)進行任何標記。
7. 儀器 擴增(zeng)相(xiang)關參(can)數(shu)應(ying)按(an)照本說(shuo)明(ming)書相(xiang)關要(yao)求進行設置；不同批(pi)號(hao)試劑不能混(hun)用(yong)。
8. ABI系(xi)列熒(ying)光定(ding)量(liang)PCR儀參(can)數(shu)設(she)置(zhi)中(zhong)不選ROX校(xiao)正，淬(cui)滅基(ji)因(yin)選擇None。
9. 實(shi)驗(yan)過程中(zhong)產品(pin)的廢棄物應(ying)該進行無害(hai)化處(chu)理(li)後(hou)方(fang)可(ke)丟(diu)棄。
儲存(cun)條(tiao)件(jian)：
14℃或(huo)－20℃樣(yang)品(pin)收(shou)集、處(chu)理(li)及保存方(fang)法(fa)
1. 血清(qing)：使用(yong)不含(han)熱(re)原(yuan)和內毒素(su)的試管(guan)，操作(zuo)過程(cheng)中(zhong)避免任何(he)細(xi)胞刺(ci)激(ji)，收(shou)集血液(ye)後(hou)，3000 轉離(li)心(xin)10 分鐘(zhong)將(jiang)血清(qing)和(he)紅細(xi)胞迅速小心(xin)地分離(li)。
2. 血漿(jiang)：EDTA、檸檬(meng)酸(suan)鹽(yan)或(huo)肝(gan)素(su)抗(kang)凝(ning)。3000 轉離(li)心(xin)30 分鐘(zhong)取上(shang)清。
3. 細(xi)胞上(shang)清液(ye)：3000 轉離(li)心(xin)10 分鐘(zhong)去(qu)除顆粒(li)和聚(ju)合(he)物。
4. 組(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)：將(jiang)組(zu)織(zhi)加入適(shi)量(liang)生(sheng)理(li)鹽(yan)水搗(dao)碎。3000 轉離(li)心(xin)10 分鐘(zhong)取上(shang)清。
5. 保存(cun)：如(ru)果(guo)樣(yang)本收(shou)集後(hou)不及時檢測，請按壹次用(yong)量(liang)分裝，凍存(cun)於(yu)-20℃，避免(mian)反復(fu)凍融(rong)，在(zai)室(shi)溫(wen)下解凍並(bing)確(que)保樣(yang)品(pin)均勻(yun)地充分解凍。
TNFSF13B Protein Cymolgus 重組(zu)食(shi)蟹(xie)猴 BLyS / TNFSF13B / BAFF 蛋(dan)白(bai) (Fc 標簽(qian))米(mi)那普(pu)侖(lun)鹽(yan)酸鹽(yan)(標準品(pin))Milnacipran質(zhi)量(liang)規格：HPLC>98%,標準品(pin)

人(ren)角(jiao)膜(mo)上(shang)皮細(xi)胞 (HcorF)( 5×105 ) 293T, SV40轉化的人(ren)胚(pei)腎上(shang)皮細(xi)胞系(xi) Human丁苯那嗪(qin)Tetrabenazine質(zhi)量(liang)規格：>99%

人(ren)胰(yi)腺導(dao)管(guan)癌(ai)細(xi)胞;CFPAC-1丁苯那嗪(qin)(標準品(pin))Tetrabenazine質(zhi)量(liang)規格：HPLC>98%,標準品(pin)

BMPR1B Others Human 人(ren) BMPR1B / ALK-6 (149-502) 桿(gan)狀(zhuang)病(bing)毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細(xi)胞裂(lie)解液 (陽性(xing)對照) 氨己(ji)1酸Vigabatrin質(zhi)量(liang)規格：>99%

CM-R070大(da)鼠(shu)尿(niao)道(dao)上(shang)皮細(xi)胞*培(pei)養基(ji)100mLO-去(qu)甲*(D,L)O-Desmethylvenlaine(DL)質(zhi)量(liang)規格：>98%
IL16 Protein Human 重組(zu)人(ren) IL16 / Ierleukin-16 蛋(dan)白(bai) (His 標簽(qian))Mo-POC泰諾(nuo)福韋Mo-POC Tefovir質(zhi)量(liang)規格：美(mei)國進口(kou)

人(ren)成纖(xian)維(wei)細(xi)胞 (HLF)( 5×105 ) 細(xi)胞名(ming)稱(cheng) 種(zhong)屬N-去(qu)甲基(ji)特比(bi)萘芬N-Desmethyl Terbinafine質(zhi)量(liang)規格：美(mei)國進口(kou)

非洲(zhou)綠猴腎細(xi)胞;VERO C1008 (E6)(Z) 4-羥基(ji)乙(yi)基(ji)它莫西(xi)芬(fen)-d5(Z) 4-Hydroxy Tamoxifen Ethyl-d5質(zhi)量(liang)規格：美(mei)國進口(kou)

KDR Others Human 人(ren) VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解液 (陽性(xing)對照) (E/Z)-N,N-二(er)去(qu)甲基(ji)-4-羥基(ji)它莫西(xi)芬(fen)(E/Z)-N,N-Didesmethyl-4-hydroxy Tamoxifen質(zhi)量(liang)規格：美(mei)國進口(kou)

HO-8910 人(ren)卵(luan)巢(chao)癌(ai)細(xi)胞4'-羥基(ji)它莫西(xi)芬(fen)4'-Hydroxy Tamoxifen質(zhi)量(liang)規格：美(mei)國進口(kou)
IL20 Protein Human 重組(zu)人(ren) IL20 / Ierleukin-20 蛋(dan)白(bai)3-奎寧(ning)醇(chun)（標準品(pin)）質(zhi)量(liang)規格：檢查(zha)用(yong)3-quinuclidil

SNU-5(人(ren)胃癌(ai)細(xi)胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 293(轉染腺病毒E1A基(ji)因(yin)的人(ren)腎上(shang)皮細(xi)胞)普伐(fa)他(ta)汀四(si)甲基(ji)丁胺（標準品(pin)）質(zhi)量(liang)規格：含(han)量(liang)測定(ding)Pravastatin1,1,3,3-tetramethylbutylamine

CL-000422RV1(人(ren)前列腺癌(ai)細(xi)胞)5×106cells/瓶(ping)×2*（標準品(pin)）質(zhi)量(liang)規格：含(han)量(liang)測定(ding)Itopride

FKBP14 Others Human 人(ren) FKBP14 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解液 (陽性(xing)對照) *（標準品(pin)）質(zhi)量(liang)規格：含(han)量(liang)測定(ding)Fosipril

尿(niao)道(dao)上(shang)皮細(xi)胞生(sheng)長(chang)添加(jia)物(wu)UCGS鹽(yan)酸*（標準品(pin)）質(zhi)量(liang)規格：>98%,標準品(pin)Venlaine
威靈仙(xian)PCR鑒定(ding)試劑盒(he)*EPCAM Others Human 人(ren) EpCAM 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解液 (陽性(xing)對照) 雙草酰二(er)腙(zong)shēng huà shì jì容量(liang)：500克(ke)

人(ren)皮膚(fu)色素瘤(liu)細(xi)胞;SK-MEL-12,6-二(er)異(yi)炳(bing)基(ji)本安(an) 2,6-Diisopropylcnilinq 4244/4/2

PDCD1LG2 Others Mouse 小鼠(shu) B7-DC / PD-L2 / CD273 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解液 (陽性(xing)對照) 聚(ju)(甲基(ji)酸)，英(ying)文名(ming)或(huo)英(ying)文縮(suo)寫：PMMA，級別：3.5N，規格：1克(ke)

Eca-109 人(ren)食(shi)管(guan)癌(ai)細(xi)胞重(zhong)1克(ke)保(bao)存：-20℃

HOS人(ren)