灸甘(gan)草(cao)探(tan)針(zhen)法(fa)PCR鑒(jian)定(ding)試劑盒(he)保存(cun)

儲存(cun)條(tiao)件：
14℃或(huo)－20℃樣(yang)品收集、處理(li)及(ji)保(bao)存(cun)方法(fa)
1. 血清(qing)：使用(yong)不含(han)熱(re)原(yuan)和內毒素(su)的(de)試(shi)管，操(cao)作(zuo)過(guo)程中避(bi)免任(ren)何細(xi)胞(bao)刺激，收(shou)集血液(ye)後，3000 轉離心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)將(jiang)血(xue)清(qing)和紅(hong)細(xi)胞(bao)迅(xun)速(su)小心地(di)分(fen)離。
2. 血漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬酸鹽或(huo)肝(gan)素(su)抗(kang)凝。3000 轉離心(xin)30 分(fen)鐘(zhong)取(qu)上(shang)清(qing)。
3. 細(xi)胞(bao)上清(qing)液：3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆粒(li)和(he)聚(ju)合物。
4. 組(zu)織勻漿(jiang)：將(jiang)組(zu)織加入(ru)適量(liang)生(sheng)理鹽水搗碎。3000 轉離心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)取(qu)上(shang)清(qing)。
5. 保存(cun)：如果(guo)樣(yang)本(ben)收(shou)集後不及(ji)時(shi)檢測(ce)，請按壹(yi)次(ci)用量(liang)分裝(zhuang)，凍(dong)存(cun)於-20℃，避(bi)免反復(fu)凍(dong)融(rong)，在(zai)室溫(wen)下(xia)解(jie)凍(dong)並(bing)確保樣(yang)品均勻地充分解凍(dong)。

特點：
1. 即開(kai)即(ji)用，用戶(hu)只(zhi)需要(yao)提(ti)供病(bing)毒樣(yang)品。
2. 根據(ju)地黃(huang)保守序(xu)列設(she)計(ji)的(de)專(zhuan)壹性引物(wu)，與(yu)相關病(bing)毒無(wu)交叉反應。
3. 靈(ling)敏度(du)可(ke)以(yi)達到幾百拷貝(bei)/反應。
4. 壹(yi)管式熒(ying)光定(ding)量(liang) PCR 檢(jian)測(ce)，避(bi)免後續(xu)汙染。
5. 本(ben)試劑盒(he)足夠 50 次 20μL 反應體系(xi)的(de)熒(ying)光定(ding)量(liang) PCR。
6. 本(ben)產(chan)品只(zhi)適用於科研(yan)，不能(neng)用於(yu)臨床診斷(duan)。

使(shi)用(yong)方(fang)法(fa)：
壹、樣品采(cai)集：
1、食品(pin)樣(yang)品(pin)：樣(yang)品(pin)的(de)采(cai)集與預(yu)培養(yang)按照(zhao)樣品(pin)的(de)采(cai)集與預(yu)培養(yang)按照(zhao)《食品(pin)衛(wei)生(sheng)微生(sheng)物學(xue)檢驗阪崎(qi)腸桿菌(jun)檢(jian)驗要(yao)求進行。
2、血(xue)液(ye)樣(yang)品(pin)：用無(wu)菌註(zhu)射器抽取(qu)受檢(jian)者(zhe)靜(jing)脈血(xue)2mL，註(zhu)入(ru)無(wu)菌(jun)EDTA2Na(或(huo)檸(ning)檬酸鈉)抗(kang)凝管，立即混勻。
3、糞便樣(yang)品：取(qu)糞便置(zhi)於滅(mie)菌(jun)的(de)收(shou)集管中送(song)檢。
4、病(bing)竈部(bu)位樣(yang)品(pin)：取(qu)發病(bing)部(bu)位新(xin)鮮(xian)滲(shen)出(chu)物、粘(zhan)液膿血送(song)檢。
壹(yi)、稀釋(shi) PCR 陽性(xing)對照(zhao)（以 10E2-10E7 拷貝(bei)/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍(bei)稀釋(shi)度(du)為例(li)）
1. 註(zhu)意(yi)：由於標(biao)準(zhun)品濃度(du)非常(chang)高，因此下列稀釋(shi)操(cao)作壹(yi)定(ding)要(yao)在(zai)獨(du)立的(de)區域進行，千(qian)萬(wan)不能(neng)汙染樣品(pin)或(huo)本(ben)試劑盒(he)的(de)其他成分）。為增(zeng)加產(chan)品穩(wen)定(ding)性和避(bi)免擴散(san)傳(chuan)染性病(bing)原，本(ben)產(chan)品不提(ti)供活體(ti)樣品(pin)做陽性(xing)對照(zhao)，只(zhi)提(ti)供可以直(zhi)接使(shi)用的(de) DNA段(duan)作為陽性(xing)對照(zhao)。
2. 標(biao)記(ji) 6 個(ge)離心(xin)管，分(fen)別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶(dai)芯(xin)槍頭(tou)分別(bie)加入(ru) 45 μL 熒(ying)光 PCR 模板(ban)稀釋(shi)液(ye)（用帶(dai)芯(xin)槍頭(tou)，下同(tong)）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管中加入(ru) 5 μL 1×10E8 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性(xing)對照(zhao)，充分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得(de)1×10E7 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性(xing)對照(zhao)。放冰(bing)上(shang)待(dai)用(yong)。
5. 換槍頭(tou)，在(zai) 6 號(hao)管中加入(ru) 5 μL 1×10E7 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性(xing)對照(zhao)(上(shang)步(bu)稀釋(shi)所(suo)得)，充分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得(de) 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性(xing)對照(zhao)。放冰(bing)上(shang)待(dai)用(yong)。
6. 換槍頭(tou)，在(zai) 5 號(hao)管中加入(ru) 5 μL 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性(xing)對照(zhao)到 5 號(hao)管中，充分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得(de) 1×10E5 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性(xing)對照(zhao)。放冰(bing)上(shang)待(dai)用(yong)。
7. 重(zhong)復(fu)上面(mian)的(de)操(cao)作直(zhi)到得(de)到 6 個(ge)稀釋(shi)度(du)的(de)陽性(xing)對照(zhao)。放冰(bing)上(shang)待(dai)用(yong)。
註(zhu)：上述(shu)樣品建(jian)議(yi)經過增(zeng)菌後，收(shou)集培養(yang)物用(yong)於檢(jian)測(ce)。 
二、DNA提(ti)取：
可采(cai)用PCR試劑盒(he)配備(bei)的(de)DNA抽提(ti)液，按以下說明(ming)進行DNA核(he)酸的(de)粗提(ti)。也可采(cai)購(gou)上海(hai)澤(ze)葉(ye)生(sheng)物科(ke)技(ji)有限公(gong)司生(sheng)產(chan)的(de)DNA提(ti)取試劑盒(he)(過(guo)柱(zhu)法(fa)-熒光配套(tao))或(huo)其他合適的(de)商(shang)業(ye)化(hua)產(chan)品，並(bing)按照(zhao)相應試劑盒(he)說明(ming)進行操(cao)作。
1、液(ye)體(ti)培養(yang)物：取(qu)液體(ti)培養(yang)物100μL加到1.5mL無(wu)菌離心(xin)管中，8000rpm離心(xin)3min，盡(jin)量(liang)吸棄(qi)上清(qing)，加入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液充分混勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取(qu)上清(qing)5μL進行PCR反應。
2、固(gu)體培養(yang)物：挑(tiao)取單(dan)克隆菌落(luo)與(yu)50μL DNA抽(chou)提(ti)液充分混勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取(qu)上清(qing)5μL進行PCR反應。
3、糞便樣(yang)品：挑(tiao)取(qu)米(mi)粒(li)大(da)小糞便於(yu)滅菌(jun)離心(xin)管中，加入(ru)0.5mL生(sheng)理鹽水，振蕩混勻，13000rpm離心(xin)3分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱中加入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液充分混勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取(qu)上清(qing)5μL進行PCR反應。
4、其他液(ye)體標(biao)本(ben)：取標(biao)本(ben)2-3mL，13000rpm離心(xin)3min，棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱中加入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液充分混勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取(qu)上清(qing)5μL進行PCR反應。
註(zhu)：陽性(xing)對照(zhao)和陰性(xing)對(dui)照(zhao)為已(yi)經抽提(ti)好(hao)的(de)核(he)酸(無需提(ti)取)，直(zhi)接取(qu)5μL加入(ru)到反應體系(xi)中即可。由(you)於陽性(xing)對照(zhao)濃度(du)較(jiao)高，建(jian)議(yi)在(zai)樣(yang)品制備(bei)區域加入(ru)陽性(xing)對照(zhao)。 
豚(tun)鼠胚(pei)胎細(xi)胞(bao);104C1綠(lv)麥隆標(biao)準(zhun)溶液(100μg/ml,u=4%)Chlortoluron solution質(zhi)量(liang)規格：100μg/ml,u=4%

AsPc-1細(xi)胞(bao)，人轉移(yi)胰腺癌(ai)細(xi)胞(bao) 人(ren)正常(chang)皮(pi)膚細(xi)胞(bao),HaCaT細(xi)胞(bao) 小鼠T細(xi)胞(bao);Cl.Ly1+2-/9敵(di)草隆(99%)Diuron質(zhi)量(liang)規格：0.99

HSC-T6(大(da)鼠肝(gan)星形(xing)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×2四蟎(man)嗪(分析標(biao)準(zhun)品,98.6%)Clofentezine質(zhi)量(liang)規格：分(fen)析標(biao)準(zhun)品,98.6%

Gibco 17101015 Collagenase Type II 1g非草(cao)隆(標(biao)準(zhun)品)Fenuron質(zhi)量(liang)規格：分(fen)析標(biao)準(zhun)品

人(ren)心(xin)肌細(xi)胞(bao)-心(xin)室cDNAHCF-av cDNA丁(B9)(標(biao)準(zhun)品)Damizide質(zhi)量(liang)規格：分(fen)析標(biao)準(zhun)品
KYSE150 食管鱗(lin)癌(ai)西(xi)米(mi)替(ti)汀(ting)（標(biao)準(zhun)品）質(zhi)量(liang)規格：HPLC>98%,標(biao)準(zhun)品Cimetidine

ME-180人(ren)頸(jing)表(biao)皮(pi)癌(ai)細(xi)胞(bao) ME-180 human cervical epidermoid carcima cells McCOY's 5A+10%FBS阿(e)德福韋/阿(e)德福韋酯質(zhi)量(liang)規格：>99%,可(ke)用於細(xi)胞(bao)培養(yang)Adefovir dipivoxil

HGF Protein Rat 重(zhong)組大(da)鼠 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋(dan)白質(zhi)量(liang)規格：>94%,BSIndocyanine Green

小鼠海(hai)馬趾星形(xing)膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞(bao)(MA-h)(5×105) kasumi-1, 人白血(xue)病(bing)細(xi)胞(bao)株(zhu) Human靛藍質(zhi)量(liang)規格：BSIndigotin

大(da)鼠腎(shen)小管上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)RRTEpiC甲(jia)基藍質(zhi)量(liang)規格：ARMethyl blue
HRG Others Human 人(ren) HPRG / HRG 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性(xing)對照(zhao)) 琥(hu)乙(yi)（標(biao)準(zhun)品）質(zhi)量(liang)規格：雜質(zhi)檢(jian)查Erythromycin ethylsuccinate

BPH-1, 人(ren)前列腺增(zeng)生(sheng)細(xi)胞(bao)（標(biao)準(zhun)品）質(zhi)量(liang)規格：含(han)量(liang)測(ce)定(ding)Griseofulvin

FSTL5 Others Human 人(ren) FSTL5 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性(xing)對照(zhao)) Tivantinib(ARQ197)質(zhi)量(liang)規格：>98%，c-Met抑制劑Tivantinib, ARQ 197

人胚(pei)腎(shen)細(xi)胞(bao);293FT3-乙(yi)氧基(ji)－4－羥基苯（標(biao)準(zhun)品）質(zhi)量(liang)規格：系(xi)統(tong)適應性Ethyl vanillin

豹(bao)貓肺(fei)成纖維(wei)樣(yang)細(xi)胞(bao);LCL4 幼倉(cang)鼠腎(shen)細(xi)胞(bao)，BHK細(xi)胞(bao) DCS細(xi)胞(bao)，小鼠樹突狀細(xi)胞(bao)肉瘤細(xi)胞(bao)鹽酸奈(nai)福(fu)泮(pan)（標(biao)準(zhun)品）質(zhi)量(liang)規格：含(han)量(liang)測(ce)定(ding)Nefopam HCl
灸甘(gan)草(cao)探(tan)針(zhen)法(fa)PCR鑒(jian)定(ding)試劑盒(he)保存(cun)人(ren)胚胎心臟成纖維(wei)樣(yang)細(xi)胞(bao);HEH2酸500克

IL20RB Others Rat 大(da)鼠 IL20RB 人細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性(xing)對照(zhao)) 2-(2-羌基(ji)本基)本(ben)並(bing)惡坐(zuo) 2-(2-xy7XYPHqNYL)BqNZOXcZOLq 832-64-3

人腎皮(pi)層(ceng)上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)*培養(yang)基 100mL氫(qing)氧化(hua)鎘100毫克

B16-Fo細(xi)胞(bao)，鼠色素(su)瘤細(xi)胞(bao)系(xi) WI-38(胚肺(fei)細(xi)胞(bao)) 人(ren)晶(jing)體(ti)上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)永生(sheng)系(xi);SRA01/04(HLE)1,4-雙(5-本(ben)基(ji)-2-噁(噁)唑(zuo)基)本shēng huà shì jì容(rong)量(liang)：2.5升

CCL8 Protein M
實(shi)驗流(liu)程：
1. 整個(ge)檢(jian)測(ce)過(guo)程應嚴格按(an)照(zhao)本說(shuo)明(ming)書(shu)要(yao)求分(fen)別(bie)在(zai)試(shi)劑準(zhun)備(bei)區、樣(yang)本處(chu)理區和(he)PCR擴增(zeng)區進行操(cao)作，各區實(shi)驗服、儀器 、耗材(cai)應獨立使用(yong)，不能(neng)混用；實(shi)驗用吸頭(tou)采(cai)用帶(dai)濾芯(xin)吸頭(tou)；樣本(ben)處(chu)理(li)區應配有生(sheng)物安全(quan)櫃，樣本處(chu)理(li)在(zai)生(sheng)物安全(quan)櫃中進行操(cao)作；三(san)個(ge)區應該配有紫外(wai)線(xian)殺(sha)菌(jun)裝(zhuang)置(zhi)。
2. 為避(bi)免RNA降解，樣(yang)本處(chu)理(li)過(guo)程應在(zai)0-4℃條(tiao)件下操作，且(qie)完成實驗後立即上(shang)機(ji)檢測(ce)；樣(yang)本(ben)處理(li)過程中使用的(de)器具(ju)耗材(cai)應經過無(wu)核(he)酶處理(li)。

3. 每次實驗應該設(she)置陰、陽性(xing)對照(zhao)。
4. 試(shi)劑盒(he)所有試劑在(zai)使(shi)用前應該在(zai)常(chang)溫(wen)下(xia)充(chong)分(fen)融化(hua)混勻，並(bing)應瞬時離心(xin)。
5. 試(shi)劑盒(he)內所配(pei)陰性(xing)和(he)陽性(xing)對照(zhao)在(zai)壹(yi)次使用前應全(quan)部(bu)轉移(yi)至(zhi)標(biao)本(ben)準備(bei)區，並(bing)單獨(du)存(cun)放。
6. 為防止(zhi)熒光(guang)幹(gan)擾(rao)，應避(bi)免裸手直(zhi)接接觸(chu)PCR反應管，並(bing)應避(bi)免在(zai)PCR反應管上(shang)進行任(ren)何標(biao)記(ji)。
7. 儀器 擴增(zeng)相關參(can)數應按照(zhao)本說(shuo)明(ming)書(shu)相關要(yao)求進行設(she)置；不同批(pi)號(hao)試劑不能(neng)混用。
8. ABI系(xi)列熒光定(ding)量(liang)PCR儀參(can)數設(she)置中不選ROX校(xiao)正，淬滅(mie)基(ji)因選擇(ze)None。
9. 實驗過程中產(chan)品的(de)廢棄(qi)物(wu)應該進行無(wu)害化(hua)處(chu)理後方(fang)可丟棄(qi)。