土(tu)貝母(mu)PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑盒(he)說(shuo)明書(shu)

儲(chu)存(cun)條件：
14℃或－20℃樣(yang)品(pin)收(shou)集、處(chu)理(li)及(ji)保存(cun)方法(fa)
1. 血(xue)清(qing)：使(shi)用不含(han)熱(re)原(yuan)和內(nei)毒(du)素(su)的試(shi)管，操(cao)作過(guo)程(cheng)中避免(mian)任何細(xi)胞(bao)刺(ci)激(ji)，收集血液後，3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分鐘將血清(qing)和(he)紅細(xi)胞(bao)迅速(su)小(xiao)心(xin)地(di)分離。
2. 血(xue)漿：EDTA、檸(ning)檬酸鹽或肝素(su)抗凝。3000 轉(zhuan)離心(xin)30 分鐘取上清(qing)。
3. 細(xi)胞(bao)上清(qing)液：3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分鐘去(qu)除顆(ke)粒和(he)聚(ju)合物。
4. 組(zu)織(zhi)勻漿：將(jiang)組(zu)織(zhi)加入適量(liang)生理(li)鹽水搗碎。3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分鐘取上清(qing)。
5. 保存(cun)：如(ru)果(guo)樣(yang)本(ben)收集後不及(ji)時檢(jian)測(ce)，請按壹(yi)次用量(liang)分裝(zhuang)，凍(dong)存(cun)於-20℃，避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融，在室溫下解凍(dong)並(bing)確(que)保樣(yang)品均勻(yun)地(di)充分解凍。

特點：
1. 即(ji)開(kai)即(ji)用，用戶(hu)只需要(yao)提(ti)供病毒(du)樣品(pin)。
2. 根據(ju)地黃保守序(xu)列(lie)設計的專(zhuan)壹(yi)性引物(wu)，與(yu)相(xiang)關病毒(du)無交叉反(fan)應。
3. 靈敏(min)度可(ke)以達到幾百(bai)拷(kao)貝/反(fan)應。
4. 壹(yi)管式熒(ying)光定(ding)量 PCR 檢(jian)測(ce)，避(bi)免後續(xu)汙染(ran)。
5. 本(ben)試(shi)劑盒(he)足夠(gou) 50 次(ci) 20μL 反(fan)應體(ti)系(xi)的熒(ying)光定(ding)量 PCR。
6. 本(ben)產品(pin)只適用於(yu)科研，不能(neng)用於(yu)臨(lin)床診(zhen)斷。

使(shi)用方(fang)法(fa)：
壹(yi)、樣品(pin)采集：
1、食(shi)品(pin)樣(yang)品(pin)：樣品的采(cai)集與預(yu)培(pei)養按照樣品的采(cai)集與預(yu)培(pei)養按照《食(shi)品(pin)衛(wei)生微(wei)生物(wu)學檢(jian)驗阪崎腸桿菌(jun)檢(jian)驗要(yao)求(qiu)進行。
2、血(xue)液樣品(pin)：用無(wu)菌(jun)註射器(qi)抽取(qu)受(shou)檢(jian)者(zhe)靜脈(mai)血(xue)2mL，註入無菌(jun)EDTA2Na(或檸(ning)檬酸鈉(na))抗凝管，立(li)即(ji)混勻(yun)。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品：取糞便(bian)置於(yu)滅菌(jun)的收(shou)集管中送檢(jian)。
4、病(bing)竈部位(wei)樣品(pin)：取(qu)發(fa)病部位新(xin)鮮(xian)滲出物、粘(zhan)液膿血送檢(jian)。
壹(yi)、稀釋(shi) PCR 陽(yang)性對(dui)照（以 10E2-10E7 拷(kao)貝/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍(bei)稀釋(shi)度為例(li)）
1. 註意(yi)：由(you)於標準品(pin)濃度非常(chang)高(gao)，因(yin)此下列稀釋(shi)操作壹(yi)定要(yao)在(zai)獨立(li)的區(qu)域進行，千(qian)萬(wan)不能(neng)汙染(ran)樣(yang)品或本(ben)試(shi)劑盒(he)的其(qi)他(ta)成(cheng)分）。為增加產(chan)品(pin)穩定(ding)性和避免擴(kuo)散傳染(ran)性(xing)病原(yuan)，本(ben)產品(pin)不提(ti)供活(huo)體(ti)樣品做陽(yang)性對(dui)照，只提供可(ke)以直(zhi)接使用的 DNA段(duan)作為陽(yang)性對(dui)照。
2. 標記 6 個(ge)離(li)心(xin)管(guan)，分別為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶(dai)芯(xin)槍頭分別加入 45 μL 熒(ying)光 PCR 模板稀釋(shi)液（用帶(dai)芯(xin)槍頭，下同）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管中加入 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照，充分震蕩(dang) 1 分鐘，得1×10E7 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照。放冰(bing)上待(dai)用。
5. 換(huan)槍頭，在 6 號(hao)管中加入 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照(上步(bu)稀釋(shi)所(suo)得)，充(chong)分震蕩(dang) 1 分鐘，得 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照。放冰(bing)上待(dai)用。
6. 換(huan)槍頭，在 5 號(hao)管中加入 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照到 5 號(hao)管中，充分震蕩(dang) 1 分鐘，得 1×10E5 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照。放冰(bing)上待(dai)用。
7. 重(zhong)復(fu)上面(mian)的操(cao)作直到得到 6 個(ge)稀釋(shi)度的陽(yang)性對(dui)照。放冰(bing)上待(dai)用。
註：上述樣(yang)品(pin)建議經過(guo)增菌(jun)後，收(shou)集培(pei)養物用於(yu)檢(jian)測(ce)。 
二(er)、DNA提(ti)取(qu)：
可(ke)采(cai)用PCR試(shi)劑盒(he)配(pei)備的DNA抽提(ti)液，按以下說(shuo)明進(jin)行DNA核(he)酸的粗(cu)提。也可(ke)采(cai)購(gou)上海(hai)澤(ze)葉(ye)生物(wu)科技有(you)限公(gong)司(si)生產(chan)的DNA提(ti)取(qu)試(shi)劑盒(he)(過(guo)柱(zhu)法-熒(ying)光配(pei)套(tao))或其(qi)他(ta)合適的商(shang)業化產品(pin)，並(bing)按(an)照相(xiang)應試(shi)劑盒(he)說(shuo)明進(jin)行操(cao)作。
1、液體培(pei)養物：取(qu)液體培(pei)養物100μL加到1.5mL無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中，8000rpm離(li)心(xin)3min，盡(jin)量(liang)吸(xi)棄(qi)上清(qing)，加入50μL DNA抽提(ti)液充分混勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
2、固(gu)體(ti)培(pei)養物：挑(tiao)取(qu)單(dan)克隆菌(jun)落與(yu)50μL DNA抽提(ti)液充分混勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品：挑取米(mi)粒大(da)小(xiao)糞便(bian)於滅菌(jun)離心(xin)管(guan)中，加入0.5mL生理(li)鹽水，振蕩(dang)混(hun)勻，13000rpm離(li)心(xin)3分鐘，棄(qi)上清(qing)，沈澱(dian)中加入50μL DNA抽提(ti)液充分混勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
4、其(qi)他(ta)液體標本(ben)：取標本(ben)2-3mL，13000rpm離(li)心(xin)3min，棄(qi)上清(qing)，沈澱(dian)中加入50μL DNA抽提(ti)液充分混勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
註：陽(yang)性對(dui)照和陰性對(dui)照為已(yi)經抽提(ti)好(hao)的核(he)酸(無(wu)需(xu)提(ti)取)，直(zhi)接取5μL加入到反(fan)應體(ti)系(xi)中即可(ke)。由(you)於(yu)陽(yang)性對(dui)照濃度較高(gao)，建議在樣品(pin)制(zhi)備區(qu)域加入陽(yang)性對(dui)照。 
CD59 Others Human 人(ren) CD59 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解液 (陽(yang)性對(dui)照) Flunarizine 質(zhi)量規(gui)格(ge)：>99%,BR

MouseS 小(xiao)鼠皮(pi)膚(fu)成纖(xian)維(wei)樣(yang)細(xi)胞（標準品(pin)）Fexofenadine 質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC>98%,標準品(pin)

獼(mi)猴肺細胞;MML2Fexofenadine 質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%,BR

WM451, 人(ren)色素(su)瘤細胞（標準品(pin)）Nizatidine質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC法(fa)含(han)量(liang)測(ce)定(ding)

人(ren)慢(man)性(xing)髓系白(bai)血病(bing)細(xi)胞(bao);K562 大(da)鼠肺大靜脈(mai)平(ping)滑(hua)肌細(xi)胞*培(pei)養基 100mL醋(cu)谷胺(an)/乙(yi)酰(xian)谷酰(xian)胺(an)（標準品(pin)）Aceglutamide質(zhi)量規(gui)格(ge)：含量(liang)測(ce)定(ding)
CD38 Others Rat 大(da)鼠 SCARB3 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解液 (陽(yang)性對(dui)照) 紮(zha)魯(lu)司(si)特zafirlukast質(zhi)量規(gui)格(ge)：>99%,BR

狗骨(gu)髓間質(zhi)幹細(xi)胞(bao) The dog bone marrow mesenchymal stem cells阿(e)紮(zha)那(na)韋(wei)硫酸鹽Atazanavir sulfate質(zhi)量規(gui)格(ge)：>99%,BR

U87MG細(xi)胞(bao)，人(ren)惡性膠質(zhi)母(mu)細(xi)胞(bao)瘤細胞(bao) 雜色曲黴(mei) 人(ren)氣(qi)管(guan)上皮(pi)細(xi)胞RNAHTEpiC miRNA5 μg阿(e)紮(zha)那(na)韋(wei)硫酸鹽(標準品(pin))Atazanavir sulfate質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC>98%,標準品(pin)

SF17(人(ren)腦瘤細胞) 5×106cells/瓶×2-Imipenem and Cilastatin 質(zhi)量規(gui)格(ge)：含量(liang)：Imipenem≥400μg/mg，Cilastatin(C16H26N2O5S) ≥400μg/mg,USP36

HCCC-9810(人(ren)肝內(nei)膽(dan)管(guan)癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0393NCI-H209(人(ren)小(xiao)細(xi)胞肺癌細胞)5×106cells/瓶×2 非(fei)洲(zhou)綠(lv)猴腎(shen)細(xi)胞(bao);VERO長(chang)春西(xi)丁(ding),Vinpocetine質(zhi)量規(gui)格(ge)：>99%,BP,BR
人(ren)腎(shen)癌Wilms細(xi)胞(bao);G4012-萘(nai)氧(yang)乙(yi)酸(標準品(pin))質(zhi)量規(gui)格(ge)：分析(xi)標準品(pin)2-Naphthoxyacetic acid

IL12A Others Human 人(ren) IL12A / NKSF1 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解液 (陽(yang)性對(dui)照) 滅菌(jun)丹(dan)標準溶(rong)液(100μg/ml,u=2%)質(zhi)量規(gui)格(ge)：100μg/ml,u=2%N-(Trichloromethylthio)phthalimide solution

CM-H021人(ren)前列腺(xian)平滑(hua)肌細(xi)胞*培(pei)養基100mL（標準品(pin)）質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC>98%,標準品(pin)Budesonide

FAM171B Others Human 人(ren) FAM171B / KIAA1946 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解液 (陽(yang)性對(dui)照) 亞鈣質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%，水(shui)合物,BRCalcium Folinate

主(zhu)動脈(mai)平滑(hua)肌細(xi)胞Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105方(fang)(1ml)亞鈣（標準品(pin)）質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%,含(han)量(liang)測(ce)定(ding)Calcium Folinate
土(tu)貝母(mu)PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑盒(he)說(shuo)明書(shu)BACE1 Others Human 人(ren) BACE1 / ASP2 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解液 (陽(yang)性對(dui)照) 咪(mi)唑(zuo)立(li)賓鹽酸鹽質(zhi)量規(gui)格(ge)：美國進(jin)口(kou)Mizoribine Hydrobromide

人(ren)微(wei)血(xue)管內(nei)皮(pi)細(xi)胞-HDMEC-a-d6質(zhi)量規(gui)格(ge)：美國進(jin)口(kou)Nifedipine-d6

PDK1 Others Human 人(ren) PDK-1 桿狀(zhuang)病(bing)毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細(xi)胞(bao)裂解液 (陽(yang)性對(dui)照) 脫氫(qing)質(zhi)量規(gui)格(ge)：美國進(jin)口(kou)Dehydro Nifedipine

狗腎(shen)細(xi)胞;Super Tube脫氫(qing)-d6質(zhi)量規(gui)格(ge)：美國進(jin)口(kou)Dehydr
實(shi)驗流程(cheng)：
1. 整(zheng)個(ge)檢(jian)測(ce)過(guo)程(cheng)應嚴(yan)格(ge)按照本(ben)說(shuo)明書(shu)要(yao)求(qiu)分別在(zai)試(shi)劑準備區(qu)、樣本(ben)處(chu)理(li)區(qu)和PCR擴(kuo)增區(qu)進行操(cao)作，各(ge)區(qu)實驗服、儀器(qi) 、耗(hao)材(cai)應獨立(li)使(shi)用，不能(neng)混(hun)用；實(shi)驗用吸(xi)頭(tou)采用帶(dai)濾芯(xin)吸(xi)頭(tou)；樣本(ben)處(chu)理(li)區(qu)應配(pei)有(you)生物(wu)安全(quan)櫃，樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)在生物(wu)安全(quan)櫃中進行操(cao)作；三(san)個(ge)區(qu)應該配(pei)有(you)紫(zi)外(wai)線殺菌(jun)裝(zhuang)置。
2. 為(wei)避(bi)免(mian)RNA降解(jie)，樣本(ben)處(chu)理(li)過(guo)程(cheng)應在(zai)0-4℃條(tiao)件下操作，且(qie)完成實驗後立(li)即(ji)上機檢(jian)測(ce)；樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)過(guo)程(cheng)中使用的器(qi)具耗材應經過(guo)無核(he)酶處(chu)理(li)。

3. 每(mei)次實(shi)驗應該設置陰(yin)、陽(yang)性對(dui)照。
4. 試(shi)劑盒(he)所(suo)有(you)試(shi)劑在(zai)使用前應該在常(chang)溫下充分融化混勻(yun)，並(bing)應瞬時離心(xin)。
5. 試(shi)劑盒(he)內所(suo)配(pei)陰(yin)性和陽(yang)性對(dui)照在壹(yi)次使(shi)用前應全(quan)部(bu)轉(zhuan)移至(zhi)標本(ben)準備區(qu)，並(bing)單(dan)獨存放。
6. 為(wei)防(fang)止(zhi)熒(ying)光幹(gan)擾，應避(bi)免(mian)裸(luo)手直(zhi)接接觸PCR反(fan)應管(guan)，並(bing)應避(bi)免(mian)在PCR反(fan)應管(guan)上進(jin)行任(ren)何標記。
7. 儀器(qi) 擴(kuo)增相(xiang)關參數(shu)應按(an)照本(ben)說(shuo)明書(shu)相(xiang)關要(yao)求(qiu)進行設置；不同(tong)批(pi)號(hao)試(shi)劑不能(neng)混(hun)用。
8. ABI系(xi)列(lie)熒(ying)光定(ding)量PCR儀參數(shu)設置中不選ROX校(xiao)正(zheng)，淬(cui)滅基(ji)因(yin)選擇(ze)None。
9. 實(shi)驗過(guo)程(cheng)中產品(pin)的廢(fei)棄(qi)物(wu)應該進行無(wu)害(hai)化處(chu)理(li)後方(fang)可(ke)丟(diu)棄(qi)。