天(tian)南星(xing)PCR鑒(jian)定(ding)試劑盒說明(ming)書

儲存(cun)條件：
14℃或－20℃樣(yang)品收集、處理(li)及(ji)保存方(fang)法(fa)
1. 血清(qing)：使(shi)用(yong)不(bu)含熱(re)原(yuan)和(he)內毒素(su)的試管(guan)，操(cao)作過程(cheng)中(zhong)避免任何細(xi)胞(bao)刺(ci)激，收集血液(ye)後(hou)，3000 轉離(li)心(xin)10 分鐘將血清(qing)和(he)紅細(xi)胞(bao)迅(xun)速(su)小(xiao)心(xin)地分離。
2. 血漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬(meng)酸鹽或肝(gan)素(su)抗(kang)凝。3000 轉離(li)心(xin)30 分鐘取上清(qing)。
3. 細(xi)胞(bao)上清(qing)液(ye)：3000 轉離(li)心(xin)10 分鐘去除(chu)顆粒(li)和(he)聚(ju)合(he)物(wu)。
4. 組織(zhi)勻(yun)漿：將組織(zhi)加(jia)入適(shi)量生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)搗碎。3000 轉離(li)心(xin)10 分鐘取上清(qing)。
5. 保(bao)存：如果樣(yang)本收集後(hou)不(bu)及時(shi)檢(jian)測，請(qing)按壹次用(yong)量分裝(zhuang)，凍存於-20℃，避免反(fan)復凍融，在室(shi)溫(wen)下(xia)解凍並確保樣(yang)品均(jun)勻(yun)地充分解凍。

特(te)點：
1. 即開(kai)即用(yong)，用(yong)戶只需(xu)要提(ti)供病毒(du)樣(yang)品。
2. 根據(ju)地黃(huang)保守序(xu)列設計的(de)專壹(yi)性引物(wu)，與相(xiang)關(guan)病毒(du)無(wu)交(jiao)叉反(fan)應。
3. 靈(ling)敏(min)度(du)可以達到幾(ji)百(bai)拷貝/反(fan)應。
4. 壹(yi)管(guan)式熒光定(ding)量 PCR 檢(jian)測，避免後(hou)續汙染。
5. 本試劑盒足夠(gou) 50 次 20μL 反(fan)應體系(xi)的(de)熒光定(ding)量 PCR。
6. 本產(chan)品(pin)只適(shi)用(yong)於科研(yan)，不(bu)能(neng)用於臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷。

使(shi)用方(fang)法(fa)：
壹(yi)、樣(yang)品采(cai)集：
1、食品樣(yang)品：樣(yang)品的(de)采(cai)集與預(yu)培(pei)養按照樣(yang)品的(de)采(cai)集與預(yu)培(pei)養按照《食品衛(wei)生(sheng)微(wei)生(sheng)物(wu)學檢驗(yan)阪(ban)崎腸(chang)桿(gan)菌檢(jian)驗(yan)要(yao)求進行。
2、血液(ye)樣(yang)品：用(yong)無(wu)菌(jun)註射器抽(chou)取受檢(jian)者靜(jing)脈血2mL，註(zhu)入無菌EDTA2Na(或檸(ning)檬(meng)酸鈉)抗(kang)凝管(guan)，立(li)即混(hun)勻(yun)。
3、糞(fen)便樣(yang)品：取(qu)糞(fen)便置(zhi)於滅菌的收集管(guan)中(zhong)送(song)檢(jian)。
4、病竈(zao)部位樣(yang)品：取(qu)發(fa)病部位新鮮滲出物(wu)、粘液(ye)膿血送(song)檢(jian)。
壹(yi)、稀釋 PCR 陽(yang)性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍(bei)稀釋度(du)為(wei)例(li)）
1. 註(zhu)意：由(you)於標準品濃度(du)非常高(gao)，因(yin)此(ci)下(xia)列稀釋操作壹(yi)定(ding)要在(zai)獨(du)立的(de)區(qu)域(yu)進行，千(qian)萬(wan)不(bu)能(neng)汙染樣(yang)品或本試劑盒的其(qi)他(ta)成(cheng)分）。為(wei)增(zeng)加(jia)產(chan)品穩定(ding)性和(he)避免擴(kuo)散傳染性病原(yuan)，本產(chan)品(pin)不(bu)提供活(huo)體樣(yang)品做(zuo)陽性對照，只提(ti)供可(ke)以直(zhi)接(jie)使用(yong)的 DNA段(duan)作為(wei)陽(yang)性對照。
2. 標(biao)記 6 個(ge)離心(xin)管(guan)，分別為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶(dai)芯槍(qiang)頭(tou)分別加(jia)入 45 μL 熒(ying)光 PCR 模(mo)板(ban)稀(xi)釋液(ye)（用帶(dai)芯槍(qiang)頭(tou)，下(xia)同(tong)）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管(guan)中(zhong)加(jia)入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的(de)陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的(de)陽性對照。放冰上待用(yong)。
5. 換(huan)槍(qiang)頭(tou)，在(zai) 6 號(hao)管(guan)中(zhong)加(jia)入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的(de)陽性對照(上步(bu)稀釋所(suo)得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的(de)陽性對照。放冰上待用(yong)。
6. 換(huan)槍(qiang)頭(tou)，在(zai) 5 號(hao)管(guan)中(zhong)加(jia)入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的(de)陽性對照到 5 號(hao)管(guan)中(zhong)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的(de)陽性對照。放冰上待用(yong)。
7. 重(zhong)復(fu)上面的(de)操(cao)作直(zhi)到得(de)到 6 個(ge)稀釋度(du)的陽性對照。放冰上待用(yong)。
註(zhu)：上述樣(yang)品建(jian)議經(jing)過增(zeng)菌(jun)後(hou)，收集培(pei)養物(wu)用於檢測。 
二(er)、DNA提(ti)取：
可(ke)采用PCR試劑盒配備(bei)的(de)DNA抽(chou)提液(ye)，按以(yi)下(xia)說明(ming)進行DNA核(he)酸的粗提。也(ye)可采(cai)購(gou)上海澤(ze)葉(ye)生(sheng)物(wu)科技有限公(gong)司生(sheng)產(chan)的DNA提(ti)取試劑盒(過柱(zhu)法(fa)-熒(ying)光配套)或其(qi)他(ta)合適(shi)的(de)商(shang)業(ye)化產品，並按(an)照相(xiang)應試劑盒說明(ming)進行操(cao)作。
1、液(ye)體培(pei)養物(wu)：取液(ye)體培(pei)養物(wu)100μL加(jia)到1.5mL無(wu)菌離心(xin)管(guan)中(zhong)，8000rpm離(li)心3min，盡(jin)量吸(xi)棄上清(qing)，加(jia)入50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min，取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
2、固(gu)體培(pei)養物(wu)：挑取(qu)單(dan)克(ke)隆(long)菌落與(yu)50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min，取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
3、糞(fen)便樣(yang)品：挑(tiao)取(qu)米(mi)粒(li)大(da)小糞(fen)便於滅菌離心管(guan)中(zhong)，加(jia)入0.5mL生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)，振(zhen)蕩混勻(yun)，13000rpm離(li)心3分鐘，棄上清(qing)，沈澱(dian)中加(jia)入50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
4、其(qi)他(ta)液(ye)體標(biao)本：取(qu)標(biao)本2-3mL，13000rpm離(li)心3min，棄(qi)上清(qing)，沈澱(dian)中加(jia)入50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
註(zhu)：陽性對照和陰性對照為(wei)已(yi)經(jing)抽提(ti)好的(de)核酸(無(wu)需(xu)提取(qu))，直(zhi)接(jie)取5μL加(jia)入到反(fan)應體系(xi)中(zhong)即可(ke)。由(you)於陽性對照濃度(du)較高(gao)，建(jian)議在樣(yang)品制(zhi)備(bei)區(qu)域(yu)加(jia)入陽性對照。 
C-33 A(人子細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 T-107B(含(han)100mL酶(mei)解緩沖(chong)液(ye))10mL 人導(dao)管(guan)癌細(xi)胞(bao);ZR-75-30殺(sha)蟲脲(標(biao)準品)Triflumuron質(zhi)量規(gui)格(ge)：分析(xi)標準品

水(shui)牛皮膚成(cheng)纖維(wei)樣(yang)細(xi)胞(bao);WB-S1戊(wu)菌(jun)隆(long)(分析(xi)標準品,99.5%)Pencycuron質(zhi)量規(gui)格(ge)：分析(xi)標準品,99.5%

F11R Others Rat 大(da)鼠 JAM-A / F11R 人細(xi)胞(bao)裂解液(ye) (陽(yang)性對照) 噻(sai)蟎酮標準溶液(ye)(100μg/ml,u=3%)Hexythiazox solution質(zhi)量規(gui)格(ge)：100μg/ml,u=3%

人支氣(qi)管(guan)上皮細(xi)胞(bao)*培(pei)養基(ji) 100mL噻(sai)蟎酮標準溶液(ye)(10μg/ml,u=6%)Hexythiazox solution質(zhi)量規(gui)格(ge)：10μg/ml,u=6%

D407細(xi)胞(bao)，人視網(wang)膜色素(su)上皮細(xi)胞(bao) 出芽(ya)短(duan)梗黴 人急性T細(xi)胞(bao)性白(bai)血病細(xi)胞(bao);I 2.1(CRL-2572)抑(yi)黴唑(zuo)標準溶液(ye)(100μg/ml,u=2%)Imazalil solution質(zhi)量規(gui)格(ge)：100μg/ml,u=2%
CEACAM5 Others Human 人 CEACAM5 / CD66e 人細(xi)胞(bao)裂解液(ye) (陽(yang)性對照) 2,3-萘(nai)二(er)羧(suo)1(>95.0%(GC)(T))2,3-Naphthalenedicarboxylic Anhydride質(zhi)量規(gui)格(ge)：>95.0%(GC)(T)

間(jian)充質(zhi)幹(gan)細(xi)胞(bao)培(pei)養基(ji)MSCM-prf2,4,6-三(十(shi)五(wu)氟(fu)庚(geng)基(ji))-1,3,5-三嗪(>98.0%(GC))2,4,6-3(pentadecafluoroheptyl)-1,3,5-triazine質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98.0%(GC)

CD33 Others Human 人 CD33 / Siglec-3 人細(xi)胞(bao)裂解液(ye) (陽(yang)性對照) 5-(2-氨(an)乙基(ji)氨基(ji))-1-萘(nai)磺酸鈉水(shui)合物(wu)(>98.0%(HPLC)) 5-(2-Aminoethylamino)-1-naphthalenesulfonate Hydrate質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98.0%(HPLC)

EB病毒(du)轉化(hua)的(de)人B細(xi)胞(bao);KMYM四(si)溴熒(ying)光素(su)鉀鹽(yan)(>85.0%(HPLC))Tetrabromofluorescein Potassium Salt質(zhi)量規(gui)格(ge)：>85.0%(HPLC)

HNE1細(xi)胞(bao)，人鼻咽(yan)癌細(xi)胞(bao) 小(xiao)鼠骨(gu)髓瘤(liu)細(xi)胞(bao),FO細(xi)胞(bao) CM-H006人肺動脈成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞(bao)*培(pei)養基(ji)100mL溶劑紅 48(>98.0%(HPLC)(T))2',4',5',7'-Tetrabromo-3,4,5,6-tetrachlorofluorescein質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98.0%(HPLC)(T)
Promocell C-27437 Preadipocyte DiffereiationMedium KIT, 前(qian)脂(zhi)肪(fang)細(xi)胞(bao)分化培(pei)養基(ji)套裝(zhuang) 500mlD-巖(yan)藻糖(tang)質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%,日(ri)本進(jin)口(kou)原裝(zhuang)D-(+)-FUCOSE

小(xiao)鼠心肌細(xi)胞(bao)MCMN-乙(yi)酰-DL-質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%,BRN-Acetyl-DL-Serine

EFNA5 Others Canine 狗(gou) Ephrin-A5 / EFNA5 人細(xi)胞(bao)裂解液(ye) (陽(yang)性對照) 玉(yu)米(mi)素(su)質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%,BRZeatin

人胚(pei)胎肌肉(rou)組織(zhi)來(lai)源細(xi)胞(bao);CCC-HSM-2質(zhi)量規(gui)格(ge)：UV 80%；單(dan)賓(bin)30%Silymarin

NCI-H446細(xi)胞(bao)，人小細(xi)胞(bao)肺(fei)癌細(xi)胞(bao) 大(da)鼠神經(jing)膠質(zhi)瘤(liu)細(xi)胞(bao),C6細(xi)胞(bao) CM-H111人成(cheng)骨(gu)細(xi)胞(bao)*培(pei)養基(ji)100mL（標(biao)準品）質(zhi)量規(gui)格(ge)：UV法(fa)含量測定(ding)Candesartan cilexetil
天(tian)南星(xing)PCR鑒(jian)定(ding)試劑盒說明(ming)書CASK Others Human 人 CASK Kinase 桿(gan)狀病毒(du)-昆蟲細(xi)胞(bao)裂解液(ye) (陽(yang)性對照) 5-溴-4-錄(lu)-3-吲(yin)哚基(ji)-N-乙(yi)酰-β-D-基(ji)半乳糖(tang)苷(gan)，英(ying)文(wen)名或英文(wen)縮寫：X-GalNAc，級(ji)別：BR，10u/ul，規(gui)格(ge)：1克(ke)

豬(zhu)腎細(xi)胞(bao);PK(15)1，1-二(er)醌亞安(an) 1,1'-DIcNTHRIMIDq 8--4

BRL 3A細(xi)胞(bao)，大(da)鼠肝(gan)細(xi)胞(bao) 人轉移胰腺癌細(xi)胞(bao),AsPc-1細(xi)胞(bao) CM-R109大(da)鼠腦(nao)成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞(bao)*培(pei)養基(ji)100mL無(wu)水(shui)流醋錳 Mcngcnqsq sulphctq 7782-87-7

大(da)
實(shi)驗(yan)流(liu)程(cheng)：
1. 整(zheng)個(ge)檢測過程(cheng)應嚴格按(an)照本說明(ming)書要(yao)求分別在(zai)試劑準備(bei)區(qu)、樣(yang)本處理(li)區(qu)和(he)PCR擴(kuo)增(zeng)區(qu)進(jin)行操(cao)作，各區(qu)實(shi)驗(yan)服、儀(yi)器 、耗材(cai)應獨(du)立使(shi)用(yong)，不(bu)能(neng)混用；實(shi)驗(yan)用(yong)吸(xi)頭采用帶(dai)濾芯吸(xi)頭；樣(yang)本處理(li)區(qu)應配有生(sheng)物(wu)安(an)全櫃，樣(yang)本處理(li)在(zai)生(sheng)物(wu)安(an)全櫃中進(jin)行操(cao)作；三個(ge)區(qu)應該配有紫外(wai)線殺(sha)菌(jun)裝(zhuang)置(zhi)。
2. 為(wei)避免RNA降解，樣(yang)本處理(li)過程(cheng)應在0-4℃條件下(xia)操(cao)作，且(qie)完(wan)成(cheng)實(shi)驗(yan)後(hou)立即上機檢(jian)測；樣(yang)本處理(li)過程(cheng)中(zhong)使(shi)用(yong)的器具耗材(cai)應經(jing)過無(wu)核(he)酶處理(li)。

3. 每次實(shi)驗(yan)應該設(she)置(zhi)陰、陽性對照。
4. 試劑盒所(suo)有試劑在使用(yong)前(qian)應該在(zai)常溫(wen)下(xia)充分融化混(hun)勻(yun)，並應瞬時(shi)離(li)心。
5. 試劑盒內所(suo)配陰性和(he)陽(yang)性對照在壹次使(shi)用(yong)前(qian)應全部轉移至標本準備(bei)區(qu)，並(bing)單(dan)獨(du)存放(fang)。
6. 為(wei)防(fang)止(zhi)熒光(guang)幹(gan)擾(rao)，應避免裸(luo)手(shou)直(zhi)接(jie)接(jie)觸PCR反(fan)應管(guan)，並(bing)應避免在(zai)PCR反(fan)應管(guan)上進行任何標記(ji)。
7. 儀(yi)器 擴(kuo)增(zeng)相(xiang)關(guan)參數(shu)應按照本說明(ming)書相(xiang)關(guan)要求進行設(she)置(zhi)；不(bu)同(tong)批(pi)號(hao)試劑不(bu)能(neng)混用。
8. ABI系(xi)列熒光定(ding)量PCR儀(yi)參數(shu)設(she)置(zhi)中(zhong)不(bu)選ROX校(xiao)正，淬滅基(ji)因選(xuan)擇(ze)None。
9. 實(shi)驗(yan)過程(cheng)中(zhong)產(chan)品(pin)的廢(fei)棄(qi)物(wu)應該進(jin)行無(wu)害化處理(li)後(hou)方(fang)可(ke)丟棄。