白薇探針法PCR鑒(jian)定(ding)試劑(ji)盒(he)保(bao)存(cun)

儲存條(tiao)件(jian)：
14℃或－20℃樣品(pin)收(shou)集、處理(li)及(ji)保(bao)存(cun)方法
1. 血清(qing)：使(shi)用不(bu)含熱原和(he)內(nei)毒(du)素的(de)試管(guan)，操作過(guo)程中(zhong)避(bi)免任何(he)細(xi)胞刺(ci)激，收集血液(ye)後，3000 轉(zhuan)離心10 分鐘將(jiang)血(xue)清(qing)和(he)紅細胞迅速(su)小(xiao)心(xin)地分離。
2. 血漿：EDTA、檸(ning)檬酸(suan)鹽(yan)或肝(gan)素抗(kang)凝(ning)。3000 轉(zhuan)離心30 分鐘取(qu)上(shang)清(qing)。
3. 細胞上(shang)清(qing)液(ye)：3000 轉(zhuan)離心10 分鐘去(qu)除(chu)顆粒(li)和(he)聚(ju)合物(wu)。
4. 組織勻漿：將(jiang)組織(zhi)加(jia)入(ru)適量(liang)生(sheng)理(li)鹽(yan)水搗碎(sui)。3000 轉(zhuan)離心10 分鐘取(qu)上(shang)清(qing)。
5. 保(bao)存(cun)：如果樣本收集後不(bu)及(ji)時檢測，請按壹次(ci)用(yong)量(liang)分裝，凍存於-20℃，避免反復凍融，在室溫(wen)下解(jie)凍並(bing)確(que)保(bao)樣品(pin)均勻(yun)地充(chong)分解(jie)凍。

特點(dian)：
1. 即開(kai)即用(yong)，用戶只需要(yao)提(ti)供(gong)病毒(du)樣品(pin)。
2. 根(gen)據(ju)地黃(huang)保(bao)守(shou)序(xu)列(lie)設計的(de)專(zhuan)壹性(xing)引(yin)物(wu)，與(yu)相(xiang)關病毒(du)無交叉反應(ying)。
3. 靈(ling)敏度(du)可以(yi)達到(dao)幾(ji)百(bai)拷貝/反應。
4. 壹管(guan)式熒(ying)光定(ding)量 PCR 檢測，避免(mian)後續汙(wu)染(ran)。
5. 本試劑(ji)盒(he)足(zu)夠 50 次 20μL 反應體(ti)系(xi)的熒(ying)光定(ding)量 PCR。
6. 本產品(pin)只適用(yong)於科(ke)研，不(bu)能(neng)用於(yu)臨床診斷。

使用方法：
壹、樣品(pin)采(cai)集：
1、食品(pin)樣品(pin)：樣品(pin)的(de)采集與預(yu)培(pei)養按照(zhao)樣品(pin)的(de)采集與預(yu)培(pei)養按照(zhao)《食品(pin)衛(wei)生(sheng)微(wei)生(sheng)物學(xue)檢驗阪崎(qi)腸桿(gan)菌(jun)檢驗要求(qiu)進行(xing)。
2、血液樣品(pin)：用(yong)無菌(jun)註射器(qi)抽(chou)取(qu)受檢者靜脈(mai)血(xue)2mL，註入(ru)無菌(jun)EDTA2Na(或檸(ning)檬酸(suan)鈉(na))抗凝(ning)管(guan)，立即混勻(yun)。
3、糞便樣品(pin)：取(qu)糞(fen)便(bian)置(zhi)於滅菌(jun)的收(shou)集管(guan)中(zhong)送(song)檢。
4、病竈(zao)部(bu)位(wei)樣品(pin)：取(qu)發(fa)病(bing)部(bu)位(wei)新(xin)鮮滲出物、粘(zhan)液膿(nong)血(xue)送(song)檢。
壹、稀釋 PCR 陽(yang)性對照（以(yi) 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍(bei)稀釋度(du)為例(li)）
1. 註意：由於(yu)標(biao)準(zhun)品(pin)濃(nong)度(du)非常(chang)高(gao)，因(yin)此下列(lie)稀釋操作壹定(ding)要在獨(du)立的區(qu)域進(jin)行(xing)，千(qian)萬不(bu)能(neng)汙染(ran)樣品(pin)或本(ben)試劑(ji)盒(he)的其(qi)他(ta)成(cheng)分）。為增(zeng)加(jia)產品(pin)穩(wen)定(ding)性和(he)避(bi)免(mian)擴散傳(chuan)染(ran)性病(bing)原，本(ben)產品(pin)不(bu)提供(gong)活體(ti)樣品(pin)做(zuo)陽(yang)性對照，只提供(gong)可以(yi)直接使(shi)用(yong)的(de) DNA段(duan)作為(wei)陽(yang)性對照。
2. 標(biao)記 6 個離心管(guan)，分別(bie)為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶(dai)芯槍頭(tou)分別(bie)加(jia)入(ru) 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(ye)（用(yong)帶(dai)芯槍頭(tou)，下同(tong)）。
4. 在 7 號(hao)管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yang)性對照，充(chong)分震蕩(dang) 1 分鐘，得(de)1×10E7 拷貝/μL 的陽(yang)性對照。放(fang)冰(bing)上(shang)待(dai)用(yong)。
5. 換(huan)槍頭(tou)，在 6 號(hao)管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yang)性對照(上(shang)步(bu)稀釋所(suo)得(de))，充分震蕩(dang) 1 分鐘，得(de) 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yang)性對照。放(fang)冰(bing)上(shang)待(dai)用(yong)。
6. 換(huan)槍頭(tou)，在 5 號(hao)管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yang)性對照到(dao) 5 號(hao)管(guan)中(zhong)，充(chong)分震蕩(dang) 1 分鐘，得(de) 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yang)性對照。放(fang)冰(bing)上(shang)待(dai)用(yong)。
7. 重(zhong)復上(shang)面的(de)操作直(zhi)到(dao)得(de)到(dao) 6 個稀釋度(du)的陽(yang)性對照。放(fang)冰(bing)上(shang)待(dai)用(yong)。
註：上(shang)述樣品(pin)建(jian)議(yi)經(jing)過(guo)增(zeng)菌(jun)後，收(shou)集培養物用(yong)於(yu)檢測。 
二(er)、DNA提取(qu)：
可采用PCR試劑(ji)盒(he)配備(bei)的DNA抽提液，按以(yi)下說(shuo)明(ming)進(jin)行(xing)DNA核酸(suan)的(de)粗(cu)提(ti)。也(ye)可采購(gou)上(shang)海(hai)澤(ze)葉生(sheng)物科(ke)技(ji)有(you)限(xian)公司(si)生(sheng)產的(de)DNA提取(qu)試劑(ji)盒(he)(過(guo)柱(zhu)法-熒光配套)或其(qi)他(ta)合(he)適的(de)商業(ye)化產(chan)品(pin)，並(bing)按照(zhao)相應試劑(ji)盒(he)說明(ming)進(jin)行(xing)操作。
1、液體(ti)培養物：取(qu)液(ye)體(ti)培養物100μL加到(dao)1.5mL無菌(jun)離心管(guan)中(zhong)，8000rpm離心3min，盡量(liang)吸(xi)棄(qi)上(shang)清(qing)，加(jia)入(ru)50μL DNA抽提液充分混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取(qu)上(shang)清(qing)5μL進行(xing)PCR反應。
2、固體(ti)培養物：挑(tiao)取(qu)單(dan)克(ke)隆菌(jun)落(luo)與50μL DNA抽提液充分混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取(qu)上(shang)清(qing)5μL進行(xing)PCR反應。
3、糞便樣品(pin)：挑(tiao)取(qu)米粒(li)大(da)小(xiao)糞(fen)便(bian)於滅菌(jun)離心管(guan)中(zhong)，加(jia)入(ru)0.5mL生(sheng)理(li)鹽(yan)水，振蕩(dang)混勻(yun)，13000rpm離心3分鐘，棄(qi)上(shang)清(qing)，沈澱中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽提液充分混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取(qu)上(shang)清(qing)5μL進行(xing)PCR反應。
4、其他(ta)液(ye)體(ti)標(biao)本(ben)：取(qu)標(biao)本(ben)2-3mL，13000rpm離心3min，棄(qi)上(shang)清(qing)，沈澱中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽提液充分混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取(qu)上(shang)清(qing)5μL進行(xing)PCR反應。
註：陽(yang)性對照和(he)陰(yin)性(xing)對照為(wei)已經抽提好(hao)的(de)核(he)酸(suan)(無需提(ti)取(qu))，直接取(qu)5μL加入(ru)到(dao)反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)中(zhong)即可。由於陽(yang)性對照濃(nong)度(du)較(jiao)高(gao)，建(jian)議(yi)在樣品(pin)制備區(qu)域加(jia)入(ru)陽(yang)性對照。 
BABL/C2 BABL/C小(xiao)鼠胚(pei)胎(tai)細胞Meropenem trihydrate質量規(gui)格：>98%,BR,三水合物

CL-0174NRK-52E(大(da)鼠腎小(xiao)管(guan)導管(guan)上(shang)皮(pi)細(xi)胞)5×106cells/瓶×2(標(biao)準(zhun)品(pin))Meropenem trihydrate質量規(gui)格：HPLC>98%,標(biao)準(zhun)品(pin),三水合物

MEF, 小(xiao)鼠胚(pei)胎(tai)成纖維細(xi)胞硫(liu)酸(suan)Kanamycin mo sulfate質量規(gui)格：效價(jia)≥750IU/MG,BP,BR

人(ren)胚(pei)腎細胞-F克(ke)隆;293F 人(ren)腎成纖維細(xi)胞*培(pei)養基 100mL硫(liu)酸(suan)(標(biao)準(zhun)品(pin))Kanamycin mo sulfate質量規(gui)格：效價(jia)測定(ding)

人(ren)羊膜上(shang)皮(pi)細(xi)胞RNAHAmEpiC miRNA5 μg1酸(suan)鹽(yan)Ketanserin Tartrate質量規(gui)格：>98.5%,BR
CL-0029B16(小(xiao)鼠色(se)素瘤(liu)細胞)5×106cells/瓶×21-溴-4-(三氟甲氧(yang)基)苯(>97.0%(GC))1-Bromo-4-(trifluoromethoxy)benzene質量規(gui)格：>97.0%(GC)

H4細胞，人(ren)腦神(shen)經(jing)膠(jiao)質瘤(liu)細(xi)胞 人(ren)大(da)動脈平滑肌細胞,HASMC細胞 正常大(da)鼠腎細胞(EGF受體(ti)陽(yang)性);NRK49F4-丁(ding)基(ji)-4'-羥(qiang)基查(zha)耳(er)酮(>98.0%(HPLC))4-Butyl-4'-hydroxychalcone質量規(gui)格：>98.0%(HPLC)

BSC-1(猴腎細胞) 5×106cells/瓶×2(E)-4-羥(qiang)基-N-去(qu)甲基它(ta)莫西芬(fen)(E)-4-Hydroxy-N-desmethyl Tamoxifen質量規(gui)格：美(mei)國進口

COMP Others Human 人(ren) COMP 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照) 4-乙酰氧(yang)基它(ta)莫(mo)西芬(fen)4-Acetoxy Tamoxifen質量規(gui)格：美(mei)國進口

二(er)氫還(hai)原(yuan)酶(mei)缺(que)陷(xian)型中(zhong)國倉(cang)鼠卵(luan)巢(chao)細胞;CHO/dhFr-N-去(qu)甲基-4-羥(qiang)基它(ta)莫西芬(fen)-d5 (1:1 E/Z 混合(he)物(wu))N-Desmethyl-4-hydroxy Tamoxifen-d5 (1:1 E/Z Mixture)質量規(gui)格：美(mei)國進口
IL15 Protein Human 重(zhong)組人(ren) IL-15 / IL15 / Ierleukin 15 蛋(dan)白 (His 標(biao)簽)鹽酸(suan)尼(ni)非(fei)卡蘭質量(liang)規(gui)格：>98%,BRNifekalant

人(ren)小(xiao)神(shen)經(jing)膠(jiao)質細(xi)胞(HM) ( 5×105 ) 人(ren)海(hai)馬神(shen)經(jing)元(yuan) Human鹽酸(suan)尼(ni)非(fei)卡蘭(標(biao)準(zhun)品(pin))質量規(gui)格：HPLC>99%,標(biao)準(zhun)品(pin)Nifekalant

CM-H041人(ren)直(zhi)腸(chang)粘(zhan)膜上(shang)皮(pi)細(xi)胞*培(pei)養基100mL醋酸(suan)舍莫(mo)瑞(rui)林(lin) 質量規(gui)格：≥98.0%Sermorelin Acetate

EPHA4 Others Cymolgus 食蟹(xie)猴(hou) EphA4 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照) 銀質量規(gui)格：>98%,USP31,BRSilver Sulfadiazine

人(ren)神(shen)經(jing)細胞HN銀(標(biao)準(zhun)品(pin))質量規(gui)格：>98%,標(biao)準(zhun)品(pin)Silver Sulfadiazine
白薇探針法PCR鑒(jian)定(ding)試劑(ji)盒(he)保(bao)存(cun)表達(da)SV40T和(he)EBNA1的人(ren)胚(pei)腎細胞;293ET 人(ren)腎上(shang)皮(pi)細(xi)胞*培(pei)養基 100mL7,8-二(er)氫生(sheng)物蝶(die)呤質量(liang)規(gui)格：HPLC>95%,BR7,8-Dihydro-L-biopterin

人(ren)支(zhi)氣(qi)管(guan)平滑(hua)肌(ji)細(xi)胞總(zong)RNAHBSMC NA整形素質(zhi)量規(gui)格：>90%,BRChlorflurel-methyl

小(xiao)鼠雪旺(wang)細(xi)胞(MSC)(5×105)帕拉米韋(wei)三水(shui)合物(wu)質量規(gui)格：>98%,BRPeramivir Trihydrate

中(zhong)國倉(cang)鼠卵(luan)巢(chao)細胞(亞系(xi)克(ke)隆);CHO 1beta9,12.5 Clone 36神(shen)經(jing)保(bao)護(hu)劑NXY0
實驗流(liu)程：
1. 整個檢測過(guo)程應嚴(yan)格按照(zhao)本說明(ming)書(shu)要求(qiu)分別(bie)在試劑(ji)準(zhun)備區(qu)、樣本處理(li)區(qu)和(he)PCR擴增區(qu)進行(xing)操作，各區(qu)實驗(yan)服、儀器 、耗(hao)材(cai)應獨立使用，不(bu)能(neng)混用(yong)；實(shi)驗(yan)用吸(xi)頭(tou)采(cai)用帶(dai)濾(lv)芯吸(xi)頭(tou)；樣本處理(li)區(qu)應配(pei)有生(sheng)物安(an)全(quan)櫃(gui)，樣本處理(li)在生(sheng)物安(an)全(quan)櫃(gui)中(zhong)進(jin)行(xing)操作；三(san)個區(qu)應該配有紫(zi)外(wai)線殺菌(jun)裝置(zhi)。
2. 為避免RNA降解(jie)，樣本處理(li)過(guo)程應在0-4℃條(tiao)件(jian)下操作，且(qie)完(wan)成(cheng)實(shi)驗後立即上(shang)機(ji)檢測；樣本處理(li)過(guo)程中(zhong)使(shi)用的器(qi)具(ju)耗(hao)材(cai)應經過(guo)無(wu)核酶(mei)處理(li)。

3. 每(mei)次實(shi)驗應該設置陰、陽(yang)性對照。
4. 試劑(ji)盒(he)所有(you)試劑(ji)在使(shi)用前(qian)應(ying)該在常(chang)溫下充(chong)分融化混勻(yun)，並(bing)應瞬時離心。
5. 試劑(ji)盒(he)內所(suo)配陰性(xing)和(he)陽(yang)性對照在壹次(ci)使(shi)用(yong)前(qian)應(ying)全(quan)部(bu)轉(zhuan)移(yi)至(zhi)標(biao)本(ben)準備區(qu)，並(bing)單獨(du)存放(fang)。
6. 為防(fang)止(zhi)熒光幹擾，應避免裸(luo)手直(zhi)接接觸PCR反應管(guan)，並(bing)應避(bi)免在PCR反應管(guan)上(shang)進行(xing)任何(he)標(biao)記。
7. 儀器 擴增相(xiang)關參數(shu)應按照(zhao)本說明(ming)書(shu)相關要求(qiu)進行(xing)設(she)置(zhi)；不(bu)同批號(hao)試劑(ji)不(bu)能(neng)混用(yong)。
8. ABI系(xi)列熒(ying)光定(ding)量PCR儀參數設置(zhi)中(zhong)不(bu)選ROX校(xiao)正，淬(cui)滅基(ji)因(yin)選擇(ze)None。
9. 實驗過(guo)程中(zhong)產(chan)品(pin)的(de)廢棄(qi)物(wu)應(ying)該進行(xing)無(wu)害(hai)化處理(li)後方可丟棄(qi)。