川(chuan)牛膝(xi)探(tan)針(zhen)法PCR鑒定(ding)試(shi)劑盒說明(ming)書(shu)

儲(chu)存(cun)條件：
14℃或－20℃樣品(pin)收(shou)集、處理(li)及(ji)保(bao)存(cun)方法(fa)
1. 血清：使用不(bu)含熱(re)原(yuan)和(he)內毒(du)素(su)的試管，操作(zuo)過(guo)程中避(bi)免(mian)任(ren)何(he)細胞(bao)刺(ci)激(ji)，收(shou)集血液(ye)後(hou)，3000 轉離(li)心10 分鐘將(jiang)血(xue)清和(he)紅(hong)細胞(bao)迅(xun)速(su)小心地分離(li)。
2. 血漿：EDTA、檸(ning)檬酸(suan)鹽或肝素抗(kang)凝(ning)。3000 轉離(li)心30 分鐘取(qu)上清(qing)。
3. 細胞(bao)上清(qing)液(ye)：3000 轉離(li)心10 分鐘去除(chu)顆粒和(he)聚合物。
4. 組(zu)織勻(yun)漿：將(jiang)組(zu)織加入適量(liang)生理(li)鹽(yan)水(shui)搗(dao)碎。3000 轉離(li)心10 分鐘取(qu)上清(qing)。
5. 保存(cun)：如(ru)果(guo)樣本(ben)收(shou)集後不(bu)及(ji)時(shi)檢測，請(qing)按(an)壹(yi)次(ci)用量(liang)分(fen)裝(zhuang)，凍(dong)存(cun)於-20℃，避免反復凍融，在室溫(wen)下(xia)解凍並(bing)確(que)保樣(yang)品(pin)均(jun)勻地充分解凍。

特點(dian)：
1. 即開(kai)即用(yong)，用(yong)戶(hu)只(zhi)需要(yao)提(ti)供(gong)病毒(du)樣(yang)品(pin)。
2. 根據地黃保(bao)守序列設計(ji)的專壹(yi)性(xing)引物，與相關(guan)病毒(du)無(wu)交叉反應。
3. 靈敏度(du)可(ke)以(yi)達(da)到幾百拷貝/反應。
4. 壹管式(shi)熒光(guang)定量(liang) PCR 檢測，避免(mian)後(hou)續(xu)汙染(ran)。
5. 本(ben)試(shi)劑盒足夠 50 次(ci) 20μL 反應體系的熒光(guang)定量(liang) PCR。
6. 本(ben)產(chan)品(pin)只(zhi)適(shi)用(yong)於科研(yan)，不能(neng)用(yong)於臨床(chuang)診斷。

使用方法(fa)：
壹、樣品(pin)采集：
1、食(shi)品(pin)樣(yang)品(pin)：樣(yang)品(pin)的采集與(yu)預(yu)培養按(an)照(zhao)樣品(pin)的采集與(yu)預(yu)培養按(an)照(zhao)《食(shi)品(pin)衛(wei)生微生物學(xue)檢(jian)驗阪(ban)崎(qi)腸桿(gan)菌檢驗(yan)要求進(jin)行(xing)。
2、血液(ye)樣(yang)品(pin)：用(yong)無(wu)菌註(zhu)射(she)器抽取受檢者靜(jing)脈血2mL，註(zhu)入(ru)無菌EDTA2Na(或檸(ning)檬酸(suan)鈉)抗(kang)凝(ning)管，立即混(hun)勻。
3、糞便樣品(pin)：取(qu)糞(fen)便(bian)置(zhi)於滅菌的收(shou)集管中送(song)檢。
4、病竈(zao)部位樣(yang)品(pin)：取(qu)發病部位新(xin)鮮(xian)滲出(chu)物、粘液(ye)膿(nong)血(xue)送(song)檢。
壹、稀釋(shi) PCR 陽性對(dui)照（以(yi) 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(ge) 10 倍(bei)稀釋(shi)度(du)為例(li)）
1. 註(zhu)意(yi)：由於標(biao)準品(pin)濃度(du)非常(chang)高(gao)，因此下(xia)列稀釋(shi)操(cao)作壹定要(yao)在(zai)獨(du)立的區域進(jin)行(xing)，千(qian)萬不(bu)能(neng)汙染(ran)樣(yang)品(pin)或本(ben)試(shi)劑盒的其(qi)他(ta)成(cheng)分）。為增(zeng)加產(chan)品(pin)穩(wen)定(ding)性(xing)和(he)避免(mian)擴散傳(chuan)染(ran)性(xing)病(bing)原(yuan)，本(ben)產(chan)品(pin)不(bu)提(ti)供(gong)活(huo)體樣品(pin)做陽性對(dui)照，只(zhi)提(ti)供(gong)可(ke)以(yi)直接(jie)使用的 DNA段作為陽性對(dui)照。
2. 標(biao)記 6 個(ge)離(li)心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭分別加入 45 μL 熒光(guang) PCR 模板(ban)稀釋(shi)液(ye)（用(yong)帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭，下同(tong)）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(dui)照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(dui)照。放(fang)冰上待(dai)用(yong)。
5. 換槍(qiang)頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(dui)照(上步(bu)稀釋(shi)所(suo)得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(dui)照。放(fang)冰上待(dai)用(yong)。
6. 換槍(qiang)頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(dui)照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(dui)照。放(fang)冰上待(dai)用(yong)。
7. 重(zhong)復上面(mian)的操作直到得到 6 個(ge)稀釋(shi)度(du)的陽性對(dui)照。放(fang)冰上待(dai)用(yong)。
註(zhu)：上述(shu)樣品(pin)建(jian)議(yi)經過(guo)增菌後，收(shou)集培養(yang)物(wu)用於檢測(ce)。 
二、DNA提取：
可(ke)采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液(ye)，按(an)以(yi)下(xia)說(shuo)明(ming)進(jin)行(xing)DNA核(he)酸(suan)的粗提。也可(ke)采購上海(hai)澤(ze)葉生物科技有限(xian)公(gong)司生產(chan)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光(guang)配套(tao))或其(qi)他(ta)合適的商業化產(chan)品(pin)，並(bing)按(an)照(zhao)相應試劑盒說明(ming)進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo)。
1、液(ye)體培養物：取(qu)液(ye)體培養物100μL加到1.5mL無菌離(li)心管中，8000rpm離(li)心3min，盡(jin)量(liang)吸(xi)棄上清(qing)，加入50μL DNA抽提液(ye)充分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min，取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
2、固體培養物：挑(tiao)取(qu)單克隆(long)菌落(luo)與50μL DNA抽提液(ye)充分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min，取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
3、糞便樣品(pin)：挑(tiao)取(qu)米(mi)粒大(da)小糞便(bian)於滅菌離(li)心管中，加入0.5mL生理(li)鹽(yan)水(shui)，振(zhen)蕩混(hun)勻，13000rpm離(li)心3分鐘，棄上清(qing)，沈(chen)澱中加入50μL DNA抽提液(ye)充分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
4、其(qi)他(ta)液(ye)體標(biao)本(ben)：取(qu)標(biao)本(ben)2-3mL，13000rpm離(li)心3min，棄上清(qing)，沈(chen)澱中加入50μL DNA抽提液(ye)充分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
註(zhu)：陽性對(dui)照和(he)陰(yin)性(xing)對(dui)照(zhao)為已(yi)經抽提好的核(he)酸(suan)(無需提(ti)取(qu))，直接(jie)取(qu)5μL加入到反應體系中即(ji)可(ke)。由於陽性對(dui)照濃度(du)較(jiao)高(gao)，建議(yi)在(zai)樣(yang)品(pin)制備(bei)區域加入陽性對(dui)照。 
SELE Others Human 人(ren) E-Selectin / CD62E 人(ren)細胞(bao)裂解液(ye) (陽性對(dui)照) Methocarbamol質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：>98.5%,USP 32

人(ren)羊膜(mo)細胞(bao);WISH（標(biao)準品(pin)）Methocarbamol質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：HPLC>98%,標(biao)準品(pin)

CD3D Others Mouse 小鼠 CD3d / CD3 delta 人(ren)細胞(bao)裂解液(ye) (陽性對(dui)照) 甲基潑尼龍Methylprednisolone質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：>97%,BR,可(ke)用(yong)於細胞(bao)培(pei)養

人(ren)尿道(dao)上皮(pi)細胞(bao)*培(pei)養基 100mL甲基潑尼龍（標(biao)準品(pin)）Methylprednisolone質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：HPLC>97.5%,標(biao)準品(pin)

Neuro-2a細胞(bao)，小鼠腦(nao)神(shen)經瘤細胞(bao) MDA-MB-231(癌細胞(bao)) 人(ren)腦瘤細胞(bao);SF767（慢(man)心率）Mexiletine 質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：>98%,BR
EB病毒(du)轉化的人(ren)B細胞(bao);KM9401 人(ren)血管內皮(pi)細胞(bao)*培(pei)養基 100mLN-(2-丁(ding)二酰)氟(fu)伏沙(sha)明(ming)N-(2-Succinyl) Fluvoxamine質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：美(mei)國進(jin)口(kou)

非必(bi)需氨(an)基酸(suan)　100XNEAA福辛普(pu)利Fosipril質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：美(mei)國進(jin)口(kou)

MAP2K4 Others Mouse 小鼠 MKK4 / MEK4 / MAP2K4 桿(gan)狀(zhuang)病(bing)毒(du)-昆蟲細胞(bao)裂解液(ye) (陽性對(dui)照) (R)-鹽酸(suan)氮(dan)卓(zhuo)斯(si)汀(R)-Azelastine 質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：美(mei)國進(jin)口(kou)

人(ren)小細胞(bao)肺(fei)癌(ai)細胞(bao);NCI-H4469-去氧-9a-氮(dan)雜(za)-同(tong)型(xing)A 去甲9-Deoxo-9a-aza-9a-homo Erythromycin A Desmethyl Azithromycin質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：美(mei)國進(jin)口(kou)

L6565細胞(bao)，小鼠L6565白(bai)血(xue)病克隆細胞(bao)系(xi) 人(ren)胃癌細胞(bao),MKN-28細胞(bao) 猴(hou)源(yuan)細胞(bao)Azithromycin質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：美(mei)國進(jin)口(kou)
IL17RA Others Rat 大鼠 IL17RA / IL17R 人(ren)細胞(bao)裂解液(ye) (陽性對(dui)照) 耐斯(si)糖（標(biao)準品(pin)）質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：含量(liang)測(ce)定(ding)NISTOSE

原代腎(shen)實質(zhi)細胞(bao)特制無(wu)血清(qing)添(tian)加劑Many types of cells包裝(zhuang)：1ml對羥(qiang)基苯乙酮(tong)（標(biao)準品(pin)）質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：供含(han)量(liang)測(ce)定(ding)用4'-Hydroxyacetophene

OS-732細胞(bao)，骨肉瘤細胞(bao)(瘤株(zhu)) 人(ren)細胞(bao),SiHa細胞(bao) 人(ren)脊髓星形膠質(zhi)細胞(bao)總RNAHA-sp NA3,29-二苯甲酰基栝(kuo)樓(lou)仁三醇（標(biao)準品(pin)）質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：含量(liang)測(ce)定(ding)3,29-Dibenzoyl rarounitriol

非洲綠猴(hou)腎(shen)細胞(bao)系(xi)/IgR;VERO/IgR牛磺(huang)（標(biao)準品(pin)）質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：含量(liang)測(ce)定(ding)TAUROHYODEOXYCHOLIC ACID  SALT

FZD5 Others Human 人(ren) Frizzled-5 人(ren)細胞(bao)裂解液(ye) (陽性對(dui)照) 苦玄參(can)苷(gan)X（標(biao)準品(pin)）質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：HPLC≥97%,標(biao)準品(pin)Picfeltarraenin X
川(chuan)牛膝(xi)探(tan)針(zhen)法PCR鑒定試劑盒說明(ming)書(shu)CRT細胞(bao)，神(shen)經膠質(zhi)瘤細胞(bao) 曲黴 人(ren)海(hai)馬(ma)趾(zhi)星形膠質(zhi)細胞(bao)RNAHA-h miRNA5 μg2-Octal2-辛醇25克AR，97%

RTE(大鼠氣(qi)管上皮(pi)細胞(bao)) 5×106cells/瓶×21,12-十(shi)八(ba)烷(wan)二醇 1,12-OCTcDqCcNqDIOL 76-73-0

HBL-100(人(ren)整合SV40基因的上皮(pi)細胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 CL-0361HPAC(人(ren)胰腺(xian)腺(xian)泡(pao)上皮(pi)癌)5×106cells/瓶×2 水牛皮(pi)膚成(cheng)纖維(wei)樣(yang)細胞(bao);WB-S2肖醋(cu)錳(meng)50%溶液(ye) Mcngcus nitnctq hqxchyd
實驗流(liu)程：
1. 整個(ge)檢測(ce)過程應(ying)嚴格按(an)照(zhao)本(ben)說(shuo)明(ming)書(shu)要求(qiu)分(fen)別在(zai)試劑準備(bei)區、樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)區(qu)和(he)PCR擴增(zeng)區(qu)進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo)，各區實(shi)驗(yan)服(fu)、儀(yi)器(qi) 、耗材應獨(du)立使用，不(bu)能混(hun)用；實驗用吸頭采用帶(dai)濾(lv)芯(xin)吸頭；樣本(ben)處(chu)理(li)區(qu)應(ying)配(pei)有生物安全櫃，樣本(ben)處(chu)理(li)在(zai)生物安全櫃中進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo)；三個(ge)區應(ying)該配有紫(zi)外(wai)線殺(sha)菌裝(zhuang)置(zhi)。
2. 為避(bi)免(mian)RNA降解，樣本(ben)處(chu)理(li)過(guo)程應(ying)在0-4℃條件下操作(zuo)，且(qie)完成(cheng)實驗(yan)後立即上機(ji)檢測；樣本(ben)處(chu)理(li)過(guo)程中使用的器具(ju)耗材(cai)應(ying)經過(guo)無核(he)酶處理(li)。

3. 每(mei)次(ci)實驗(yan)應該設置(zhi)陰(yin)、陽性對(dui)照。
4. 試劑盒所有試(shi)劑在(zai)使用前(qian)應該(gai)在(zai)常(chang)溫(wen)下充分融化混(hun)勻，並應瞬時(shi)離(li)心。
5. 試劑盒內所配(pei)陰(yin)性(xing)和(he)陽性對(dui)照在(zai)壹(yi)次(ci)使用前(qian)應全部轉移至標(biao)本(ben)準備(bei)區，並(bing)單獨(du)存(cun)放。
6. 為防(fang)止(zhi)熒光(guang)幹擾，應(ying)避免(mian)裸(luo)手(shou)直接(jie)接(jie)觸(chu)PCR反應管，並應(ying)避(bi)免在PCR反應管上進(jin)行(xing)任(ren)何(he)標(biao)記。
7. 儀(yi)器(qi) 擴增(zeng)相(xiang)關(guan)參數應(ying)按(an)照(zhao)本(ben)說(shuo)明(ming)書(shu)相關(guan)要求(qiu)進(jin)行(xing)設(she)置(zhi)；不(bu)同(tong)批號(hao)試(shi)劑不(bu)能混(hun)用。
8. ABI系列熒光(guang)定量(liang)PCR儀(yi)參(can)數設(she)置(zhi)中不(bu)選(xuan)ROX校正(zheng)，淬滅(mie)基因選(xuan)擇(ze)None。
9. 實驗過程中產(chan)品(pin)的廢棄物應該進(jin)行(xing)無(wu)害(hai)化處理(li)後(hou)方可(ke)丟(diu)棄。