京大(da)戟(ji)PCR鑒(jian)定試(shi)劑(ji)盒(he)保(bao)存(cun)

特點(dian)：
1. 即(ji)開(kai)即(ji)用，用(yong)戶只需(xu)要提(ti)供病毒(du)樣(yang)品。
2. 根(gen)據(ju)地黃保(bao)守序(xu)列設(she)計的專(zhuan)壹性引(yin)物，與(yu)相(xiang)關病毒(du)無交叉(cha)反應(ying)。
3. 靈敏度可(ke)以達到幾(ji)百拷(kao)貝/反(fan)應(ying)。
4. 壹管式(shi)熒光(guang)定量 PCR 檢測(ce)，避免後續汙(wu)染(ran)。
5. 本試劑(ji)盒(he)足(zu)夠(gou) 50 次(ci) 20μL 反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)的熒光(guang)定量 PCR。
6. 本產品(pin)只(zhi)適用於(yu)科(ke)研(yan)，不能用(yong)於(yu)臨(lin)床診斷。

使(shi)用方法：
壹、樣(yang)品采(cai)集(ji)：
1、食(shi)品(pin)樣(yang)品：樣(yang)品的采(cai)集(ji)與預(yu)培(pei)養(yang)按照(zhao)樣(yang)品的采(cai)集(ji)與預(yu)培(pei)養(yang)按照(zhao)《食(shi)品(pin)衛(wei)生(sheng)微生(sheng)物學檢驗阪崎腸(chang)桿(gan)菌(jun)檢驗要求(qiu)進(jin)行(xing)。
2、血(xue)液樣(yang)品：用(yong)無菌註射器(qi)抽(chou)取(qu)受(shou)檢者靜(jing)脈(mai)血(xue)2mL，註入(ru)無(wu)菌EDTA2Na(或檸檬(meng)酸鈉(na))抗(kang)凝(ning)管，立即(ji)混勻(yun)。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品：取(qu)糞(fen)便(bian)置(zhi)於(yu)滅(mie)菌(jun)的收(shou)集(ji)管中(zhong)送(song)檢。
4、病竈(zao)部位樣(yang)品：取(qu)發(fa)病部位新鮮滲(shen)出(chu)物、粘液(ye)膿血(xue)送檢。
壹、稀釋 PCR 陽(yang)性對(dui)照(zhao)（以 10E2-10E7 拷(kao)貝/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍稀釋度為(wei)例）
1. 註意(yi)：由(you)於(yu)標準品(pin)濃(nong)度非(fei)常高(gao)，因此(ci)下(xia)列(lie)稀釋(shi)操(cao)作(zuo)壹定要在獨立(li)的區域(yu)進行(xing)，千萬(wan)不能汙(wu)染(ran)樣(yang)品或本試劑(ji)盒(he)的其(qi)他成分(fen)）。為(wei)增(zeng)加產品(pin)穩定性和避免(mian)擴散傳染(ran)性病原(yuan)，本產品(pin)不提(ti)供活(huo)體(ti)樣(yang)品做(zuo)陽(yang)性對(dui)照(zhao)，只(zhi)提(ti)供可(ke)以直接(jie)使(shi)用的 DNA段(duan)作(zuo)為(wei)陽(yang)性對(dui)照(zhao)。
2. 標記(ji) 6 個(ge)離(li)心管(guan)，分(fen)別為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶芯槍頭(tou)分(fen)別加(jia)入(ru) 45 μL 熒光(guang) PCR 模(mo)板稀釋(shi)液(ye)（用帶芯槍頭(tou)，下同）。
4. 在 7 號(hao)管中加入(ru) 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)，充(chong)分(fen)震蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得(de)1×10E7 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待用。
5. 換(huan)槍(qiang)頭，在 6 號(hao)管中加入(ru) 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)(上(shang)步稀(xi)釋(shi)所(suo)得(de))，充(chong)分(fen)震蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得(de) 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待用。
6. 換(huan)槍(qiang)頭，在 5 號(hao)管中加入(ru) 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)到 5 號(hao)管中，充分(fen)震蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得(de) 1×10E5 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待用。
7. 重復(fu)上(shang)面的操(cao)作(zuo)直到得(de)到 6 個(ge)稀(xi)釋度的陽(yang)性對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待用。
註：上(shang)述(shu)樣(yang)品建(jian)議經過(guo)增(zeng)菌後(hou)，收(shou)集(ji)培(pei)養(yang)物(wu)用於(yu)檢測(ce)。 
二(er)、DNA提(ti)取(qu)：
可(ke)采(cai)用(yong)PCR試(shi)劑(ji)盒(he)配備(bei)的DNA抽(chou)提(ti)液，按以下說明進行(xing)DNA核(he)酸(suan)的粗(cu)提(ti)。也可(ke)采(cai)購(gou)上(shang)海澤葉生(sheng)物科技有(you)限(xian)公司生(sheng)產的DNA提(ti)取(qu)試劑(ji)盒(he)(過(guo)柱(zhu)法-熒光(guang)配套(tao))或其(qi)他合適的商(shang)業(ye)化產品(pin)，並(bing)按照(zhao)相(xiang)應試(shi)劑(ji)盒(he)說明進行(xing)操(cao)作(zuo)。
1、液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)：取(qu)液體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)100μL加(jia)到1.5mL無(wu)菌(jun)離心管(guan)中，8000rpm離(li)心3min，盡(jin)量(liang)吸棄上(shang)清，加入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min，取(qu)上(shang)清5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
2、固(gu)體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)：挑取(qu)單克(ke)隆(long)菌(jun)落與(yu)50μL DNA抽(chou)提(ti)液充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min，取(qu)上(shang)清5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品：挑取(qu)米粒(li)大(da)小糞(fen)便(bian)於(yu)滅(mie)菌(jun)離心管(guan)中，加入(ru)0.5mL生(sheng)理鹽水(shui)，振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻，13000rpm離(li)心3分(fen)鐘，棄(qi)上(shang)清，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min取(qu)上(shang)清5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
4、其(qi)他液體(ti)標本：取(qu)標本2-3mL，13000rpm離(li)心3min，棄(qi)上(shang)清，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min取(qu)上(shang)清5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
註：陽(yang)性對(dui)照(zhao)和陰性(xing)對照(zhao)為(wei)已經抽(chou)提(ti)好(hao)的核(he)酸(無(wu)需(xu)提(ti)取(qu))，直接(jie)取(qu)5μL加(jia)入(ru)到反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)中(zhong)即(ji)可(ke)。由(you)於(yu)陽(yang)性對(dui)照(zhao)濃(nong)度較(jiao)高(gao)，建(jian)議在樣(yang)品制備(bei)區域(yu)加入(ru)陽(yang)性對(dui)照(zhao)。 
實驗流(liu)程：
1. 整個檢測(ce)過程應嚴格按照(zhao)本說明書要求(qiu)分(fen)別在試劑(ji)準備(bei)區、樣(yang)本處理區和PCR擴(kuo)增(zeng)區進行(xing)操(cao)作(zuo)，各(ge)區實驗服(fu)、儀器 、耗(hao)材應(ying)獨(du)立使(shi)用，不能混(hun)用；實驗用(yong)吸頭采(cai)用(yong)帶濾芯吸頭；樣(yang)本處理區應配有(you)生(sheng)物安全櫃，樣(yang)本處理在生(sheng)物安全櫃中進行(xing)操(cao)作(zuo)；三(san)個(ge)區應該(gai)配有(you)紫(zi)外線(xian)殺菌裝(zhuang)置。
2. 為(wei)避免RNA降(jiang)解(jie)，樣(yang)本處理過程應在0-4℃條(tiao)件(jian)下操(cao)作(zuo)，且完成實驗後(hou)立即(ji)上(shang)機檢測(ce)；樣(yang)本處理過程中使(shi)用的器(qi)具耗(hao)材應(ying)經(jing)過無(wu)核酶處理。
3. 每(mei)次(ci)實驗應(ying)該設置陰、陽(yang)性對(dui)照(zhao)。
4. 試(shi)劑(ji)盒(he)所(suo)有試(shi)劑(ji)在使(shi)用前(qian)應(ying)該(gai)在常溫(wen)下充(chong)分(fen)融(rong)化混勻，並(bing)應(ying)瞬(shun)時離心。
5. 試(shi)劑(ji)盒(he)內(nei)所(suo)配陰(yin)性(xing)和陽(yang)性對(dui)照(zhao)在壹次使(shi)用前(qian)應(ying)全部轉移(yi)至標本準備(bei)區，並(bing)單獨存(cun)放。
6. 為(wei)防(fang)止(zhi)熒光(guang)幹擾，應(ying)避免(mian)裸手(shou)直接(jie)接觸PCR反(fan)應(ying)管，並(bing)應(ying)避(bi)免在PCR反(fan)應(ying)管上(shang)進行(xing)任何(he)標記(ji)。
7. 儀器 擴(kuo)增(zeng)相(xiang)關參(can)數(shu)應按照(zhao)本說明書相(xiang)關要求(qiu)進(jin)行(xing)設置(zhi)；不同批號(hao)試劑(ji)不能混(hun)用。
8. ABI系(xi)列(lie)熒光(guang)定量PCR儀參數(shu)設置中(zhong)不選(xuan)ROX校正，淬滅(mie)基因選(xuan)擇(ze)None。
9. 實驗過(guo)程中產品(pin)的廢棄物(wu)應該(gai)進(jin)行(xing)無害化處理後方可(ke)丟(diu)棄(qi)。
儲(chu)存(cun)條(tiao)件(jian)：
14℃或－20℃樣(yang)品收(shou)集(ji)、處理及保存(cun)方(fang)法
1. 血(xue)清：使(shi)用不含熱(re)原(yuan)和內毒(du)素的試(shi)管，操(cao)作(zuo)過(guo)程中避免任(ren)何(he)細(xi)胞刺激，收(shou)集(ji)血(xue)液後(hou)，3000 轉(zhuan)離(li)心10 分(fen)鐘將(jiang)血(xue)清和紅(hong)細(xi)胞迅速小心地分(fen)離。
2. 血(xue)漿：EDTA、檸檬(meng)酸鹽或肝(gan)素抗凝。3000 轉(zhuan)離(li)心30 分(fen)鐘取(qu)上(shang)清。
3. 細(xi)胞上(shang)清液：3000 轉(zhuan)離(li)心10 分(fen)鐘去(qu)除顆粒(li)和聚合物。
4. 組(zu)織(zhi)勻漿：將(jiang)組(zu)織加(jia)入(ru)適量生(sheng)理鹽水(shui)搗(dao)碎。3000 轉(zhuan)離(li)心10 分(fen)鐘取(qu)上(shang)清。
5. 保(bao)存(cun)：如(ru)果樣(yang)本收(shou)集(ji)後不及時(shi)檢測(ce)，請按壹次用量分(fen)裝，凍(dong)存(cun)於(yu)-20℃，避(bi)免(mian)反復凍(dong)融(rong)，在室溫(wen)下解(jie)凍(dong)並(bing)確(que)保(bao)樣(yang)品均勻(yun)地充分(fen)解凍(dong)。
RWPE1(人前(qian)列(lie)腺(xian)上(shang)皮細(xi)胞) 5×106cells/瓶(ping)×2Enalapril Maleate質(zhi)量規(gui)格：>98.5%,USP

Gibco E071000 MesenPRO RS? Medium 含(han)2%血(xue)清(New Zealand origin) 1 kit（標準品(pin)）Enalapril Maleate質(zhi)量規(gui)格：HPLC>99%,標準品(pin)

人雪旺細(xi)胞總(zong)RNAHSC NA氟(fu),5-氟(fu)脲(niao)嘧(mi)啶(ding),5-氟(fu)5-Fluorouracil質(zhi)量規(gui)格：>98%,BR,可(ke)用(yong)於(yu)細(xi)胞培(pei)養(yang)

小鼠(shu)小神(shen)經膠質(zhi)細(xi)胞(MM)(5×105)氟(fu),5-氟(fu)脲(niao)嘧(mi)啶(ding),5-氟(fu)（標準品(pin)）5-Fluorouracil質(zhi)量規(gui)格：HPLC>98%,標準品(pin)

黃(huang)胸(xiong)鼠(shu)肺成纖(xian)維細(xi)胞;YCR琥(hu)珀(po)酸舒馬(ma)曲普(pu)坦Sumatriptan succinate 質(zhi)量規(gui)格：>98%,BR
長(chang)尾綠猴胚(pei)胎(tai)細(xi)胞;4179重水(shui),氧(yang)化氘(dao)(10G)質(zhi)量規(gui)格：D,99.96%Deuterium Oxide

IgG Others Human 人 IgG1-Fc 人細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對(dui)照(zhao)) 重水(shui),氧(yang)化氘(dao)(25G)質(zhi)量規(gui)格：D,99.9%Deuterium Oxide

大(da)鼠(shu)胰(yi)島(dao)細(xi)胞瘤細(xi)胞;INS-1植物(wu)血(xue)凝素(su)質(zhi)量規(gui)格：BRPhytohemagglutinin

人脈(mai)絡絲內皮(pi)細(xi)胞 (HCPEC)( 5×105 )6-糠(kang)基氨基嘌呤(ling),激(ji)動素質(zhi)量規(gui)格：>98%,BRKinetin,6-Furfurylamipurine

大(da)隱靜(jing)脈(mai)平滑(hua)肌細(xi)胞Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105方(fang)(1ml)乙(yi)二(er)醇(chun)雙(2-氨(an)基乙基)四乙酸質(zhi)量規(gui)格：>98%,分(fen)子生(sheng)物學級EGTA, egtazic acid
IFNA4 Others Human 人 IFNα4 / IFNa4 / Ierferon alpha-4 人細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對(dui)照(zhao)) 外消旋(xuan)去(qu)異丙(bing)基托特羅(luo)定質(zhi)量規(gui)格：美(mei)國(guo)進口rac Didesisopropyl Tolterodine

中(zhong)國(guo)倉(cang)鼠(shu)卵巢細(xi)胞K1(亞(ya)系(xi)克(ke)隆(long));CHO-K1外消旋(xuan)5-羥(qiang)甲(jia)基托特羅(luo)定質(zhi)量規(gui)格：美(mei)國(guo)進口rac 5-Hydroxymethyl Tolterodine

MS4A1 Others Cymolgus 食(shi)蟹(xie)猴 CD20 / MS4A1 (aa 213-297) 人細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對(dui)照(zhao)) 外消旋(xuan)5-羧(suo)基去(qu)異丙(bing)基托特羅(luo)定質(zhi)量規(gui)格：美(mei)國(guo)進口rac 5-Carboxy Desisopropyl Tolterodine

肝(gan)內膽(dan)管上(shang)皮細(xi)胞Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105方(fang)(1ml)S-(-)-托(tuo)特羅(luo)定質(zhi)量規(gui)格：美(mei)國(guo)進口S-(-)-Tolterodine

CoLo 320DM細(xi)胞，結腸癌細(xi)胞 人卵巢癌細(xi)胞系(xi),3AO細(xi)胞 人口腔角(jiao)質(zhi)細(xi)胞cDNAHOK cDNA外消旋(xuan)4-羥(qiang)基-9-順(shun)式(shi)-質(zhi)量規(gui)格：美(mei)國(guo)進口rac 4-Hydroxy-9-cis-retiic Acid
京大(da)戟(ji)PCR鑒(jian)定試(shi)劑(ji)盒(he)保(bao)存(cun)CDH6 Others Mouse 小鼠(shu) Cadherin-6 / CDH6 人細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對(dui)照(zhao)) MOPSwo7iumSALTMOPS, Na蛋(dan)白(bai)組(zu)學級白(bai)色(se)粉(fen)末(mo)RTsigma

大(da)鼠(shu)肝(gan)動脈(mai)平滑(hua)肌細(xi)胞*培(pei)養(yang)基 100mLβ-乳(ru)球蛋(dan)柏　(+4℃) BqTc-LcCTOGLOBULIN 9042-3-

NAMALWA人Butt's瘤細(xi)胞 NAMALWA human Butt's lymphoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS噻(sai)唑(zuo)藍 (常(chang)規(gui)) Thiazolyl Blue T