梔子探針(zhen)法(fa)PCR鑒定(ding)試劑(ji)盒(he)*

儲存條件(jian)：
14℃或(huo)－20℃樣(yang)品(pin)收(shou)集、處(chu)理(li)及保存方法(fa)
1. 血清(qing)：使(shi)用(yong)不含(han)熱原和(he)內毒素(su)的(de)試(shi)管，操作過(guo)程(cheng)中避(bi)免任何細胞刺激(ji)，收(shou)集血液(ye)後(hou)，3000 轉離心(xin)10 分鐘(zhong)將血清(qing)和(he)紅(hong)細胞迅速(su)小(xiao)心(xin)地(di)分(fen)離(li)。
2. 血漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬酸鹽或(huo)肝素抗凝(ning)。3000 轉離心(xin)30 分鐘(zhong)取上清(qing)。
3. 細胞上清液(ye)：3000 轉離心(xin)10 分鐘(zhong)去(qu)除顆(ke)粒和聚合物。
4. 組織勻(yun)漿：將組織加入適量生理(li)鹽(yan)水(shui)搗(dao)碎。3000 轉離心(xin)10 分鐘(zhong)取上清(qing)。
5. 保存：如果(guo)樣(yang)本收集後(hou)不及時(shi)檢測，請按(an)壹次用(yong)量分裝，凍(dong)存於-20℃，避免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)，在(zai)室溫(wen)下解凍並確(que)保樣(yang)品(pin)均(jun)勻(yun)地充分(fen)解凍(dong)。

特(te)點：
1. 即開(kai)即(ji)用(yong)，用(yong)戶只(zhi)需要(yao)提(ti)供(gong)病(bing)毒樣(yang)品(pin)。
2. 根據(ju)地黃(huang)保守序列設計的(de)專(zhuan)壹性(xing)引物，與相關(guan)病(bing)毒無(wu)交(jiao)叉(cha)反(fan)應(ying)。
3. 靈敏(min)度可以(yi)達到(dao)幾(ji)百拷(kao)貝/反(fan)應(ying)。
4. 壹管(guan)式熒光(guang)定(ding)量 PCR 檢測，避免(mian)後(hou)續(xu)汙(wu)染。
5. 本試劑盒(he)足(zu)夠 50 次 20μL 反(fan)應(ying)體系的(de)熒(ying)光(guang)定(ding)量 PCR。
6. 本產(chan)品只(zhi)適用(yong)於科(ke)研(yan)，不能用(yong)於臨床診斷。

使用(yong)方法(fa)：
壹、樣(yang)品(pin)采集：
1、食品(pin)樣(yang)品(pin)：樣(yang)品(pin)的(de)采集與(yu)預(yu)培(pei)養按(an)照樣(yang)品(pin)的(de)采集與(yu)預(yu)培(pei)養按(an)照《食(shi)品衛生微(wei)生物學檢驗阪崎(qi)腸(chang)桿(gan)菌(jun)檢(jian)驗要(yao)求(qiu)進行。
2、血液(ye)樣(yang)品(pin)：用(yong)無(wu)菌(jun)註(zhu)射(she)器抽取受(shou)檢(jian)者靜脈血2mL，註入(ru)無(wu)菌(jun)EDTA2Na(或(huo)檸(ning)檬酸鈉)抗凝(ning)管(guan)，立(li)即混勻(yun)。
3、糞便(bian)樣(yang)品(pin)：取(qu)糞(fen)便(bian)置(zhi)於滅(mie)菌(jun)的(de)收(shou)集管(guan)中(zhong)送檢(jian)。
4、病(bing)竈(zao)部(bu)位樣(yang)品(pin)：取(qu)發(fa)病(bing)部(bu)位新(xin)鮮(xian)滲出(chu)物、粘(zhan)液(ye)膿(nong)血送(song)檢(jian)。
壹、稀(xi)釋 PCR 陽性(xing)對照(zhao)（以(yi) 10E2-10E7 拷(kao)貝/μL 這(zhe) 6 個 10 倍(bei)稀(xi)釋度為例）
1. 註意(yi)：由(you)於標準品濃(nong)度非常高，因此下(xia)列稀釋操作壹定(ding)要(yao)在(zai)獨(du)立(li)的(de)區(qu)域進行，千萬不能汙(wu)染樣(yang)品(pin)或(huo)本試劑盒(he)的(de)其(qi)他成(cheng)分(fen)）。為(wei)增(zeng)加產(chan)品穩(wen)定(ding)性(xing)和避(bi)免擴散傳(chuan)染性(xing)病(bing)原，本產(chan)品不提供(gong)活(huo)體樣(yang)品(pin)做(zuo)陽性(xing)對照(zhao)，只提供(gong)可以(yi)直(zhi)接使(shi)用(yong)的(de) DNA段(duan)作(zuo)為陽性(xing)對照(zhao)。
2. 標記 6 個離心(xin)管(guan)，分(fen)別為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭(tou)分別加(jia)入(ru) 45 μL 熒光(guang) PCR 模板稀釋液(ye)（用(yong)帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭(tou)，下同(tong)）。
4. 在 7 號(hao)管中(zhong)加入 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性(xing)對照(zhao)，充分震蕩 1 分鐘(zhong)，得(de)1×10E7 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性(xing)對照(zhao)。放冰上待(dai)用(yong)。
5. 換(huan)槍頭(tou)，在 6 號(hao)管中(zhong)加入 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性(xing)對照(zhao)(上步(bu)稀(xi)釋所(suo)得(de))，充分(fen)震(zhen)蕩 1 分鐘(zhong)，得(de) 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性(xing)對照(zhao)。放冰上待(dai)用(yong)。
6. 換(huan)槍頭(tou)，在 5 號(hao)管中(zhong)加入 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性(xing)對照(zhao)到 5 號(hao)管中(zhong)，充分震蕩 1 分鐘(zhong)，得(de) 1×10E5 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性(xing)對照(zhao)。放冰上待(dai)用(yong)。
7. 重復(fu)上(shang)面(mian)的(de)操作直(zhi)到得(de)到 6 個稀釋度的(de)陽性(xing)對照(zhao)。放冰上待(dai)用(yong)。
註：上(shang)述(shu)樣(yang)品(pin)建(jian)議經(jing)過(guo)增(zeng)菌(jun)後(hou)，收集培(pei)養物用(yong)於檢測。 
二、DNA提取(qu)：
可采用(yong)PCR試劑(ji)盒(he)配(pei)備的(de)DNA抽提液(ye)，按(an)以(yi)下說明(ming)進行DNA核酸的(de)粗提。也可采購(gou)上海澤(ze)葉生(sheng)物科(ke)技(ji)有限公(gong)司(si)生(sheng)產(chan)的(de)DNA提取(qu)試(shi)劑盒(he)(過(guo)柱(zhu)法(fa)-熒光(guang)配(pei)套(tao))或(huo)其(qi)他合適的(de)商(shang)業化產(chan)品，並按(an)照相應(ying)試劑(ji)盒(he)說明(ming)進行操作。
1、液(ye)體培(pei)養物：取液(ye)體培(pei)養物100μL加到(dao)1.5mL無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，8000rpm離心(xin)3min，盡(jin)量吸棄上清(qing)，加(jia)入50μL DNA抽提液(ye)充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取上(shang)清(qing)5μL進行PCR反(fan)應(ying)。
2、固體培(pei)養物：挑取單克隆(long)菌(jun)落(luo)與(yu)50μL DNA抽提液(ye)充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取上(shang)清(qing)5μL進行PCR反(fan)應(ying)。
3、糞便(bian)樣(yang)品(pin)：挑(tiao)取(qu)米粒大小(xiao)糞(fen)便於滅(mie)菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，加(jia)入(ru)0.5mL生理(li)鹽(yan)水(shui)，振(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，13000rpm離心(xin)3分鐘(zhong)，棄上清(qing)，沈(chen)澱中加(jia)入(ru)50μL DNA抽提液(ye)充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取上(shang)清(qing)5μL進行PCR反(fan)應(ying)。
4、其他液(ye)體標本：取標本2-3mL，13000rpm離心(xin)3min，棄上清(qing)，沈(chen)澱中加(jia)入(ru)50μL DNA抽提液(ye)充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取上(shang)清(qing)5μL進行PCR反(fan)應(ying)。
註：陽性(xing)對照(zhao)和陰性(xing)對照(zhao)為已經(jing)抽提好的(de)核(he)酸(無(wu)需提(ti)取(qu))，直(zhi)接取(qu)5μL加入(ru)到(dao)反(fan)應(ying)體系中(zhong)即(ji)可。由(you)於陽性(xing)對照(zhao)濃(nong)度較(jiao)高，建(jian)議在(zai)樣(yang)品(pin)制(zhi)備區域加(jia)入(ru)陽性(xing)對照(zhao)。 
JEC, 內膜腺癌細胞系人(ren)參(can)二醇(標準品)Panaxadiol質量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標準品

mRTEC, 小(xiao)鼠(shu)腎小(xiao)管(guan)上皮細胞 小(xiao)鼠(shu)胰腺癌beta細胞，Beta-TC-6細胞 EB (NBL-4)(牛胚氣(qi)管(guan)細胞)人(ren)參(can)三(san)醇(標準品)Panaxatriol質量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標準品

人(ren)紅(hong)系(xi)白(bai)血病(bing)細胞;TF-1人(ren)參(can)皂苷CK(標準品)Compound K質量規(gui)格(ge)：HPLC≥97%，標準品

HAVCR1 Others Canine 狗 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 人(ren)細胞裂解液(ye) (陽性(xing)對照(zhao)) 人(ren)參(can)皂苷F1(標準品)Ginseside F1質量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標準品

小(xiao)鼠(shu)神(shen)經母(mu)細胞瘤(liu)細胞;Neuro-2a [N2a; Neuro-2a]人(ren)參(can)皂苷F2(標準品)Ginseside F2質量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標準品
RA, 大鼠(shu)星形(xing)膠質細胞L-L-Glutamic acid質量規(gui)格(ge)：>99%,BR

3T3/e細胞，小(xiao)鼠(shu)成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞 白介素-2轉染耐VP16絨癌(ai)細胞,JEG-3/VP16-IL-2細胞 人(ren)腎(shen)系(xi)膜細胞RNAHRMC miRNA5 μgL-延胡(hu)索(suo)乙(yi)素L-Tetrahydropalmatine質量規(gui)格(ge)：美(mei)國進口

恒河(he)猴(hou)肺(fei)細胞;RM-L1-d4Nicorandil-d4質量規(gui)格(ge)：美(mei)國進口

EPHB4 Others Human 人(ren) EphB4 / HTK 人(ren)細胞裂解液(ye) (陽性(xing)對照(zhao)) N-氧化(hua)物Nicorandil N-Oxide質量規(gui)格(ge)：美(mei)國進口

人(ren)EB病(bing)毒轉化的(de)B細胞;CGM16-羥(qiang)基(ji)6-Hydroxy Nicorandil質量規(gui)格(ge)：美(mei)國進口
綠色(se)熒光(guang)蛋(dan)白標(biao)記小(xiao)鼠(shu)前胃癌細胞;MFC-GFP釋放(fang)激(ji)素(su)相關(guan)蛋(dan)白（1-13），人(ren)Gn-RH Associated Peptide (GAP) (1-13), human質量規(gui)格(ge)：>95%,BR

HL-7702細胞，人(ren)肝細胞正常 人(ren)幹(gan)細胞因子單克隆(long)抗體細胞株(zhu),AMS2細胞 敘(xu)利(li)亞倉鼠(shu)皮膚(fu)細胞;GH-S1海沙瑞(rui)林Hexarelin質量規(gui)格(ge)：>95%,BR

LM/TK(小(xiao)鼠(shu)胸腺激(ji)酶(mei)缺(que)陷細胞) 5×106cells/瓶×2組胺(an)素(su)5Histatin 5質量規(gui)格(ge)：>95%,BR

Promocell C-20011 Keraticyte GrowthMedium 2, 角(jiao)質細胞生長培(pei)養基(ji)2型(xing)(即用(yong)型(xing)) 500ml高鈣血癥惡(e)性(xing)因子（1-34）酰胺(an)，人(ren)Hypercalcemia Malignancy Factor (1-34), amide, human質量規(gui)格(ge)：>95%,BR

人(ren)角(jiao)膜細胞HK高鈣血癥惡(e)性(xing)因子（1-34）， 人(ren)Hypercalcemia Malignancy Factor (1-34), human質量規(gui)格(ge)：>95%,BR
梔子探針(zhen)法(fa)PCR鑒定(ding)試劑(ji)盒(he)*腦膜細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)AdoMetS-腺甘基(ji)蛋(dan)酸100克BR，80%

CSNK2A1 Others Human 人(ren) CSNK2A1 / CK2A1 桿(gan)狀病(bing)毒-昆(kun)蟲細胞裂解液(ye) (陽性(xing)對照(zhao)) 連(lian)本三(san)加(jia)醋水(shui)合(he)物 1,2,3-Bqnzqnqtriccrboxylic ccid 269-21-7

小(xiao)鼠(shu)單核(he)巨噬(shi)細胞白血病(bing)細胞;RAW 264.7 [RAW264.7;異炳基間(jian)本; 3-異炳基本; 1-異炳基-3-基本; 1-基-3-異炳基本; 間本異炳烷(wan); 間異炳
實驗流程(cheng)：
1. 整個檢測過(guo)程(cheng)應(ying)嚴格按(an)照本說明(ming)書(shu)要(yao)求(qiu)分別在(zai)試(shi)劑準備區、樣(yang)本處(chu)理(li)區(qu)和PCR擴增(zeng)區進行操作，各(ge)區實驗服、儀(yi)器 、耗材(cai)應(ying)獨(du)立(li)使用(yong)，不能混用(yong)；實驗用(yong)吸頭(tou)采用(yong)帶(dai)濾(lv)芯(xin)吸頭(tou)；樣(yang)本處(chu)理(li)區(qu)應(ying)配(pei)有生物安(an)全(quan)櫃，樣(yang)本處(chu)理(li)在(zai)生物安(an)全(quan)櫃中(zhong)進行操作；三(san)個區應(ying)該(gai)配(pei)有紫(zi)外線殺(sha)菌(jun)裝置(zhi)。
2. 為避(bi)免(mian)RNA降解(jie)，樣(yang)本處(chu)理(li)過(guo)程(cheng)應(ying)在0-4℃條件(jian)下操作，且(qie)完(wan)成(cheng)實驗後(hou)立即(ji)上機檢測；樣(yang)本處(chu)理(li)過(guo)程(cheng)中使(shi)用(yong)的(de)器具耗材(cai)應(ying)經過(guo)無(wu)核(he)酶(mei)處(chu)理(li)。

3. 每次實驗應(ying)該(gai)設置陰、陽性(xing)對照(zhao)。
4. 試劑(ji)盒(he)所(suo)有試劑(ji)在使(shi)用(yong)前(qian)應(ying)該(gai)在(zai)常溫(wen)下充分融(rong)化(hua)混勻(yun)，並應(ying)瞬(shun)時(shi)離心(xin)。
5. 試劑(ji)盒(he)內(nei)所配(pei)陰性(xing)和陽性(xing)對照(zhao)在壹次使用(yong)前(qian)應(ying)全(quan)部轉移(yi)至標本準備區，並單(dan)獨(du)存放。
6. 為防(fang)止熒(ying)光(guang)幹擾(rao)，應(ying)避免(mian)裸手(shou)直(zhi)接接(jie)觸(chu)PCR反(fan)應(ying)管，並應(ying)避免(mian)在PCR反(fan)應(ying)管上(shang)進行任何標記。
7. 儀器 擴增(zeng)相關(guan)參(can)數應(ying)按(an)照本說明(ming)書(shu)相關(guan)要(yao)求(qiu)進行設置；不同批(pi)號(hao)試劑(ji)不能混用(yong)。
8. ABI系列熒光(guang)定(ding)量PCR儀參(can)數設置中不選ROX校正，淬(cui)滅(mie)基(ji)因選(xuan)擇(ze)None。
9. 實驗過(guo)程(cheng)中產(chan)品的(de)廢(fei)棄物應(ying)該(gai)進行無(wu)害(hai)化處(chu)理(li)後(hou)方可丟棄。