天南(nan)星染料(liao)法PCR鑒定試劑盒*

實(shi)驗(yan)流程(cheng)：
1. 整(zheng)個檢(jian)測(ce)過(guo)程應(ying)嚴格(ge)按(an)照本(ben)說(shuo)明書(shu)要求(qiu)分(fen)別(bie)在試劑準備(bei)區、樣(yang)本(ben)處(chu)理區和PCR擴增(zeng)區(qu)進(jin)行操(cao)作，各(ge)區實(shi)驗(yan)服、儀器(qi) 、耗(hao)材應(ying)獨立使(shi)用，不能混(hun)用；實(shi)驗(yan)用吸頭(tou)采(cai)用帶(dai)濾(lv)芯(xin)吸頭(tou)；樣本(ben)處(chu)理區應(ying)配(pei)有(you)生物(wu)安全(quan)櫃(gui)，樣本(ben)處(chu)理在生物(wu)安全(quan)櫃(gui)中進(jin)行操(cao)作；三個區應(ying)該配(pei)有(you)紫外(wai)線(xian)殺(sha)菌裝置。
2. 為避免RNA降解(jie)，樣(yang)本(ben)處(chu)理過(guo)程應(ying)在0-4℃條(tiao)件(jian)下(xia)操作(zuo)，且完(wan)成實(shi)驗(yan)後立即(ji)上(shang)機檢(jian)測(ce)；樣(yang)本(ben)處(chu)理過(guo)程中(zhong)使(shi)用的(de)器(qi)具(ju)耗材應(ying)經(jing)過(guo)無核酶處(chu)理。
3. 每(mei)次實(shi)驗(yan)應(ying)該設置陰(yin)、陽性(xing)對(dui)照。
4. 試劑盒所有(you)試劑在使(shi)用前(qian)應(ying)該在(zai)常(chang)溫下(xia)充(chong)分融化混勻，並(bing)應(ying)瞬(shun)時離(li)心(xin)。
5. 試劑盒內所配(pei)陰(yin)性(xing)和(he)陽性對(dui)照在(zai)壹次使(shi)用前(qian)應(ying)全部(bu)轉移至(zhi)標本(ben)準(zhun)備(bei)區，並(bing)單獨存(cun)放。
6. 為防止(zhi)熒(ying)光幹擾(rao)，應(ying)避免裸(luo)手(shou)直接接觸(chu)PCR反(fan)應(ying)管(guan)，並(bing)應(ying)避免在(zai)PCR反(fan)應(ying)管(guan)上進(jin)行任(ren)何標記(ji)。
7. 儀器(qi) 擴增(zeng)相(xiang)關(guan)參(can)數應(ying)按(an)照本(ben)說(shuo)明書(shu)相關(guan)要求(qiu)進(jin)行設置；不同批號(hao)試劑不能混(hun)用。
8. ABI系(xi)列熒(ying)光定量PCR儀參數設置中(zhong)不選ROX校(xiao)正(zheng)，淬滅基因選擇None。
9. 實(shi)驗(yan)過(guo)程中(zhong)產(chan)品的(de)廢(fei)棄物應(ying)該進(jin)行無害化處(chu)理後方可丟(diu)棄。

特(te)點：
1. 即(ji)開(kai)即(ji)用(yong)，用戶(hu)只需(xu)要提(ti)供(gong)病(bing)毒(du)樣品。
2. 根據(ju)地黃保(bao)守(shou)序列設計的(de)專壹性引(yin)物(wu)，與相關病(bing)毒(du)無交叉(cha)反(fan)應(ying)。
3. 靈(ling)敏度(du)可(ke)以達(da)到(dao)幾百(bai)拷(kao)貝(bei)/反(fan)應(ying)。
4. 壹管(guan)式(shi)熒(ying)光定量 PCR 檢(jian)測(ce)，避(bi)免後(hou)續汙(wu)染(ran)。
5. 本(ben)試劑盒足(zu)夠 50 次 20μL 反(fan)應(ying)體系(xi)的(de)熒光定量 PCR。
6. 本(ben)產(chan)品只適用於科(ke)研，不能用(yong)於臨床診斷(duan)。
使(shi)用方(fang)法：
壹、樣品采(cai)集：
1、食(shi)品樣(yang)品：樣(yang)品的(de)采(cai)集與(yu)預(yu)培(pei)養按(an)照樣(yang)品的(de)采(cai)集與(yu)預(yu)培(pei)養按(an)照《食(shi)品衛(wei)生微生物(wu)學檢(jian)驗(yan)阪(ban)崎腸桿(gan)菌檢(jian)驗(yan)要求(qiu)進(jin)行。
2、血(xue)液樣品：用(yong)無菌註(zhu)射(she)器(qi)抽(chou)取受(shou)檢(jian)者(zhe)靜脈血2mL，註(zhu)入(ru)無菌EDTA2Na(或(huo)檸(ning)檬酸鈉(na))抗(kang)凝管(guan)，立即(ji)混(hun)勻。
3、糞(fen)便樣(yang)品：取(qu)糞(fen)便置於滅菌的收集管(guan)中送檢(jian)。
4、病(bing)竈部(bu)位樣(yang)品：取(qu)發(fa)病(bing)部(bu)位新(xin)鮮滲出(chu)物(wu)、粘(zhan)液膿血送檢(jian)。
壹、稀釋(shi) PCR 陽(yang)性對(dui)照（以 10E2-10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 這(zhe) 6 個 10 倍稀釋(shi)度(du)為例）
1. 註(zhu)意(yi)：由於標準品濃(nong)度(du)非(fei)常高(gao)，因此下(xia)列稀釋(shi)操作(zuo)壹定要在(zai)獨立的區域進(jin)行，千(qian)萬(wan)不能汙(wu)染樣(yang)品或(huo)本(ben)試劑盒的(de)其他(ta)成分(fen)）。為增(zeng)加(jia)產品穩(wen)定(ding)性和避(bi)免擴散(san)傳(chuan)染性(xing)病(bing)原，本(ben)產(chan)品不提(ti)供(gong)活體樣品做(zuo)陽(yang)性對(dui)照，只提(ti)供(gong)可(ke)以直接使(shi)用的(de) DNA段(duan)作為陽性(xing)對(dui)照。
2. 標記(ji) 6 個離(li)心(xin)管(guan)，分別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶芯(xin)槍頭(tou)分別(bie)加(jia)入 45 μL 熒(ying)光 PCR 模(mo)板(ban)稀釋(shi)液（用帶芯(xin)槍頭(tou)，下(xia)同）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管(guan)中加(jia)入 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽性(xing)對(dui)照，充(chong)分震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得(de)1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽性(xing)對(dui)照。放(fang)冰(bing)上(shang)待用。
5. 換(huan)槍頭(tou)，在 6 號(hao)管(guan)中加(jia)入 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽性(xing)對(dui)照(上(shang)步稀釋(shi)所得(de))，充(chong)分震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得(de) 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽性(xing)對(dui)照。放(fang)冰(bing)上(shang)待用。
6. 換(huan)槍頭(tou)，在 5 號(hao)管(guan)中加(jia)入 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽性(xing)對(dui)照到(dao) 5 號(hao)管(guan)中，充(chong)分震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得(de) 1×10E5 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽性(xing)對(dui)照。放(fang)冰(bing)上(shang)待用。
7. 重(zhong)復上(shang)面(mian)的(de)操作(zuo)直到(dao)得(de)到(dao) 6 個稀釋(shi)度(du)的(de)陽性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上(shang)待用。
註(zhu)：上(shang)述樣品建(jian)議(yi)經(jing)過(guo)增(zeng)菌後，收集培(pei)養物用(yong)於檢(jian)測(ce)。 
二(er)、DNA提(ti)取(qu)：
可(ke)采(cai)用PCR試劑盒配(pei)備(bei)的DNA抽(chou)提(ti)液，按(an)以下(xia)說(shuo)明進(jin)行DNA核(he)酸的(de)粗提(ti)。也可采(cai)購上海(hai)澤(ze)葉(ye)生物(wu)科(ke)技有(you)限(xian)公(gong)司(si)生產(chan)的(de)DNA提(ti)取(qu)試劑盒(過(guo)柱法-熒(ying)光配(pei)套(tao))或(huo)其他(ta)合適的商(shang)業(ye)化產品，並(bing)按(an)照相(xiang)應(ying)試劑盒說(shuo)明進(jin)行操(cao)作。
1、液體培(pei)養物：取(qu)液體培(pei)養物100μL加(jia)到(dao)1.5mL無菌離(li)心(xin)管(guan)中，8000rpm離(li)心(xin)3min，盡(jin)量吸棄(qi)上清(qing)，加(jia)入50μL DNA抽(chou)提(ti)液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應(ying)。
2、固體(ti)培(pei)養物：挑(tiao)取(qu)單克隆(long)菌落(luo)與50μL DNA抽(chou)提(ti)液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應(ying)。
3、糞(fen)便樣(yang)品：挑(tiao)取(qu)米(mi)粒(li)大(da)小糞便於滅菌離(li)心(xin)管(guan)中，加(jia)入0.5mL生理鹽水，振蕩混(hun)勻，13000rpm離(li)心(xin)3分(fen)鐘，棄(qi)上(shang)清(qing)，沈澱中加(jia)入50μL DNA抽(chou)提(ti)液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應(ying)。
4、其他(ta)液體標本(ben)：取(qu)標本(ben)2-3mL，13000rpm離(li)心(xin)3min，棄(qi)上清(qing)，沈澱中加(jia)入50μL DNA抽(chou)提(ti)液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應(ying)。
註(zhu)：陽(yang)性對(dui)照和(he)陰(yin)性(xing)對(dui)照為已經(jing)抽(chou)提(ti)好(hao)的(de)核(he)酸(無需(xu)提(ti)取(qu))，直接取5μL加(jia)入到(dao)反應(ying)體系(xi)中(zhong)即(ji)可(ke)。由於陽性對(dui)照濃(nong)度(du)較(jiao)高(gao)，建(jian)議(yi)在(zai)樣品制備(bei)區域(yu)加(jia)入陽性(xing)對(dui)照。 
CADM3 Others Human 人(ren) CADM3 / NECL1 / IGSF4B 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照) Indapamide質(zhi)量規(gui)格(ge)：>99%,EP6.0,BR

中(zhong)國倉(cang)鼠(shu)卵(luan)巢(chao)細(xi)胞(bao)(亞系克隆(long));CHO-HCV-NS5A（標準品）Indapamide質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC>98%,標準品

CLEC5A Others Cynomolgus 食(shi)蟹(xie)猴(hou) CLEC5A / MDL1 / MDL-1 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照) 帕(pa)醇(標準品)Iopamidol質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC>98%,USP

角(jiao)膜內皮(pi)細(xi)胞(bao)Many types of cells包(bao)裝：5 × 105方(fang)(1ml)帕(pa)醇Iopamidol質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%,USP

Ec109細(xi)胞(bao)，食(shi)管(guan)癌(ai)細(xi)胞(bao) 人(ren)卵巢(chao)癌(ai)細(xi)胞(bao),COC1細(xi)胞(bao) 人(ren)脈絡叢內皮(pi)細(xi)胞(bao)cDNAHCPEC cDNALoperamide HCl質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%,BR
人(ren)胚肺細(xi)胞(bao)VA13細(xi)胞(bao);WI-38 VA13亞系2RA 人(ren)直結(jie)腸(chang)平(ping)滑(hua)肌(ji)細(xi)胞(bao)*培(pei)養基 100mL醋(cu)酸布(bu)舍瑞(rui)林Buserelin Acetate質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%,BR

人(ren)結(jie)腸(chang)平(ping)滑(hua)肌(ji)細(xi)胞(bao)HCSMC司(si)骨(gu)化醇Secalciferol質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%,BR

NRN1L Others Human 人(ren) NRN1L / neuritin 1-like / Cpg15-2 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照) 25-羥甾(zai)醇25-Hydroxyvitamin D2質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%,BR

小型豬腎(shen)細(xi)胞(bao);MPK利拉魯(lu)肽(tai)Liraglutide質(zhi)量規(gui)格(ge)：>95%,BR

H125細(xi)胞(bao)，人(ren)肺癌(ai)細(xi)胞(bao) 小鼠脂肪(fang)細(xi)胞(bao),L13T3細(xi)胞(bao) CM-R111大(da)鼠雪(xue)旺(wang)氏(shi)細(xi)胞(bao)*培(pei)養基100mLMK4827 (Niraparib)MK-4827 (Niraparib)質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%,BR
新(xin)生牛(niu)眼(yan)晶(jing)體上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao);NBLE甘(gan)膽(dan)酸(suan)鈉(na) ;甘(gan)氨(an)膽(dan)酸(suan)鈉(na)質(zhi)量規格(ge)：>98% Glycocholate Hydrate

MERTK Others Human 人(ren) Mer / MERTK 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照) ；D-甘(gan)露糖醇質量規(gui)格(ge)：>99%,BRMannitol；D-Mannitol

CM-R012大(da)鼠肺動脈成纖維(wei)細(xi)胞(bao)*培(pei)養基100mL(標準品)質(zhi)量規(gui)格(ge)：>99%,BRFluvastatin  salt

SIRPA Others Mouse 小鼠 SIRP alpha / CD172a 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照) 克(ke)林沙星質量(liang)規(gui)格(ge)：>98.5%Clinafloxacin

小鼠皮(pi)下(xia)脂肪(fang)細(xi)胞(bao)*培(pei)養基 100mL質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%,BRLevamisole HCl
天南(nan)星染料(liao)法PCR鑒(jian)定試劑盒*H22(小鼠肝癌(ai)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 小鼠顆粒(li)細(xi)胞(bao)MGC卡維(wei)丁（標準品）質(zhi)量(liang)規格(ge)：含量測定(ding)Cavidine

胎牛(niu)血(xue)清(qing)FBS5-羥色(se)胺鹽酸鹽(yan)（標準品）質(zhi)量(liang)規格(ge)：含量測定(ding)Serotonin 

PLXDC1 Others Human 人(ren) PLXDC1 / TEM3 / TEM7 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照) （標準品）質(zhi)量(liang)規格(ge)：鑒別(bie)Evening primrose oil

CHO 中(zhong)國倉(cang)鼠(shu)卵(luan)巢(chao)細(xi)胞(bao)龍血素(su)A（標準品）質(zhi)量(liang)規格(ge)：含量測定(ding)Loureirin A

CL-0038BRL(大(da)鼠肝細(xi)
儲(chu)存(cun)條(tiao)件(jian)：
14℃或(huo)－20℃樣(yang)品收(shou)集(ji)、處(chu)理及保存(cun)方法
1. 血(xue)清(qing)：使(shi)用不含熱(re)原和內毒素的(de)試管(guan)，操作(zuo)過(guo)程中(zhong)避(bi)免任(ren)何細(xi)胞(bao)刺(ci)激(ji)，收集血(xue)液後，3000 轉離(li)心(xin)10 分(fen)鐘將(jiang)血(xue)清(qing)和紅(hong)細(xi)胞(bao)迅(xun)速(su)小心(xin)地分(fen)離(li)。
2. 血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬酸鹽(yan)或(huo)肝素(su)抗(kang)凝。3000 轉離(li)心(xin)30 分(fen)鐘取(qu)上(shang)清(qing)。
3. 細(xi)胞(bao)上(shang)清(qing)液：3000 轉離(li)心(xin)10 分(fen)鐘去(qu)除顆(ke)粒(li)和聚(ju)合物。
4. 組(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)：將組(zu)織(zhi)加(jia)入適量生理鹽水搗(dao)碎(sui)。3000 轉離(li)心(xin)10 分(fen)鐘取(qu)上(shang)清(qing)。
5. 保(bao)存(cun)：如果(guo)樣(yang)本(ben)收(shou)集後(hou)不及時檢(jian)測(ce)，請按(an)壹次用量(liang)分裝(zhuang)，凍(dong)存(cun)於-20℃，避(bi)免反(fan)復凍(dong)融，在室溫下(xia)解凍(dong)並(bing)確保(bao)樣品均(jun)勻(yun)地充(chong)分解(jie)凍(dong)。