蒼術探針(zhen)法PCR鑒定(ding)試劑盒(he)說(shuo)明書(shu)

特(te)點(dian)：
1. 即(ji)開(kai)即(ji)用(yong)，用戶(hu)只(zhi)需(xu)要提(ti)供(gong)病(bing)毒(du)樣(yang)品。
2. 根據(ju)地黃保(bao)守序列設計的(de)專壹(yi)性(xing)引物，與相關病(bing)毒(du)無交(jiao)叉(cha)反應(ying)。
3. 靈(ling)敏度可(ke)以達到(dao)幾百拷(kao)貝/反應(ying)。
4. 壹(yi)管(guan)式熒光(guang)定(ding)量 PCR 檢測(ce)，避(bi)免(mian)後(hou)續汙染。
5. 本(ben)試劑盒(he)足(zu)夠(gou) 50 次(ci) 20μL 反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)的(de)熒光(guang)定(ding)量 PCR。
6. 本(ben)產(chan)品只(zhi)適用於(yu)科(ke)研，不能用於臨床(chuang)診斷(duan)。

使(shi)用方(fang)法：
壹(yi)、樣(yang)品采集：
1、食(shi)品(pin)樣(yang)品：樣(yang)品的(de)采集與預培(pei)養(yang)按(an)照樣(yang)品的(de)采集與預培(pei)養(yang)按(an)照《食(shi)品(pin)衛生(sheng)微生(sheng)物學(xue)檢驗(yan)阪(ban)崎(qi)腸桿菌(jun)檢驗(yan)要求進行。
2、血(xue)液樣(yang)品：用無菌(jun)註射(she)器抽取(qu)受檢者靜(jing)脈血(xue)2mL，註入(ru)無菌(jun)EDTA2Na(或檸(ning)檬酸(suan)鈉(na))抗凝(ning)管，立(li)即(ji)混(hun)勻。
3、糞便(bian)樣(yang)品：取(qu)糞便(bian)置(zhi)於(yu)滅(mie)菌(jun)的(de)收集管中(zhong)送檢。
4、病(bing)竈(zao)部位(wei)樣(yang)品：取(qu)發(fa)病(bing)部位(wei)新(xin)鮮(xian)滲出(chu)物、粘(zhan)液膿(nong)血(xue)送檢。
壹(yi)、稀(xi)釋 PCR 陽(yang)性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍(bei)稀(xi)釋度為(wei)例(li)）
1. 註意(yi)：由於(yu)標(biao)準品(pin)濃度非(fei)常(chang)高，因此(ci)下(xia)列稀釋操作壹(yi)定(ding)要在(zai)獨(du)立(li)的(de)區域(yu)進行，千萬不能汙染樣(yang)品或本(ben)試劑盒(he)的(de)其他成(cheng)分(fen)）。為增(zeng)加產品(pin)穩(wen)定(ding)性和(he)避(bi)免(mian)擴(kuo)散傳(chuan)染性(xing)病(bing)原(yuan)，本產(chan)品(pin)不(bu)提供(gong)活(huo)體(ti)樣(yang)品做(zuo)陽(yang)性對照，只(zhi)提(ti)供(gong)可(ke)以直(zhi)接使(shi)用的(de) DNA段作為陽(yang)性對照。
2. 標(biao)記(ji) 6 個(ge)離心管(guan)，分(fen)別(bie)為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶(dai)芯(xin)槍頭分(fen)別(bie)加入(ru) 45 μL 熒光(guang) PCR 模板(ban)稀釋(shi)液(ye)（用帶(dai)芯(xin)槍頭，下(xia)同(tong)）。
4. 在 7 號(hao)管(guan)中加入(ru) 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性對照，充(chong)分(fen)震蕩 1 分(fen)鐘，得(de)1×10E7 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對照。放(fang)冰上(shang)待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中(zhong)加入(ru) 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性對照(上步稀(xi)釋所(suo)得(de))，充(chong)分(fen)震蕩 1 分(fen)鐘，得(de) 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對照。放(fang)冰上(shang)待用。
6. 換槍頭，在 5 號管中(zhong)加入(ru) 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性對照到(dao) 5 號(hao)管中(zhong)，充(chong)分(fen)震蕩 1 分(fen)鐘，得(de) 1×10E5 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對照。放(fang)冰上(shang)待用。
7. 重(zhong)復上面的(de)操作直到(dao)得(de)到(dao) 6 個(ge)稀(xi)釋度的(de)陽(yang)性對照。放(fang)冰上(shang)待用。
註：上(shang)述(shu)樣(yang)品建議(yi)經(jing)過增(zeng)菌(jun)後(hou)，收集培養(yang)物用於(yu)檢測(ce)。 
二、DNA提(ti)取(qu)：
可采用(yong)PCR試劑盒(he)配(pei)備的(de)DNA抽提(ti)液，按以下(xia)說(shuo)明進行DNA核(he)酸的(de)粗(cu)提。也可采購(gou)上海澤(ze)葉生(sheng)物科技(ji)有(you)限公(gong)司(si)生(sheng)產(chan)的(de)DNA提(ti)取(qu)試劑盒(he)(過柱(zhu)法-熒光(guang)配套(tao))或其(qi)他(ta)合(he)適的(de)商業化(hua)產(chan)品(pin)，並(bing)按照(zhao)相應(ying)試劑盒(he)說(shuo)明進行操作。
1、液(ye)體培養(yang)物：取(qu)液體(ti)培養(yang)物100μL加到(dao)1.5mL無菌(jun)離心管(guan)中(zhong)，8000rpm離心3min，盡量吸(xi)棄(qi)上(shang)清(qing)，加入(ru)50μL DNA抽提(ti)液充(chong)分(fen)混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取(qu)上清(qing)5μL進行PCR反應(ying)。
2、固(gu)體(ti)培養(yang)物：挑取(qu)單克(ke)隆(long)菌(jun)落(luo)與50μL DNA抽提(ti)液充(chong)分(fen)混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取(qu)上清(qing)5μL進行PCR反應(ying)。
3、糞便(bian)樣(yang)品：挑取(qu)米(mi)粒(li)大小(xiao)糞便(bian)於(yu)滅菌(jun)離心管(guan)中(zhong)，加入(ru)0.5mL生(sheng)理鹽水，振蕩混(hun)勻，13000rpm離心3分(fen)鐘，棄(qi)上(shang)清(qing)，沈澱(dian)中加入(ru)50μL DNA抽提(ti)液充(chong)分(fen)混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取(qu)上清(qing)5μL進行PCR反應(ying)。
4、其(qi)他液體標(biao)本：取(qu)標(biao)本2-3mL，13000rpm離心3min，棄(qi)上(shang)清(qing)，沈澱(dian)中加入(ru)50μL DNA抽提(ti)液充(chong)分(fen)混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取(qu)上清(qing)5μL進行PCR反應(ying)。
註：陽(yang)性對照和(he)陰性(xing)對照為(wei)已(yi)經(jing)抽提(ti)好的(de)核(he)酸(無需(xu)提取(qu))，直接(jie)取(qu)5μL加入(ru)到(dao)反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)中(zhong)即(ji)可(ke)。由於(yu)陽(yang)性對照濃度較高，建(jian)議(yi)在樣(yang)品制備區域(yu)加入(ru)陽(yang)性對照。 
實驗(yan)流程(cheng)：
1. 整個(ge)檢測(ce)過程(cheng)應(ying)嚴(yan)格(ge)按(an)照本說(shuo)明書(shu)要求分(fen)別(bie)在(zai)試劑準備區、樣(yang)本處理區和(he)PCR擴(kuo)增(zeng)區進行操作，各區實驗(yan)服、儀器 、耗材(cai)應(ying)獨(du)立(li)使(shi)用，不(bu)能混(hun)用(yong)；實驗(yan)用吸(xi)頭采用(yong)帶濾(lv)芯(xin)吸頭；樣(yang)本處理區應(ying)配(pei)有(you)生(sheng)物安(an)全(quan)櫃(gui)，樣(yang)本處理在生(sheng)物安(an)全(quan)櫃(gui)中(zhong)進行操作；三個(ge)區應(ying)該(gai)配(pei)有(you)紫(zi)外(wai)線(xian)殺(sha)菌(jun)裝(zhuang)置(zhi)。
2. 為(wei)避(bi)免(mian)RNA降(jiang)解(jie)，樣(yang)本處理過程(cheng)應(ying)在(zai)0-4℃條(tiao)件(jian)下(xia)操作，且完成(cheng)實驗(yan)後(hou)立(li)即(ji)上(shang)機檢測(ce)；樣(yang)本處理過程(cheng)中(zhong)使(shi)用的(de)器具耗材(cai)應(ying)經(jing)過無核(he)酶(mei)處理。
3. 每(mei)次實驗(yan)應(ying)該(gai)設(she)置(zhi)陰、陽(yang)性對照。
4. 試劑盒(he)所(suo)有(you)試劑在使(shi)用前應(ying)該(gai)在(zai)常(chang)溫下(xia)充(chong)分(fen)融(rong)化(hua)混(hun)勻，並(bing)應(ying)瞬時離心。
5. 試劑盒(he)內(nei)所(suo)配(pei)陰性(xing)和(he)陽(yang)性對照在(zai)壹(yi)次(ci)使(shi)用前應(ying)全(quan)部轉移至(zhi)標(biao)本準(zhun)備區，並(bing)單獨(du)存放(fang)。
6. 為防(fang)止熒光(guang)幹擾，應(ying)避(bi)免(mian)裸(luo)手(shou)直接(jie)接(jie)觸(chu)PCR反(fan)應(ying)管(guan)，並(bing)應(ying)避(bi)免(mian)在PCR反(fan)應(ying)管(guan)上(shang)進行任(ren)何(he)標(biao)記(ji)。
7. 儀器 擴(kuo)增(zeng)相關參數應(ying)按(an)照(zhao)本(ben)說(shuo)明書(shu)相關要求進行設置(zhi)；不(bu)同(tong)批(pi)號試劑不能混(hun)用(yong)。
8. ABI系(xi)列熒光(guang)定(ding)量PCR儀參數設置(zhi)中(zhong)不(bu)選(xuan)ROX校正，淬(cui)滅(mie)基(ji)因選(xuan)擇None。
9. 實驗(yan)過程(cheng)中(zhong)產品(pin)的(de)廢棄(qi)物應(ying)該(gai)進行無害(hai)化(hua)處理後(hou)方可(ke)丟(diu)棄(qi)。
儲(chu)存(cun)條(tiao)件(jian)：
14℃或－20℃樣(yang)品收集、處理及(ji)保(bao)存方法
1. 血(xue)清(qing)：使(shi)用不(bu)含熱(re)原(yuan)和(he)內(nei)毒(du)素(su)的(de)試管(guan)，操作過程(cheng)中(zhong)避(bi)免(mian)任(ren)何(he)細胞刺激，收集血(xue)液後(hou)，3000 轉(zhuan)離心10 分(fen)鐘將血(xue)清(qing)和(he)紅細胞迅(xun)速小心地(di)分(fen)離。
2. 血(xue)漿：EDTA、檸(ning)檬酸(suan)鹽(yan)或肝(gan)素(su)抗凝(ning)。3000 轉離心30 分(fen)鐘取(qu)上清(qing)。
3. 細胞上(shang)清(qing)液：3000 轉離心10 分(fen)鐘去(qu)除顆粒(li)和(he)聚(ju)合(he)物。
4. 組(zu)織勻漿(jiang)：將組織加入(ru)適量生(sheng)理鹽水搗(dao)碎(sui)。3000 轉(zhuan)離心10 分(fen)鐘取(qu)上清(qing)。
5. 保存：如果樣(yang)本收集後(hou)不及(ji)時(shi)檢測(ce)，請(qing)按(an)壹(yi)次(ci)用量分(fen)裝，凍存(cun)於(yu)-20℃，避(bi)免(mian)反復凍融(rong)，在(zai)室溫下(xia)解(jie)凍並(bing)確(que)保樣(yang)品均勻地(di)充(chong)分(fen)解(jie)凍。
CD274 Others Human 人(ren) B7-H1 / CD274 / PD-L1 人(ren)細胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照) （標(biao)準品(pin)）Flavoxate 質(zhi)量規格：含量測(ce)定(ding)

原(yuan)代成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞特(te)制基(ji)礎(chu)無血(xue)清(qing)培養(yang)基(ji)Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：500/100ml3-甲基(ji)黃酮-8-羧(suo)酸（標(biao)準品(pin)）3-Methylflavone-8-carboxylic acid質(zhi)量規格：供(gong)檢查用(yong)

PKM Others Mouse 小鼠(shu) PKM2 / OIP3 桿狀病(bing)毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照) 鹽酸番茄(qie)堿（標(biao)準品(pin)）Tomatidine 質(zhi)量規格：HPLC≥98%,標(biao)準品(pin)

EB病(bing)毒(du)轉(zhuan)化的(de)人(ren)B細胞;KMY0902鹽酸頭孢(bao)唑蘭Cefozopran 質(zhi)量規格：>97%,BR

家(jia)貓(mao)皮膚細胞;FCA-S1 胚(pei)肺(fei)成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞，HFL-I細胞 IEC-6細胞，大(da)鼠(shu)小腸隱窩(wo)上皮細胞阿(e)嗪米(mi)特（標(biao)準品(pin)）Azintamide質(zhi)量規格：含量測(ce)定(ding)
SW620(人(ren)結(jie)腸癌(ai)細胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 甲(jia)型流感(gan) H7N9 (A/Shanghai/4664T/2013) 血(xue)凝(ning)素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病(bing)毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照) 鹽酸甲(jia)氧那(na)明(ming)Methoxyphenamine HCl質(zhi)量規格：>98.5%,CP

人(ren)肺(fei)泡(pao)上皮細胞HPAEpiC安(an)息香甲基(>98.0%(GC))Benzoin Methyl Ether質(zhi)量規格：>98.0%(GC)

HA Others H1N1 甲型流感(gan) H1N1 (A/Texas/05/2009) HA 人(ren)細胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照) 安(an)息香異丁(ding)基(>95.0%(GC))Benzoin Isobutyl Ether質(zhi)量規格：>95.0%(GC)

KM9304 EBV-轉化(hua)人(ren)細胞(彜(yi)族(zu))2,2-二乙(yi)氧(yang)基(ji)苯乙(yi)酮(>95.0%(GC))2,2-Diethoxyacetophenone質(zhi)量規格：>95.0%(GC)

CM-H099人(ren)上皮細胞*培(pei)養(yang)基(ji)100mL2,2-二(er)甲(jia)氧基-2-乙酮(>98.0%(GC))2,2-Dimethoxy-2-phenylacetophenone質(zhi)量規格：>98.0%(GC)
人(ren)食(shi)道上(shang)皮細胞RNAHEEpiC miRNA5 μg質(zhi)量規格：>950μg/mg,BRCefditoren pivoxil

兔間變表皮鱗癌(ai)瘤株;VX2 前列腺癌(ai)細胞，22RV1細胞 MDCK superdome細胞，狗(gou)腎(shen)細胞隆(long)突型(標(biao)準品(pin))質(zhi)量規格：效(xiao)價測(ce)定(ding)Cefditoren pivoxil

人(ren)永生(sheng)化(hua)細胞;CNLMG-B5537LC質(zhi)量規格：>99%,USPPyrazinamide

HA Others H3N2 甲型流感(gan) H3N2 (A/Aichi/2/1968) 血(xue)凝(ning)素HA1 (Hemagglutinin) 人(ren)細胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照) 阿魏(wei)酸,柏(bai)酸,反(fan)式(shi)阿魏(wei)酸質(zhi)量規格：>99%,合(he)成(cheng)Ferulic acid

CL-0428RM1(大(da)鼠肌(ji)肉成(cheng)纖(xian)維(wei)樣(yang)細胞)5×106cells/瓶(ping)×2阿(e)魏(wei)酸(標(biao)準品(pin))質(zhi)量規格：HPLC≥98%，標(biao)準品(pin)Ferulic acid
蒼術探針(zhen)法PCR鑒定(ding)試劑盒(he)說(shuo)明書(shu)Neuro-2a細胞，小(xiao)鼠(shu)腦神經(jing)瘤細胞 MDA-MB-231(癌(ai)細胞) 人(ren)腦瘤細胞;SF7674-叔丁(ding)基杯[5]芳烴(ting)(>98.0%(HPLC))質(zhi)量規格：>98.0%(HPLC)4-tert-Butylcalix[5]arene

IL8 Protein Human 重(zhong)組(zu)人(ren) IL-8 / CXCL8 蛋白(bai) (aa 6-77, Fc 標(biao)簽)杯[8]芳烴(ting)(>90.0%(HPLC))質(zhi)量規格：>90.0%(HPLC)Calix[8]arene

SP2/0(小鼠(shu)骨髓瘤細胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 小(xiao)鼠(shu) AX