土(tu)貝母(mu)染(ran)料(liao)法PCR鑒(jian)定試劑盒(he)*

特(te)點：
1. 即(ji)開(kai)即用(yong)，用戶(hu)只(zhi)需要(yao)提供(gong)病毒(du)樣(yang)品(pin)。
2. 根(gen)據(ju)地黃(huang)保(bao)守(shou)序列(lie)設(she)計的專(zhuan)壹(yi)性引(yin)物，與相關(guan)病毒(du)無(wu)交叉反應。
3. 靈(ling)敏(min)度可以(yi)達(da)到幾(ji)百拷(kao)貝/反應。
4. 壹(yi)管式熒光定量 PCR 檢(jian)測(ce)，避免(mian)後續(xu)汙染。
5. 本試劑盒(he)足夠(gou) 50 次(ci) 20μL 反應體系(xi)的熒光定量 PCR。
6. 本產(chan)品(pin)只(zhi)適用(yong)於科(ke)研(yan)，不(bu)能用於臨(lin)床(chuang)診斷(duan)。

使用(yong)方法(fa)：
壹(yi)、樣品(pin)采集：
1、食(shi)品(pin)樣品(pin)：樣品(pin)的采集與(yu)預(yu)培養按照樣品(pin)的采集與(yu)預(yu)培養按照《食品(pin)衛生微生物學檢(jian)驗(yan)阪崎腸(chang)桿菌檢(jian)驗(yan)要(yao)求進行(xing)。
2、血液樣品(pin)：用無(wu)菌註射(she)器(qi)抽取(qu)受(shou)檢(jian)者(zhe)靜(jing)脈血2mL，註入無(wu)菌EDTA2Na(或檸檬(meng)酸鈉(na))抗(kang)凝管，立即混(hun)勻。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品(pin)：取(qu)糞(fen)便(bian)置(zhi)於滅(mie)菌的收(shou)集管中送(song)檢(jian)。
4、病竈部(bu)位樣品(pin)：取(qu)發病部(bu)位新鮮(xian)滲出物(wu)、粘(zhan)液膿血送檢(jian)。
壹(yi)、稀(xi)釋(shi) PCR 陽性對(dui)照（以(yi) 10E2-10E7 拷(kao)貝/μL 這 6 個(ge) 10 倍稀(xi)釋(shi)度為例）
1. 註意(yi)：由於標(biao)準(zhun)品(pin)濃(nong)度非(fei)常高(gao)，因此下列(lie)稀(xi)釋(shi)操(cao)作壹(yi)定要(yao)在獨(du)立的區(qu)域(yu)進行(xing)，千(qian)萬不(bu)能汙染樣(yang)品(pin)或本試劑盒(he)的其他(ta)成(cheng)分）。為(wei)增(zeng)加產(chan)品(pin)穩定性和(he)避免(mian)擴(kuo)散(san)傳(chuan)染(ran)性(xing)病原(yuan)，本產(chan)品(pin)不(bu)提供(gong)活體樣(yang)品(pin)做陽性對(dui)照，只(zhi)提供(gong)可以(yi)直(zhi)接(jie)使用(yong)的 DNA段作為(wei)陽性對(dui)照。
2. 標(biao)記 6 個(ge)離(li)心(xin)管，分(fen)別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶芯槍頭(tou)分(fen)別加(jia)入 45 μL 熒光 PCR 模板(ban)稀(xi)釋(shi)液(ye)（用帶芯槍頭(tou)，下(xia)同）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管中加(jia)入 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝/μL 的陽性對(dui)照，充分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得1×10E7 拷(kao)貝/μL 的陽性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上(shang)待用(yong)。
5. 換(huan)槍頭(tou)，在 6 號(hao)管中加(jia)入 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝/μL 的陽性對(dui)照(上(shang)步(bu)稀(xi)釋(shi)所(suo)得)，充分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的陽性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上(shang)待用(yong)。
6. 換(huan)槍頭(tou)，在 5 號(hao)管中加(jia)入 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的陽性對(dui)照到 5 號(hao)管中，充分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得 1×10E5 拷(kao)貝/μL 的陽性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上(shang)待用(yong)。
7. 重(zhong)復(fu)上面(mian)的操(cao)作(zuo)直到得到 6 個(ge)稀(xi)釋(shi)度的陽性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上(shang)待用(yong)。
註：上(shang)述樣品(pin)建議(yi)經(jing)過(guo)增(zeng)菌後，收(shou)集培養物用(yong)於檢(jian)測(ce)。 
二(er)、DNA提(ti)取(qu)：
可(ke)采用PCR試劑盒(he)配備(bei)的DNA抽提液(ye)，按以下說(shuo)明進行(xing)DNA核(he)酸的粗(cu)提(ti)。也可(ke)采購(gou)上海(hai)澤(ze)葉生物科技(ji)有(you)限(xian)公司生產(chan)的DNA提(ti)取(qu)試劑盒(he)(過(guo)柱(zhu)法-熒光配套(tao))或其他(ta)合(he)適的商(shang)業(ye)化(hua)產(chan)品(pin)，並(bing)按照相應試劑盒(he)說(shuo)明進行(xing)操(cao)作。
1、液(ye)體培養物：取(qu)液(ye)體培養物100μL加(jia)到1.5mL無(wu)菌離心(xin)管中，8000rpm離(li)心(xin)3min，盡量吸棄(qi)上(shang)清，加入50μL DNA抽提液(ye)充分(fen)混(hun)勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上(shang)清5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
2、固(gu)體培養物：挑(tiao)取(qu)單(dan)克(ke)隆菌落與(yu)50μL DNA抽提液(ye)充分(fen)混(hun)勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上(shang)清5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品(pin)：挑(tiao)取(qu)米粒大(da)小糞(fen)便(bian)於滅(mie)菌離心(xin)管中，加(jia)入0.5mL生理鹽水，振蕩(dang)混(hun)勻，13000rpm離(li)心(xin)3分(fen)鐘，棄(qi)上(shang)清，沈澱中加(jia)入50μL DNA抽提液(ye)充分(fen)混(hun)勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上(shang)清5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
4、其他(ta)液(ye)體標(biao)本：取(qu)標(biao)本2-3mL，13000rpm離(li)心(xin)3min，棄(qi)上(shang)清，沈澱中加(jia)入50μL DNA抽提液(ye)充分(fen)混(hun)勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上(shang)清5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
註：陽性對(dui)照和(he)陰(yin)性(xing)對(dui)照(zhao)為(wei)已(yi)經(jing)抽提好(hao)的核(he)酸(無(wu)需提取(qu))，直(zhi)接(jie)取(qu)5μL加(jia)入到反應體系(xi)中即(ji)可(ke)。由於陽性對(dui)照濃(nong)度較高(gao)，建議(yi)在(zai)樣品(pin)制備區(qu)域(yu)加(jia)入陽性對(dui)照。 
實(shi)驗(yan)流程：
1. 整(zheng)個檢(jian)測(ce)過程應嚴格(ge)按照本說(shuo)明書要(yao)求分別在(zai)試劑準備(bei)區(qu)、樣本處理區和(he)PCR擴(kuo)增(zeng)區進行(xing)操(cao)作，各(ge)區(qu)實(shi)驗(yan)服、儀(yi)器 、耗(hao)材(cai)應獨(du)立使用(yong)，不(bu)能混(hun)用(yong)；實(shi)驗(yan)用吸頭(tou)采用帶濾(lv)芯吸頭(tou)；樣(yang)本處理區應配有(you)生物安(an)全櫃，樣(yang)本處理在生物安(an)全櫃中進(jin)行(xing)操(cao)作；三個(ge)區應該(gai)配有(you)紫外線(xian)殺(sha)菌裝置(zhi)。
2. 為(wei)避免(mian)RNA降(jiang)解(jie)，樣(yang)本處理過程應在0-4℃條(tiao)件下(xia)操(cao)作(zuo)，且(qie)完成(cheng)實(shi)驗(yan)後立即上(shang)機(ji)檢(jian)測(ce)；樣本處理過程中使用(yong)的器(qi)具(ju)耗材(cai)應經(jing)過(guo)無(wu)核酶(mei)處理。
3. 每(mei)次(ci)實驗(yan)應該(gai)設(she)置陰(yin)、陽性對(dui)照。
4. 試劑盒(he)所(suo)有(you)試劑在使用(yong)前應該(gai)在(zai)常溫下(xia)充分(fen)融(rong)化(hua)混(hun)勻，並(bing)應瞬時離心(xin)。
5. 試劑盒(he)內(nei)所(suo)配陰(yin)性(xing)和(he)陽性對(dui)照在(zai)壹(yi)次使用(yong)前應全部(bu)轉(zhuan)移(yi)至標(biao)本準備(bei)區(qu)，並(bing)單獨(du)存(cun)放(fang)。
6. 為(wei)防(fang)止熒光幹(gan)擾，應避免(mian)裸手直接(jie)接(jie)觸(chu)PCR反應管，並(bing)應避免(mian)在PCR反應管上(shang)進(jin)行(xing)任(ren)何標(biao)記。
7. 儀(yi)器 擴(kuo)增(zeng)相關(guan)參數(shu)應按照本說(shuo)明書相關(guan)要(yao)求進行(xing)設(she)置；不(bu)同批號試劑不(bu)能混(hun)用(yong)。
8. ABI系(xi)列(lie)熒光定量PCR儀(yi)參數(shu)設置(zhi)中不(bu)選ROX校正，淬(cui)滅(mie)基因選擇None。
9. 實(shi)驗(yan)過程中產(chan)品(pin)的廢(fei)棄(qi)物應該(gai)進(jin)行(xing)無(wu)害化(hua)處理後方可丟(diu)棄。
儲(chu)存(cun)條(tiao)件：
14℃或－20℃樣(yang)品(pin)收集、處(chu)理及(ji)保(bao)存(cun)方(fang)法(fa)
1. 血清：使用(yong)不(bu)含熱原(yuan)和(he)內(nei)毒(du)素(su)的試管，操(cao)作(zuo)過程中避免(mian)任(ren)何細胞刺激，收(shou)集血液後，3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分(fen)鐘將(jiang)血清和(he)紅(hong)細胞迅(xun)速小心(xin)地分(fen)離。
2. 血漿：EDTA、檸(ning)檬(meng)酸鹽(yan)或肝素(su)抗(kang)凝。3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)30 分(fen)鐘取(qu)上(shang)清。
3. 細胞上(shang)清液：3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分(fen)鐘去(qu)除顆(ke)粒和(he)聚合物(wu)。
4. 組織(zhi)勻漿：將(jiang)組織(zhi)加(jia)入適(shi)量(liang)生理鹽水搗(dao)碎(sui)。3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分(fen)鐘取(qu)上(shang)清。
5. 保(bao)存(cun)：如(ru)果(guo)樣本收集後(hou)不(bu)及(ji)時檢(jian)測(ce)，請按壹(yi)次用(yong)量分裝，凍存(cun)於-20℃，避免(mian)反復(fu)凍融(rong)，在室(shi)溫下(xia)解(jie)凍(dong)並(bing)確保(bao)樣(yang)品(pin)均勻地充分(fen)解(jie)凍(dong)。
CD63 Others Cynomolgus 食(shi)蟹(xie)猴 CD63 / Tspan-30 / Teaspanin-30 人(ren)細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照) 異(yi)甘草(cao)素(su)（標(biao)準(zhun)品(pin)）Isoliquiritigenin質量規格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

結(jie)腸(chang)粘(zhan)膜(mo)上皮細胞Many types of cells包(bao)裝：5 × 105方(fang)(1ml)人(ren)參皂苷(gan)Re(標(biao)準(zhun)品(pin))Ginsenoside Re質量規格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

MEF-7/Adr細胞，腺(xian)癌耐(nai)藥(yao)株 人(ren)卵(luan)巢癌細胞,HOC1細胞 人(ren)成纖維(wei)細胞裂(lie)解(jie)物(wu)HMFL人(ren)參皂苷(gan)F4,人(ren)參皂苷(gan)Rg4Ginsenoside F4質量規格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

恒(heng)河(he)猴腎(shen)細胞;LLC-MK2人(ren)參皂苷(gan)RK3(標(biao)準(zhun)品(pin))Ginsenoside RK3質量規格(ge)：HPLC≥98%,標(biao)準(zhun)品(pin)

ICAM3 Others Human 人(ren) CD50 / ICAM3 人(ren)細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照) 人(ren)參皂苷(gan)RH4Ginsenoside RH4質量規格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)
B3G2 Others Human 人(ren) B3G2 人(ren)細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照) 朝(chao)藿定A(標(biao)準(zhun)品(pin)）Epimedin A質量規格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

人(ren)髂動(dong)脈(mai)內(nei)皮細胞*培養基 100mL朝(chao)藿定A1(標(biao)準(zhun)品(pin))Epimedin A1質量規格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

L929細胞，小鼠成纖維(wei)細胞 3T3-L1(小鼠脂肪細胞) 小鼠腦瘤(liu)細胞;BC3H1朝(chao)藿定B（標(biao)準(zhun)品(pin)）Epimedin B質量規格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

CSF1 Protein Human 重(zhong)組人(ren) / 食(shi)蟹(xie)猴 M-CSF / CSF-1 蛋(dan)白 (His 標(biao)簽(qian))朝(chao)藿定C（標(biao)準(zhun)品(pin)）Epmedin C質量規格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

TF-1(人(ren)血液白血病細胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 小鼠腦瘤(liu)細胞;BC3H1橙黃(huang)決(jue)明素(標(biao)準(zhun)品(pin))Aurantio-obtusin質量規格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)
小鼠小腸粘(zhan)膜(mo)上皮細胞*培養基 100mL異(yi)牡荊素(標(biao)準(zhun)品(pin))質量規格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)Isovitexin

EC9706人(ren)食管癌細胞 Human esophageal cancer cell line EC9706. DMEM+10%FBS異(yi)歐前胡(hu)素（標(biao)準(zhun)品(pin)）質量規格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)Isoimperatorin

IL6 Protein Human 重(zhong)組人(ren) IL6 / Ierleukin-6 蛋(dan)白異(yi)嗪(qin)皮啶(ding)(標(biao)準(zhun)品(pin))質量規格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)Isofraxidin

SF763(人(ren)腦瘤(liu)細胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 J82(膀(pang)胱(guang)癌細胞)異(yi)去(qu)氫鉤(gou)藤(teng)堿(jian)（標(biao)準(zhun)品(pin)）質量規格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)Isocorynoxeine

CL-0060CHL(倉(cang)鼠肺細胞)5×106cells/瓶(ping)×2異(yi)羅(luo)漢果(guo)皂苷(gan) V質量規格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)isomogroside V
土(tu)貝母(mu)染(ran)料(liao)法PCR鑒(jian)定試劑盒(he)*CL-0352HFF-1(人(ren)成纖維(wei)細胞)5×106cells/瓶(ping)×2多(duo)聚嶙(lin)酸鈉(na)500毫(hao)克(ke)

MEF, 小鼠胚(pei)胎(tai)成纖(xian)維(wei)細胞偶(ou)氮二(er)異(yi)務(wu)晴 2,2'-czodi(2-mqthylbutyronitnilq) 1347-08-7

人(ren)胚(pei)肺(fei)二(er)倍體細胞;HEL-2 人(ren)胎(tai)盤羊(yang)膜(mo)細胞*培養基 100mL十九烷5克(ke)

人(ren)氣(qi)管平(ping)滑(hua)肌(ji)細胞RNAHTSMC miRNA5 μg本酸脫羧酶(mei)培養基10克(ke)RT

CAMK1G Others Human 人(ren) CAMK1G / CLICK III / CaMKIgamma 桿狀病毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細胞裂(lie)解(jie)液(ye)