路路通(tong)探(tan)針(zhen)法(fa)PCR鑒(jian)定試(shi)劑盒(he)保(bao)存

儲(chu)存條件(jian)：
14℃或－20℃樣(yang)品收(shou)集(ji)、處理(li)及(ji)保(bao)存方法(fa)
1. 血(xue)清(qing)：使(shi)用(yong)不含(han)熱(re)原和內毒(du)素的試(shi)管，操(cao)作過(guo)程(cheng)中避免任(ren)何細(xi)胞(bao)刺激，收(shou)集(ji)血(xue)液(ye)後，3000 轉(zhuan)離心10 分鐘(zhong)將(jiang)血清(qing)和(he)紅(hong)細(xi)胞(bao)迅速小(xiao)心地分離(li)。
2. 血(xue)漿：EDTA、檸檬(meng)酸鹽(yan)或肝素抗(kang)凝(ning)。3000 轉(zhuan)離心30 分鐘(zhong)取(qu)上清(qing)。
3. 細(xi)胞(bao)上清(qing)液(ye)：3000 轉(zhuan)離心10 分鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆粒(li)和聚合物。
4. 組織勻漿：將(jiang)組織加入(ru)適(shi)量生理(li)鹽(yan)水搗(dao)碎。3000 轉(zhuan)離心10 分鐘(zhong)取(qu)上清(qing)。
5. 保(bao)存：如果(guo)樣(yang)本收(shou)集(ji)後不(bu)及(ji)時檢測(ce)，請(qing)按壹次用(yong)量分裝(zhuang)，凍存於-20℃，避(bi)免反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)，在室溫下(xia)解(jie)凍並(bing)確(que)保(bao)樣(yang)品均(jun)勻地充分解(jie)凍。

特點(dian)：
1. 即(ji)開即用(yong)，用(yong)戶只(zhi)需要提(ti)供病毒樣(yang)品。
2. 根據地黃保(bao)守(shou)序列(lie)設(she)計(ji)的專壹性(xing)引(yin)物，與相(xiang)關(guan)病毒無(wu)交(jiao)叉反(fan)應。
3. 靈(ling)敏度(du)可以達到幾百拷貝/反(fan)應。
4. 壹管式(shi)熒光(guang)定(ding)量 PCR 檢測(ce)，避(bi)免後續汙染。
5. 本(ben)試(shi)劑盒(he)足夠 50 次 20μL 反(fan)應體(ti)系的熒光(guang)定(ding)量 PCR。
6. 本(ben)產品只(zhi)適(shi)用(yong)於科研，不能用(yong)於臨床診(zhen)斷。

使(shi)用(yong)方法(fa)：
壹、樣(yang)品采(cai)集(ji)：
1、食(shi)品樣(yang)品：樣(yang)品的采(cai)集(ji)與預培(pei)養(yang)按照(zhao)樣(yang)品的采(cai)集(ji)與預培(pei)養(yang)按照(zhao)《食品衛(wei)生微生物學(xue)檢驗(yan)阪(ban)崎(qi)腸(chang)桿(gan)菌(jun)檢驗(yan)要求進行。
2、血(xue)液(ye)樣(yang)品：用(yong)無菌(jun)註(zhu)射器抽(chou)取受(shou)檢者(zhe)靜脈(mai)血(xue)2mL，註(zhu)入無(wu)菌(jun)EDTA2Na(或檸檬(meng)酸鈉(na))抗(kang)凝(ning)管，立(li)即混勻。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品：取(qu)糞便(bian)置(zhi)於(yu)滅(mie)菌(jun)的收(shou)集(ji)管中送(song)檢。
4、病竈(zao)部位(wei)樣(yang)品：取(qu)發(fa)病部位(wei)新鮮(xian)滲(shen)出物、粘(zhan)液(ye)膿(nong)血(xue)送(song)檢。
壹、稀(xi)釋(shi) PCR 陽(yang)性(xing)對(dui)照（以 10E2-10E7 拷(kao)貝/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍稀(xi)釋(shi)度(du)為(wei)例）
1. 註(zhu)意：由(you)於(yu)標(biao)準品濃(nong)度(du)非常(chang)高(gao)，因此下(xia)列(lie)稀(xi)釋(shi)操(cao)作壹定(ding)要在獨立(li)的區(qu)域(yu)進行，千(qian)萬(wan)不能汙(wu)染樣(yang)品或本試(shi)劑盒(he)的其他成分）。為(wei)增(zeng)加(jia)產品穩(wen)定性(xing)和(he)避(bi)免擴(kuo)散傳(chuan)染(ran)性(xing)病原，本產品不(bu)提(ti)供活體(ti)樣(yang)品做(zuo)陽性(xing)對(dui)照，只(zhi)提(ti)供可以直(zhi)接(jie)使(shi)用(yong)的 DNA段(duan)作為(wei)陽(yang)性(xing)對(dui)照。
2. 標(biao)記 6 個(ge)離(li)心管，分別(bie)為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭分別(bie)加入(ru) 45 μL 熒光(guang) PCR 模(mo)板稀(xi)釋(shi)液(ye)（用(yong)帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭，下(xia)同(tong)）。
4. 在 7 號(hao)管中加入(ru) 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝/μL 的陽性(xing)對(dui)照，充分震(zhen)蕩 1 分鐘(zhong)，得1×10E7 拷(kao)貝/μL 的陽性(xing)對(dui)照。放冰上待(dai)用(yong)。
5. 換槍(qiang)頭，在 6 號(hao)管中加入(ru) 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝/μL 的陽性(xing)對(dui)照(上步稀(xi)釋(shi)所(suo)得)，充分震(zhen)蕩 1 分鐘(zhong)，得 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的陽性(xing)對(dui)照。放冰上待(dai)用(yong)。
6. 換槍(qiang)頭，在 5 號(hao)管中加入(ru) 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的陽性(xing)對(dui)照到 5 號(hao)管中，充分震(zhen)蕩 1 分鐘(zhong)，得 1×10E5 拷(kao)貝/μL 的陽性(xing)對(dui)照。放冰上待(dai)用(yong)。
7. 重復(fu)上面(mian)的操(cao)作直(zhi)到得到 6 個(ge)稀(xi)釋(shi)度(du)的陽性(xing)對(dui)照。放冰上待(dai)用(yong)。
註(zhu)：上述(shu)樣(yang)品建(jian)議經過(guo)增(zeng)菌(jun)後，收(shou)集(ji)培(pei)養(yang)物用(yong)於檢測(ce)。 
二(er)、DNA提(ti)取(qu)：
可采(cai)用(yong)PCR試(shi)劑盒(he)配(pei)備的DNA抽(chou)提(ti)液(ye)，按(an)以下(xia)說(shuo)明(ming)進行DNA核(he)酸的粗提(ti)。也(ye)可采(cai)購上海(hai)澤(ze)葉生物科技有限(xian)公(gong)司(si)生產的DNA提(ti)取(qu)試(shi)劑盒(he)(過(guo)柱法(fa)-熒光(guang)配(pei)套)或其他合適(shi)的商業(ye)化產品，並(bing)按(an)照相(xiang)應試(shi)劑盒(he)說明(ming)進行操(cao)作。
1、液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)物：取(qu)液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)物100μL加(jia)到1.5mL無(wu)菌離(li)心管中，8000rpm離(li)心3min，盡量吸(xi)棄(qi)上清(qing)，加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液(ye)充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心3min，取(qu)上清(qing)5μL進行PCR反(fan)應。
2、固(gu)體培(pei)養(yang)物：挑(tiao)取單克隆(long)菌落(luo)與50μL DNA抽(chou)提(ti)液(ye)充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心3min，取(qu)上清(qing)5μL進行PCR反(fan)應。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品：挑(tiao)取米粒大小(xiao)糞便(bian)於滅(mie)菌(jun)離(li)心管中，加入(ru)0.5mL生理(li)鹽(yan)水，振(zhen)蕩混勻，13000rpm離(li)心3分鐘(zhong)，棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱(dian)中加入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液(ye)充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心3min取(qu)上清(qing)5μL進行PCR反(fan)應。
4、其他液(ye)體(ti)標(biao)本(ben)：取標本2-3mL，13000rpm離(li)心3min，棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱(dian)中加入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液(ye)充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心3min取(qu)上清(qing)5μL進行PCR反(fan)應。
註(zhu)：陽性(xing)對(dui)照和(he)陰性(xing)對(dui)照為(wei)已(yi)經(jing)抽(chou)提(ti)好的核(he)酸(無(wu)需提(ti)取(qu))，直(zhi)接(jie)取(qu)5μL加(jia)入到反(fan)應體(ti)系中即可。由(you)於(yu)陽(yang)性(xing)對(dui)照濃(nong)度(du)較高(gao)，建議在樣(yang)品制(zhi)備區(qu)域(yu)加(jia)入(ru)陽(yang)性(xing)對(dui)照。 
人(ren)腸(chang)動(dong)脈(mai)內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)*培養(yang)基 100mL石(shi)蠟(la)油Paraffin oil, light fraction質(zhi)量規(gui)格(ge)：分子(zi)生物學(xue)級,PCR Grade

APP-PS1細(xi)胞(bao)，人(ren)APP-PS1雙基因(yin)轉(zhuan)染細(xi)胞(bao)株(HEK293) 宋內(nei)氏(shi)誌賀(he)氏(shi)菌(jun)(Sh.sonnei) 山(shan)羊腎(shen)上皮(pi)樣(yang)細(xi)胞(bao);DG-K1乙(yi)酸鉀(jia)Potassium acetate質(zhi)量規(gui)格(ge)：>99%,分子(zi)生物學(xue)級

CXCL10 Protein Human 重組人(ren) CXCL10 / Crg-2 蛋白無(wu)水乙(yi)酸鈉(na) acetate, anhydrate質(zhi)量規(gui)格(ge)：>99%,分子(zi)生物學(xue)級

OS-RC-2(人(ren)腎(shen)癌細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 人(ren) FSH alpha / TSH alpha / CGA 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 低熔點(dian)瓊(qiong)脂糖(tang)；具(ju)有(you)低凝膠(jiao)溫度(du)的瓊脂糖(tang)Agarose, low gelling temperature質(zhi)量規(gui)格(ge)：BR;具(ju)有低凝膠(jiao)溫度(du)

小(xiao)鼠(shu)胚(pei)胎成纖(xian)維細(xi)胞(bao);BALB/C 3T3無(wu)水1酸二(er)氫(qing)鉀(jia)Potassium phosphate, mobasic, anhydrous質(zhi)量規(gui)格(ge)：>99%,分子(zi)生物學(xue)級
腦(nao)微血管內皮(pi)細(xi)胞(bao)Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105方(fang)(1ml)檸檬(meng)酸三鉀(jia)壹水(shui)Potassium  tribasic, mohydrate質(zhi)量規(gui)格(ge)：>99%,BR

Raji細(xi)胞(bao)，人(ren)Butt`s瘤細(xi)胞(bao) C57小(xiao)鼠(shu)色(se)素瘤瘤株,ME細(xi)胞(bao) 人(ren)腎(shen)近(jin)曲小(xiao)管上皮(pi)細(xi)胞(bao)裂解(jie)物HRPTEpiCLL-焦(jiao);氧(yang)H-Pyr-OH質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%,BR

NCI-H23(人(ren)非小(xiao)細(xi)胞(bao)肺癌(ai)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2CBZ-L-焦(jiao)Z-Pyr-OH質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%,BR

CCD-1095Sk(人(ren)浸潤性(xing)導(dao)管癌旁(pang)皮(pi)膚(fu)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 CL-0078EL4(小(xiao)鼠(shu)瘤細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×2 615小(xiao)鼠(shu)網織(zhi)細(xi)胞(bao)性(xing)白(bai)血(xue)病瘤株;L615DL-m-DL-m-Tyrosine質(zhi)量規(gui)格(ge)：0.98

犬(quan)腎細(xi)胞(bao);MDCK(NBL-2)肌(ji)氨(an)酸甲酯鹽(yan)酸鹽(yan)H-Sar-OMe·HCl質(zhi)量規(gui)格(ge)：BR,98%
非洲(zhou)綠(lv)猴(hou)腎(shen)細(xi)胞(bao)系/IgR;VERO/IgR 大鼠(shu)肝癌(ai)細(xi)胞(bao)，CBRH-7919細(xi)胞(bao) BEL-7405(肝癌(ai)細(xi)胞(bao))癸(gui)二(er)酸二(er)乙(yi)酯(zhi)(Standard for GC, ≥99.5% (GC))質(zhi)量規(gui)格(ge)：Standard for GC, ≥99.5% (GC)Diethyl sebacate

人(ren)癌(ai)細(xi)胞(bao);MCF7二(er)十(shi)二(er)烷(standard for GC,≥99.0%(GC))質(zhi)量規(gui)格(ge)：standard for GC,≥99.0%(GC)Docosane

TNFRSF4 Others Human 人(ren) TNFRSF4 / CD134 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 二(er)甲基亞(ya)碸(feng)(AR,>99%(GC))質(zhi)量規(gui)格(ge)：AR,>99%(GC) Dimethyl sulfoxide

CM-H109人(ren)破骨(gu)細(xi)胞(bao)*培養(yang)基100mL二(er)甲基亞(ya)碸(feng)(>99.8%(GC))質(zhi)量規(gui)格(ge)：>99.8%(GC) Dimethyl sulfoxide

ANGPTL2 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) ANGPTL2 / Angiopoietin-like 2 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 二(er)甲基亞(ya)碸(feng)(分子(zi)生物學(xue),≥99.9%)質(zhi)量規(gui)格(ge)：分子(zi)生物學(xue),≥99.9% Dimethyl sulfoxide
路路通(tong)探(tan)針(zhen)法(fa)PCR鑒(jian)定試(shi)劑盒(he)保(bao)存大鼠(shu)垂(chui)體(ti)瘤細(xi)胞(bao);GH3N,N-二(er)去(qu)乙(yi)基舒(shu)尼替尼鹽(yan)酸鹽(yan)質量規(gui)格(ge)：美(mei)國進口N,N-Didesethyl Sunitinib

F11 Others Human 人(ren) F11 / FXI 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 舒(shu)尼替尼-d10質(zhi)量規(gui)格(ge)：美(mei)國進口Sunitinib-d10

上皮(pi)細(xi)胞(bao)生長添(tian)加物-2EpiCGS-2-13C，D2（主(zhu)要的）質量規(gui)格(ge)：美(mei)國進口FK-506-13C, D2 (Major)

CTNNB1 Others Human 人(ren) beta-Catenin / CTNNB1 桿(gan)狀病毒-昆蟲(chong)細(xi)胞(bao)
實(shi)驗(yan)流(liu)程(cheng)：
1. 整(zheng)個(ge)檢測(ce)過(guo)程(cheng)應嚴格(ge)按照(zhao)本說明書要求分別(bie)在試(shi)劑準備區(qu)、樣(yang)本處理(li)區(qu)和(he)PCR擴(kuo)增區(qu)進行操(cao)作，各(ge)區(qu)實(shi)驗(yan)服(fu)、儀器 、耗(hao)材(cai)應獨(du)立(li)使用(yong)，不能混用(yong)；實(shi)驗(yan)用(yong)吸頭采(cai)用(yong)帶(dai)濾芯(xin)吸(xi)頭；樣(yang)本處理(li)區(qu)應配(pei)有生物安(an)全櫃(gui)，樣(yang)本處理(li)在生物安(an)全櫃(gui)中進行操(cao)作；三個(ge)區(qu)應該(gai)配(pei)有紫外線殺菌裝(zhuang)置(zhi)。
2. 為(wei)避(bi)免RNA降(jiang)解(jie)，樣(yang)本處理(li)過(guo)程(cheng)應在0-4℃條(tiao)件下(xia)操(cao)作，且(qie)完(wan)成實(shi)驗(yan)後立(li)即上機(ji)檢測(ce)；樣(yang)本處理(li)過(guo)程(cheng)中使用(yong)的器具(ju)耗(hao)材(cai)應經(jing)過(guo)無(wu)核(he)酶處理(li)。

3. 每(mei)次實(shi)驗(yan)應該(gai)設(she)置(zhi)陰(yin)、陽性(xing)對(dui)照。
4. 試(shi)劑盒(he)所有(you)試(shi)劑在使用(yong)前應該(gai)在常(chang)溫下(xia)充分融(rong)化混勻，並(bing)應瞬時(shi)離心。
5. 試(shi)劑盒(he)內所(suo)配(pei)陰性(xing)和(he)陽(yang)性(xing)對(dui)照在壹次使(shi)用(yong)前應全(quan)部轉(zhuan)移至(zhi)標(biao)本(ben)準備區(qu)，並(bing)單獨存放。
6. 為(wei)防止(zhi)熒光(guang)幹(gan)擾，應避(bi)免裸(luo)手(shou)直(zhi)接(jie)接(jie)觸(chu)PCR反(fan)應管，並(bing)應避(bi)免在PCR反(fan)應管上進行任(ren)何標記。
7. 儀器 擴(kuo)增相(xiang)關(guan)參(can)數(shu)應按(an)照(zhao)本說(shuo)明(ming)書相(xiang)關(guan)要求進行設(she)置(zhi)；不(bu)同批號試(shi)劑不能混用(yong)。
8. ABI系列(lie)熒光(guang)定(ding)量PCR儀參(can)數(shu)設(she)置(zhi)中不選(xuan)ROX校(xiao)正，淬滅(mie)基因(yin)選(xuan)擇None。
9. 實(shi)驗(yan)過(guo)程(cheng)中產品的廢棄(qi)物應該(gai)進行無害化處理(li)後方(fang)可丟棄(qi)。