石斛(hu)探針法PCR鑒定(ding)試劑(ji)盒(he)*

特(te)點(dian)：
1. 即開(kai)即(ji)用(yong)，用(yong)戶(hu)只(zhi)需要(yao)提供病毒樣品。
2. 根據地(di)黃保守(shou)序(xu)列(lie)設(she)計的(de)專(zhuan)壹(yi)性引(yin)物(wu)，與相關(guan)病(bing)毒無(wu)交(jiao)叉(cha)反(fan)應(ying)。
3. 靈敏度可(ke)以達(da)到(dao)幾(ji)百拷(kao)貝(bei)/反(fan)應(ying)。
4. 壹(yi)管(guan)式(shi)熒(ying)光(guang)定量(liang) PCR 檢測，避(bi)免後續(xu)汙(wu)染(ran)。
5. 本試劑(ji)盒(he)足夠(gou) 50 次 20μL 反(fan)應(ying)體系的熒(ying)光(guang)定量(liang) PCR。
6. 本產品只適(shi)用(yong)於科(ke)研，不(bu)能(neng)用(yong)於臨(lin)床診(zhen)斷(duan)。

使用(yong)方(fang)法：
壹(yi)、樣品采集(ji)：
1、食品樣品：樣品的采(cai)集(ji)與預培(pei)養按照樣品的采(cai)集(ji)與預培(pei)養按照《食品衛(wei)生(sheng)微(wei)生(sheng)物(wu)學檢驗(yan)阪(ban)崎腸桿菌檢(jian)驗(yan)要(yao)求(qiu)進(jin)行。
2、血(xue)液樣(yang)品：用(yong)無(wu)菌註(zhu)射器(qi)抽取(qu)受(shou)檢(jian)者(zhe)靜(jing)脈血(xue)2mL，註(zhu)入無(wu)菌EDTA2Na(或(huo)檸檬(meng)酸(suan)鈉)抗凝(ning)管(guan)，立(li)即(ji)混(hun)勻。
3、糞(fen)便(bian)樣品：取糞(fen)便(bian)置(zhi)於滅(mie)菌(jun)的(de)收集(ji)管(guan)中(zhong)送(song)檢。
4、病竈(zao)部位(wei)樣品：取發病(bing)部位(wei)新鮮(xian)滲出物(wu)、粘液膿(nong)血(xue)送(song)檢。
壹(yi)、稀釋(shi) PCR 陽性(xing)對照（以 10E2-10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 這(zhe) 6 個 10 倍稀(xi)釋(shi)度為(wei)例）
1. 註(zhu)意：由(you)於標(biao)準(zhun)品濃度(du)非常高，因(yin)此下(xia)列(lie)稀(xi)釋(shi)操(cao)作(zuo)壹(yi)定要(yao)在獨(du)立的(de)區域進行，千萬不(bu)能(neng)汙染(ran)樣品或(huo)本試劑(ji)盒(he)的其(qi)他成(cheng)分(fen)）。為(wei)增加產品穩定(ding)性和避(bi)免擴散傳染(ran)性病(bing)原(yuan)，本(ben)產品不(bu)提供活體樣品做陽性(xing)對照，只提供可(ke)以直接使用(yong)的(de) DNA段作為(wei)陽性(xing)對照。
2. 標記 6 個離心(xin)管(guan)，分(fen)別(bie)為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶芯槍(qiang)頭分(fen)別(bie)加(jia)入 45 μL 熒(ying)光(guang) PCR 模板稀釋(shi)液（用(yong)帶芯槍(qiang)頭，下(xia)同(tong)）。
4. 在 7 號管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性(xing)對照，充分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘，得1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性(xing)對照。放(fang)冰(bing)上待用(yong)。
5. 換(huan)槍(qiang)頭，在 6 號管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性(xing)對照(上步稀(xi)釋(shi)所得)，充分震蕩(dang) 1 分鐘，得 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性(xing)對照。放(fang)冰(bing)上待用(yong)。
6. 換(huan)槍(qiang)頭，在 5 號管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性(xing)對照到(dao) 5 號管(guan)中(zhong)，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘，得 1×10E5 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性(xing)對照。放(fang)冰(bing)上待用(yong)。
7. 重復上(shang)面的(de)操(cao)作(zuo)直(zhi)到(dao)得到(dao) 6 個稀釋(shi)度的陽性(xing)對照。放(fang)冰(bing)上待用(yong)。
註(zhu)：上述(shu)樣品建議經過(guo)增菌後，收集(ji)培養物(wu)用(yong)於檢(jian)測(ce)。 
二、DNA提取：
可(ke)采用(yong)PCR試劑(ji)盒(he)配備(bei)的DNA抽提液，按以(yi)下(xia)說明(ming)進(jin)行DNA核(he)酸(suan)的粗提。也可(ke)采購上海(hai)澤(ze)葉(ye)生物(wu)科(ke)技(ji)有(you)限(xian)公司(si)生(sheng)產的DNA提取試劑(ji)盒(he)(過柱法-熒(ying)光(guang)配套)或(huo)其他合(he)適(shi)的商(shang)業化產品，並按照相應(ying)試劑(ji)盒(he)說明(ming)進(jin)行操(cao)作(zuo)。
1、液體培養物(wu)：取液體培養物(wu)100μL加到(dao)1.5mL無(wu)菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，8000rpm離心(xin)3min，盡(jin)量吸(xi)棄(qi)上清(qing)，加(jia)入50μL DNA抽提液充(chong)分(fen)混勻，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取上清(qing)5μL進行PCR反(fan)應(ying)。
2、固體培養物(wu)：挑取(qu)單(dan)克隆(long)菌落與50μL DNA抽提液充(chong)分(fen)混勻，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取上清(qing)5μL進行PCR反(fan)應(ying)。
3、糞(fen)便(bian)樣品：挑取(qu)米(mi)粒大小糞(fen)便(bian)於滅(mie)菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，加(jia)入(ru)0.5mL生理鹽(yan)水，振蕩(dang)混(hun)勻，13000rpm離心(xin)3分鐘，棄(qi)上清(qing)，沈澱中加(jia)入(ru)50μL DNA抽提液充(chong)分(fen)混勻，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取上清(qing)5μL進行PCR反(fan)應(ying)。
4、其他液體標本：取標(biao)本(ben)2-3mL，13000rpm離心(xin)3min，棄(qi)上清(qing)，沈澱中加(jia)入(ru)50μL DNA抽提液充(chong)分(fen)混勻，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取上清(qing)5μL進行PCR反(fan)應(ying)。
註(zhu)：陽性(xing)對照和陰(yin)性(xing)對照為(wei)已經(jing)抽(chou)提好的(de)核(he)酸(suan)(無(wu)需提取)，直接取5μL加入到(dao)反(fan)應(ying)體系中即可(ke)。由於陽性(xing)對照濃度較(jiao)高，建議在樣(yang)品制(zhi)備(bei)區(qu)域加(jia)入陽性(xing)對照。 
實(shi)驗流(liu)程(cheng)：
1. 整個檢(jian)測過程應(ying)嚴(yan)格(ge)按照本說明(ming)書(shu)要(yao)求(qiu)分(fen)別在試劑(ji)準(zhun)備區(qu)、樣本處理區(qu)和PCR擴增區進行操(cao)作(zuo)，各(ge)區實(shi)驗服、儀(yi)器 、耗材應(ying)獨(du)立使用(yong)，不(bu)能(neng)混用(yong)；實(shi)驗用(yong)吸(xi)頭采(cai)用(yong)帶濾(lv)芯吸頭；樣(yang)本(ben)處理區(qu)應(ying)配有生物(wu)安全(quan)櫃(gui)，樣本(ben)處理在生(sheng)物(wu)安全(quan)櫃(gui)中進(jin)行操(cao)作(zuo)；三個(ge)區(qu)應(ying)該配(pei)有紫外線(xian)殺菌裝(zhuang)置(zhi)。
2. 為(wei)避(bi)免RNA降解(jie)，樣(yang)本處理過(guo)程應(ying)在0-4℃條件下(xia)操(cao)作(zuo)，且(qie)完(wan)成(cheng)實(shi)驗後(hou)立(li)即(ji)上(shang)機檢測(ce)；樣本處理過(guo)程中(zhong)使用(yong)的(de)器(qi)具(ju)耗(hao)材應(ying)經過無(wu)核(he)酶(mei)處理。
3. 每次實(shi)驗應(ying)該設(she)置(zhi)陰、陽性(xing)對照。
4. 試劑(ji)盒(he)所有(you)試劑(ji)在使用(yong)前(qian)應(ying)該在常溫(wen)下(xia)充(chong)分(fen)融(rong)化混勻，並應(ying)瞬時離心(xin)。
5. 試劑(ji)盒(he)內(nei)所配(pei)陰(yin)性和陽性(xing)對照在壹(yi)次使用(yong)前(qian)應(ying)全部轉移至(zhi)標(biao)本準備(bei)區，並單獨(du)存(cun)放(fang)。
6. 為(wei)防(fang)止熒(ying)光(guang)幹(gan)擾(rao)，應(ying)避(bi)免裸手(shou)直(zhi)接接觸PCR反(fan)應(ying)管(guan)，並應(ying)避(bi)免在PCR反(fan)應(ying)管(guan)上(shang)進(jin)行任何標記(ji)。
7. 儀器 擴增相關(guan)參數應(ying)按照本說明(ming)書(shu)相關(guan)要(yao)求(qiu)進(jin)行設(she)置(zhi)；不(bu)同(tong)批(pi)號試劑(ji)不(bu)能(neng)混用(yong)。
8. ABI系列熒(ying)光(guang)定量(liang)PCR儀參數設(she)置(zhi)中不(bu)選(xuan)ROX校正，淬(cui)滅(mie)基(ji)因(yin)選擇(ze)None。
9. 實(shi)驗過(guo)程(cheng)中(zhong)產品的廢(fei)棄(qi)物(wu)應(ying)該進(jin)行無(wu)害化處理後(hou)方(fang)可(ke)丟棄(qi)。
儲(chu)存(cun)條件：
14℃或(huo)－20℃樣品收集(ji)、處理及(ji)保存(cun)方(fang)法
1. 血(xue)清(qing)：使用(yong)不(bu)含(han)熱(re)原(yuan)和內(nei)毒素的試管(guan)，操(cao)作(zuo)過(guo)程中避(bi)免任何(he)細(xi)胞(bao)刺(ci)激(ji)，收集(ji)血(xue)液後(hou)，3000 轉離心(xin)10 分鐘將血(xue)清(qing)和紅(hong)細(xi)胞(bao)迅(xun)速小心(xin)地(di)分(fen)離(li)。
2. 血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸檬(meng)酸(suan)鹽(yan)或(huo)肝(gan)素抗凝(ning)。3000 轉離心(xin)30 分鐘取上(shang)清(qing)。
3. 細胞(bao)上(shang)清(qing)液：3000 轉離心(xin)10 分鐘去(qu)除(chu)顆(ke)粒和聚合(he)物(wu)。
4. 組(zu)織勻漿(jiang)：將組(zu)織加(jia)入(ru)適(shi)量生(sheng)理鹽(yan)水搗(dao)碎。3000 轉離心(xin)10 分鐘取上(shang)清(qing)。
5. 保存(cun)：如(ru)果樣(yang)本收集(ji)後不(bu)及(ji)時(shi)檢(jian)測(ce)，請按壹(yi)次用(yong)量(liang)分(fen)裝(zhuang)，凍存(cun)於-20℃，避(bi)免反(fan)復(fu)凍融(rong)，在室(shi)溫(wen)下(xia)解(jie)凍並確保樣(yang)品均勻地(di)充(chong)分(fen)解凍。
人胚(pei)胎，皮(pi)膚(fu)，肌(ji)肉;M-20四蟎嗪(qin)(標準品)Clofentezine質量規格(ge)：分析(xi)標(biao)準品,98.6%

PA317細胞(bao)，鼠(shu)胚(pei)胎成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao) 人小細胞(bao)肺(fei)癌(ai)細(xi)胞(bao),DMS153細胞(bao) CL-0396NCI-H226(人肺(fei)鱗(lin)癌(ai)細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×2四蟎嗪(qin)標(biao)準溶(rong)液(100μg/ml,u=4%)Clofentezine solution質量規格(ge)：100μg/ml,u=4%

中國倉鼠(shu)卵(luan)巢細胞(bao)系(xi);pDSr a2-mpl-X四蟎嗪(qin)標(biao)準溶(rong)液(10μg/ml,u=6%)Clofentezine solution質量規格(ge)：10μg/ml,u=6%

ICAM1 Others Human 人 ICAM-1 / CD54 人細胞(bao)裂(lie)解液 (陽性(xing)對照) 萎銹(xiu)靈(ling)(標準品)Carboxine質量規格(ge)：分析(xi)標(biao)準品,99.9%

穩定表達(da)EBNA1的人胚(pei)腎細(xi)胞(bao);293E環(huan)(Standard for GC,>99.0%(GC))Cyclohexal質量規格(ge)：Standard for GC,>99.0%(GC)
人胎盤(pan)絨膜癌(ai)細(xi)胞(bao);BeWo雜質CHydrochlorothiazide Impurity C質量規格(ge)：美國進口

HCC-9724細胞(bao)，人(ren)肝(gan)癌細(xi)胞(bao) 小鼠(shu)肥大細(xi)胞(bao)癌(ai)細胞(bao),P815細胞(bao) 牛腎細(xi)胞(bao);MDBK-d6Prednisolone-d6質量規格(ge)：美國進口

MDCK(犬腎(shen)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×29-甲(jia)基(ji)-d3-腺(xian)嘌呤9-Methyl-d3 Adenine質量規格(ge)：美國進口

Promocell C-23010 Fibroblast Growth Medium , 成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)生(sheng)長培(pei)養基(ji)(即用(yong)型(xing)) 500mlβ-腺(xian)嘌呤二核(he)苷(gan)1酸(suan), 縮(suo)減環(huan)已基(ji)銨鹽(yan)β-Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate, reduced tetra(cyclohexyl ammonium) salt質量規格(ge)：美國進口

牦(mao)牛皮(pi)膚(fu)細(xi)胞(bao);BMU-S1β-腺(xian)嘌呤二核(he)苷(gan)1酸(suan),縮(suo)減二鉀鹽(yan)β-Nicotinamide adenine dinucleotide, reduced dipotassium salt質量規格(ge)：美國進口
SMC-1細胞(bao)，人(ren)胸膜瘤(liu)細(xi)胞(bao) 鼠(shu)傷(shang)寒沙(sha)門(men)氏菌Ta98 大鼠(shu)肝(gan)細胞(bao)瘤(liu);H-4-II-E水溶(rong)性(xing)四氮唑(zuo)-5質量規格(ge)：BRGLT005

CX3CL1 Protein Canine 重組(zu)狗 Fractalkine / CX3CL1 蛋白水溶(rong)性(xing)四氮唑(zuo)-4質量規格(ge)：BRGLT004

MFC(小鼠(shu)胃(wei)癌細胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 小鼠(shu) C2 / Compleme Compone 2 人細胞(bao)裂(lie)解液 (陽性(xing)對照) 積雪草酸(suan)質量規格(ge)：HPLC≥90%,BRAsiatic acid

直結腸平(ping)滑(hua)肌(ji)細胞(bao)Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105方(fang)(1ml)積雪草酸(suan)（標準品）質量規格(ge)：HPLC≥98%，標準品Asiatic acid

NCSTN Others Mouse 小鼠(shu) Nicasin / NCSTN 人細胞(bao)裂(lie)解液 (陽性(xing)對照) 水合(he)氧(yang)化前(qian)胡(hu)素質量規格(ge)：HPLC≥98%，標準品OXYPEUCEDANINHYDRATE
石斛探針法PCR鑒定試劑(ji)盒(he)*LEPR Others Human 人 Leptin Receptor / LEPR / CD295 人細胞(bao)裂(lie)解液 (陽性(xing)對照) ETHAL,70%70%乙醇生物(wu)技術級無(wu)色(se)無(wu)混濁(zhuo)液體RT不(bu)sigma

人脈絡叢上皮(pi)細胞(bao)裂(lie)解物(wu)HCPEpiCL3-基(ji)-2-本噻坐啉(lin)腙(zong)言醋鹽(yan) 3-MqTHYL-2-BqNZOTHIcZOLINq HYDRcZONq xy7CHLORIDq 1490-12-1

RK1 Others Canine 狗 kA / RK1 人細胞(bao)裂(lie)解液 (陽性(xing)對照) SAPONIN皂苷(gan)試劑(ji)級米(mi)白色(se)至棕黃色(se)