化(hua)膿(nong)放(fang)線菌(jun)PCR檢測(ce)試劑(ji)盒(he)說明(ming)書

化膿(nong)放(fang)線菌(jun)PCR檢測(ce)試劑(ji)盒(he)說明(ming)書組(zu)成及試劑(ji)配(pei)制(zhi):
1、 酶(mei)標板：壹塊(kuai)（96孔）
2、 標準(zhun)品(pin)（凍(dong)幹品）： 2瓶，請臨用前(qian)15分(fen)鐘(zhong)內配(pei)制(zhi)。每(mei)瓶以樣品(pin)稀釋(shi)液稀釋(shi)至0.5ml，蓋好(hao)後室(shi)溫(wen)靜置(zhi)大(da)約10分鐘(zhong)，同(tong)時(shi)反復(fu)顛(dian)倒(dao)/搓動(dong)以助(zhu)溶(rong)解，其(qi)濃(nong)度(du)為200 U/L，然(ran)後做(zuo)系列(lie)倍比稀釋(shi)（註(zhu)：不(bu)要(yao)直(zhi)接在(zai)板中進(jin)行(xing)倍比稀釋(shi)），分別配(pei)制(zhi)成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋(shi)液直(zhi)接作(zuo)為空白(bai)孔(kong) 0 U/L。如(ru)配制(zhi)100 U/L標準(zhun)品(pin)：取0.3ml （不(bu)要(yao)少(shao)於(yu)0.3ml ）200 U/L的(de)上述(shu)標準(zhun)品(pin)加(jia)入(ru)含(han)有(you)0.3ml樣品稀釋(shi)液的(de)Eppendorf管中(zhong)，混勻(yun)即可(ke)，其(qi)余濃(nong)度(du)以此(ci)類(lei)推。
3、 化(hua)膿(nong)放(fang)線菌(jun)PCR檢測(ce)試劑(ji)盒(he)說明(ming)書樣(yang)品稀釋(shi)液：1×20ml。
4、 檢測(ce)稀釋(shi)液A：1×10ml。
5、 檢測(ce)稀釋(shi)液B：1×10ml。

樣(yang)本采(cai)集、存(cun)放(fang)及運(yun)輸(shu)：
1、化(hua)膿(nong)放(fang)線菌(jun)PCR檢測(ce)試劑(ji)盒(he)說明(ming)書樣(yang)本采(cai)集：各類(lei)型樣本按(an)照(zhao)常(chang)規方法采(cai)集；
2、存(cun)放(fang)：樣本(ben)在(zai)2~8℃條(tiao)件(jian)下(xia)保存(cun)應不(bu)超過(guo)72h，-70℃以下(xia)可保(bao)存(cun)，但應避(bi)免(mian)反復(fu)凍(dong)融（zui多(duo)凍(dong)融3次(ci)）；
3、運輸(shu)：采(cai)用泡(pao)沫(mo)箱(xiang)加(jia)冰密封進行(xing)運輸(shu)。

特點優(you)勢：
    1.特異性(xing)：所(suo)有產(chan)品使(shi)用的(de)引物(wu)均(jun)經(jing)過(guo)詳盡的(de)生物(wu)信(xin)息學(xue)分析，經(jing)過(guo)GenBank及自建龐大(da)數據庫的(de)比對，確保(bao)所(suo)用的(de)每壹(yi)條引物(wu)均(jun)為種屬(shu)或血(xue)清(qing)型特異的(de)基因序(xu)列(lie)區段，可(ke)實(shi)現對細菌(jun)種屬(shu)及血(xue)清(qing)型的(de)特異檢測(ce)，特異性(xing)均(jun)達(da)到100%。
    2.   重現性(xing)：該(gai)系列(lie)所(suo)有產(chan)品均(jun)經(jing)過(guo)大(da)量(liang)實驗菌(jun)株(zhu)的(de)驗證(zheng)，重現(xian)性為100%。
    3.   靈敏(min)性：該(gai)系列(lie)產(chan)品可(ke)實(shi)現(xian)對檢測(ce)菌(jun)的(de)高靈(ling)敏(min)檢測(ce)，當樣品中(zhong)細(xi)菌(jun)的(de)濃(nong)度(du)達到103cfu/ml時(shi)，可(ke)實現對其(qi)的(de)直接檢測(ce)，無(wu)需繁瑣的(de)增菌過(guo)程(cheng)。
    4.   實(shi)用性：檢測(ce)範(fan)圍廣(guang)，涵(han)蓋了(le)對人體(ti)危害較為嚴重(zhong)的(de)17種呼吸(xi)道(dao)及腸道致(zhi)病菌(jun)，可(ke)實現(xian)對臨床(chuang)樣品及其(qi)他(ta)環境(jing)取樣(yang)的(de)快(kuai)速檢測(ce)，整個(ge)檢測(ce)過(guo)程(cheng)為3-4個(ge)小(xiao)時(shi)。
    5.   優(you)勢1：序(xu)列(lie)資源(yuan)豐(feng)富(fu)，除GenBank公(gong)布(bu)的(de)序(xu)列(lie)外(wai)，公司還(hai)進(jin)行(xing)了大(da)量(liang)菌株(zhu)的(de)序(xu)列(lie)破譯(yi)，從(cong)理論上(shang)保(bao)證所(suo)選引物(wu)具(ju)有(you)良好(hao)的(de)保守(shou)性和(he)特異性(xing)。

    6.   優(you)勢2：該(gai)系列(lie)試劑(ji)盒(he)均(jun)經(jing)過(guo)大(da)量(liang)的(de)保守(shou)性及(ji)特異性(xing)實(shi)驗驗證，憑(ping)借公司擁(yong)有的(de)豐(feng)富(fu)的(de)菌種資源(yuan)，每(mei)壹種檢測(ce)試劑(ji)盒(he)均(jun)經(jing)過(guo)了20余(yu)種標準(zhun)菌(jun)株(zhu)和(he)臨床(chuang)菌株(zhu)的(de)保守(shou)性驗(yan)證及40余種近緣(yuan)標準(zhun)菌(jun)株(zhu)和(he)臨床(chuang)菌株(zhu)的(de)特異性(xing)驗(yan)證，確保在(zai)使(shi)用過(guo)程(cheng)中(zhong)不(bu)會(hui)出現任(ren)何(he)的(de)假陽性(xing)及假(jia)陰(yin)性(xing)報(bao)告結(jie)果(guo)。

反應(ying)五(wu)要(yao)素：
參加(jia)PCR反應(ying)的(de)物(wu)質(zhi)主(zhu)要(yao)有(you)五(wu)種即引物(wu)、酶(mei)、dNTP、模板和(he)Mg2+
引物(wu)：引物(wu)是(shi)PCR特異性(xing)反應(ying)的(de)關(guan)鍵(jian)，PCR 產(chan)物(wu)的(de)特異性(xing)取(qu)決於引物(wu)與(yu)模板DNA互(hu)補(bu)的(de)程(cheng)度(du)。理論上(shang)，只(zhi)要(yao)知道任(ren)何(he)壹(yi)段模(mo)板DNA序(xu)列(lie)， 就(jiu)能(neng)按(an)其(qi)設(she)計互(hu)補(bu)的(de)寡(gua)核(he)苷酸鏈做(zuo)引物(wu)，利用PCR就(jiu)可(ke)將模板DNA在(zai)體(ti)外(wai)大(da)量(liang)擴增。設(she)計引物(wu)應(ying)遵(zun)循以下(xia)原則：
①引物(wu)長(chang)度(du)： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物(wu)擴增跨(kua)度(du)： 以200-500bp為宜(yi)，特定條(tiao)件(jian)下(xia)可擴增長(chang)至10kb的(de)片段。
③引物(wu)堿基：G+C含量(liang)以40-60%為宜(yi)，G+C太少(shao)擴增效果(guo)不(bu)佳(jia)，G+C過(guo)多易(yi)出現非特異條(tiao)帶(dai)。ATGC隨(sui)機(ji)分布(bu)，避(bi)免(mian)5個(ge)以上的(de)嘌呤(ling)或嘧(mi)啶(ding)核苷(gan)酸的(de)成串排(pai)列。
④避免(mian)引物(wu)內部出現二級(ji)結(jie)構(gou)，避免(mian)兩(liang)條引物(wu)間互(hu)補(bu)，特別是(shi)3'端(duan)的(de)互(hu)補(bu)，否則會(hui)形(xing)成引物(wu)二(er)聚(ju)體(ti)，產(chan)生非(fei)特異的(de)擴增條帶(dai)。
⑤引物(wu)3'端(duan)的(de)堿基，特別是(shi)末(mo)及倒(dao)數第二個(ge)堿基，應嚴(yan)格(ge)要(yao)求配對，以避免(mian)因末(mo)端(duan)堿基不(bu)配對而導致(zhi)PCR失敗(bai)。
⑥引物(wu)中(zhong)有(you)或能(neng)加(jia)上合(he)適的(de)酶(mei)切位(wei)點， 被(bei)擴增的(de)靶序(xu)列(lie)有適宜(yi)的(de)酶(mei)切位(wei)點， 這(zhe)對酶(mei)切分析或(huo)分子克隆很(hen)有(you)好(hao)處(chu)。
⑦引物(wu)的(de)特異性(xing)：引物(wu)應(ying)與(yu)核酸序(xu)列(lie)數據庫的(de)其(qi)它(ta)序(xu)列(lie)無(wu)明(ming)顯(xian)同(tong)源(yuan)性(xing)。
引物(wu)量(liang)：每條引物(wu)的(de)濃(nong)度(du)0.1～1umol或10～100pmol，以低引物(wu)量(liang)產(chan)生所(suo)需要(yao)的(de)結果(guo)為好(hao)，引物(wu)濃(nong)度(du)偏(pian)高會(hui)引起(qi)錯配(pei)和(he)非(fei)特異性(xing)擴增，且(qie)可(ke)增加(jia)引物(wu)之(zhi)間形成二聚體(ti)的(de)機(ji)會(hui)。

CCDC83 卷(juan)曲螺旋(xuan)結(jie)構(gou)域蛋白(bai)83抗(kang)體(ti)

CRMP5 二氫(qing)嘧(mi)啶(ding)酶(mei)相關(guan)蛋白(bai)5抗(kang)體(ti)

Phospho-CRMP2 (Thr514+Ser518) 磷酸化二氫(qing)嘧(mi)啶(ding)酶(mei)樣2抗(kang)體(ti)

CRMP4 腦衰(shuai)蛋白(bai)反應(ying)調(tiao)節(jie)蛋白(bai)4抗(kang)體(ti)

CCDC87 卷曲螺旋(xuan)結(jie)構(gou)域蛋白(bai)87抗(kang)體(ti)

CCDC92 卷曲螺旋(xuan)結(jie)構(gou)域蛋白(bai)92抗(kang)體(ti)

CHCHD8 卷曲螺旋(xuan)結(jie)構(gou)域蛋白(bai)CHCHD8抗(kang)體(ti)

CCDC88B 大(da)腦拉鏈結構(gou)域蛋白(bai)抗(kang)體(ti)

CCDC93 卷曲螺旋(xuan)結(jie)構(gou)域蛋白(bai)93抗(kang)體(ti)

CCDC96 卷曲螺旋(xuan)結(jie)構(gou)域蛋白(bai)96抗(kang)體(ti)

CHCHD5 卷曲螺旋(xuan)結(jie)構(gou)域蛋白(bai)CHCHD5抗(kang)體(ti)

CHCHD6 卷曲螺旋(xuan)結(jie)構(gou)域蛋白(bai)CHCHD6抗(kang)體(ti)

CHCHD6 卷曲螺旋(xuan)結(jie)構(gou)域蛋白(bai)CHCHD6抗(kang)體(ti)

CEND1 細胞(bao)周(zhou)期(qi)通道和(he)神經(jing)細(xi)胞(bao)分化蛋白(bai)1抗(kang)體(ti)

COLEC10(liver) 凝(ning)集蛋白(bai)家(jia)族10抗(kang)體(ti)（肝）

COMMD7 銅(tong)代(dai)謝(xie)結(jie)構(gou)域蛋白(bai)7抗(kang)體(ti)

COMMD4 COMM結構(gou)域蛋白(bai)4抗(kang)體(ti)

COBLL1 Cordon bleu蛋白(bai)樣(yang)1抗(kang)體(ti)

COLEC11 凝(ning)集蛋白(bai)家(jia)族11抗(kang)體(ti)

COMMD1 銅(tong)代(dai)謝(xie)結(jie)構(gou)域蛋白(bai)1抗(kang)體(ti)

C20orf96 20號染(ran)色(se)體(ti)開(kai)放(fang)閱(yue)讀框96抗(kang)體(ti)

C3orf26 3號染(ran)色(se)體(ti)開(kai)放(fang)閱(yue)讀框26抗(kang)體(ti)

CADM2 細胞(bao)粘(zhan)附(fu)分子(zi)2抗(kang)體(ti)

COBL 耳(er)聾(long)-甲狀(zhuang)腺腫(zhong)綜合(he)征(zheng)相(xiang)關(guan)COBL蛋白(bai)抗(kang)體(ti)

化膿(nong)放(fang)線菌(jun)PCR檢測(ce)試劑(ji)盒(he)說明(ming)書C20orf195 20號(hao)染色(se)體(ti)開(kai)放(fang)閱(yue)讀框195抗(kang)體(ti)

C7orf62 7號染(ran)色(se)體(ti)開(kai)放(fang)閱(yue)讀框62抗(kang)體(ti)

C9orf174 9號染(ran)色(se)體(ti)開(kai)放(fang)閱(yue)讀框174抗(kang)體(ti)

C6orf64 6號染(ran)色(se)體(ti)開(kai)放(fang)閱(yue)讀框64抗(kang)體(ti)