紫河(he)車(che)染料法(fa)PCR鑒(jian)定試劑盒(he)說明書(shu)

儲存(cun)條件：
14℃或(huo)－20℃樣品收集(ji)、處理(li)及(ji)保存(cun)方(fang)法(fa)
1. 血清(qing)：使用不(bu)含熱(re)原(yuan)和(he)內(nei)毒素的試管，操作(zuo)過程中避(bi)免(mian)任(ren)何細(xi)胞(bao)刺激，收(shou)集(ji)血液(ye)後(hou)，3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)將血清(qing)和紅細(xi)胞(bao)迅(xun)速(su)小心(xin)地(di)分離(li)。
2. 血漿：EDTA、檸(ning)檬酸鹽或肝(gan)素抗(kang)凝(ning)。3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)30 分(fen)鐘(zhong)取(qu)上清。
3. 細(xi)胞(bao)上清液：3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆(ke)粒和聚(ju)合(he)物。
4. 組(zu)織(zhi)勻漿：將(jiang)組(zu)織(zhi)加(jia)入(ru)適(shi)量生理(li)鹽水搗碎(sui)。3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)取(qu)上清。
5. 保存(cun)：如(ru)果樣本收集(ji)後(hou)不(bu)及(ji)時(shi)檢(jian)測(ce)，請按壹次用量(liang)分裝，凍(dong)存(cun)於(yu)-20℃，避(bi)免(mian)反復凍融，在室溫下(xia)解凍(dong)並(bing)確保樣品均勻地(di)充分解凍。

特(te)點(dian)：
1. 即開即用，用戶(hu)只需(xu)要提(ti)供(gong)病毒樣品。
2. 根(gen)據地(di)黃保守(shou)序(xu)列(lie)設(she)計的(de)專(zhuan)壹性(xing)引物，與相(xiang)關(guan)病(bing)毒無交叉(cha)反應(ying)。
3. 靈敏(min)度(du)可(ke)以(yi)達到(dao)幾百(bai)拷貝(bei)/反應(ying)。
4. 壹管式熒(ying)光定量 PCR 檢(jian)測(ce)，避(bi)免(mian)後(hou)續汙染。
5. 本試劑盒(he)足夠(gou) 50 次 20μL 反應(ying)體系(xi)的熒(ying)光定量 PCR。
6. 本產品只適(shi)用於(yu)科研(yan)，不(bu)能用(yong)於(yu)臨(lin)床(chuang)診斷。

使用方(fang)法(fa)：
壹、樣品采集(ji)：
1、食(shi)品樣品：樣品的采集(ji)與預培養(yang)按照(zhao)樣品的采集(ji)與預培養(yang)按照(zhao)《食(shi)品衛(wei)生微(wei)生物學(xue)檢(jian)驗(yan)阪崎(qi)腸桿菌(jun)檢驗(yan)要求(qiu)進行。
2、血液(ye)樣品：用無菌註射器(qi)抽(chou)取(qu)受(shou)檢(jian)者(zhe)靜脈(mai)血2mL，註入無菌EDTA2Na(或(huo)檸(ning)檬酸鈉)抗(kang)凝(ning)管，立即混勻。
3、糞便(bian)樣品：取(qu)糞便(bian)置(zhi)於(yu)滅菌的(de)收集(ji)管中送(song)檢。
4、病(bing)竈(zao)部位(wei)樣品：取(qu)發(fa)病(bing)部位(wei)新(xin)鮮滲出物、粘液(ye)膿血送(song)檢。
壹、稀釋(shi) PCR 陽性(xing)對(dui)照(zhao)（以(yi) 10E2-10E7 拷貝(bei)/μL 這 6 個(ge) 10 倍(bei)稀釋(shi)度(du)為例）
1. 註意：由(you)於(yu)標(biao)準品濃度(du)非(fei)常高，因(yin)此下(xia)列(lie)稀釋(shi)操作(zuo)壹定要在獨立(li)的(de)區(qu)域(yu)進行，千(qian)萬不(bu)能汙染樣品或本試劑盒(he)的其(qi)他成分(fen)）。為增加(jia)產(chan)品穩定性(xing)和避(bi)免(mian)擴散(san)傳染性(xing)病原(yuan)，本產品不(bu)提供(gong)活體(ti)樣品做陽性(xing)對(dui)照(zhao)，只提供(gong)可以(yi)直接(jie)使用的 DNA段(duan)作(zuo)為陽性(xing)對(dui)照(zhao)。
2. 標(biao)記(ji) 6 個(ge)離(li)心(xin)管，分別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶(dai)芯(xin)槍頭分(fen)別(bie)加(jia)入(ru) 45 μL 熒(ying)光 PCR 模板稀釋(shi)液（用(yong)帶芯(xin)槍頭，下(xia)同(tong)）。
4. 在 7 號(hao)管中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E8 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性(xing)對(dui)照(zhao)，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de)1×10E7 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性(xing)對(dui)照(zhao)。放(fang)冰上待(dai)用(yong)。
5. 換(huan)槍頭，在 6 號(hao)管中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E7 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性(xing)對(dui)照(zhao)(上步稀釋(shi)所得(de))，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性(xing)對(dui)照(zhao)。放(fang)冰上待(dai)用(yong)。
6. 換(huan)槍頭，在 5 號(hao)管中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性(xing)對(dui)照(zhao)到(dao) 5 號(hao)管中，充(chong)分震(zhen)蕩 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E5 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性(xing)對(dui)照(zhao)。放(fang)冰上待(dai)用(yong)。
7. 重(zhong)復上面的操作(zuo)直(zhi)到(dao)得(de)到(dao) 6 個(ge)稀釋(shi)度(du)的(de)陽性(xing)對(dui)照(zhao)。放(fang)冰上待(dai)用(yong)。
註：上述(shu)樣品建議(yi)經過增菌(jun)後(hou)，收(shou)集(ji)培養(yang)物用於(yu)檢測(ce)。 
二、DNA提(ti)取(qu)：
可(ke)采(cai)用PCR試劑盒(he)配備(bei)的(de)DNA抽(chou)提液，按以下(xia)說明進行DNA核(he)酸的粗(cu)提(ti)。也(ye)可采(cai)購(gou)上海澤(ze)葉生物科技有(you)限公(gong)司生產(chan)的DNA提(ti)取(qu)試劑盒(he)(過(guo)柱(zhu)法(fa)-熒(ying)光配套)或(huo)其(qi)他合(he)適(shi)的商業(ye)化產品，並(bing)按照(zhao)相(xiang)應(ying)試劑盒(he)說明進行操作。
1、液(ye)體(ti)培養(yang)物：取(qu)液(ye)體(ti)培養(yang)物100μL加(jia)到(dao)1.5mL無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管中，8000rpm離(li)心(xin)3min，盡(jin)量(liang)吸(xi)棄上清，加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提液充(chong)分混勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上清5μL進行PCR反應(ying)。
2、固(gu)體培養(yang)物：挑取(qu)單(dan)克(ke)隆菌(jun)落與50μL DNA抽(chou)提液充(chong)分混勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上清5μL進行PCR反應(ying)。
3、糞便(bian)樣品：挑取(qu)米(mi)粒大小糞便(bian)於(yu)滅菌離(li)心(xin)管中，加(jia)入(ru)0.5mL生理(li)鹽水，振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻，13000rpm離(li)心(xin)3分(fen)鐘(zhong)，棄上清，沈澱中加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提液充(chong)分混勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上清5μL進行PCR反應(ying)。
4、其(qi)他液(ye)體(ti)標(biao)本：取(qu)標(biao)本2-3mL，13000rpm離(li)心(xin)3min，棄上清，沈澱中加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提液充(chong)分混勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上清5μL進行PCR反應(ying)。
註：陽性(xing)對(dui)照(zhao)和(he)陰(yin)性(xing)對(dui)照(zhao)為已(yi)經抽(chou)提好的(de)核酸(無(wu)需(xu)提取(qu))，直(zhi)接(jie)取(qu)5μL加(jia)入(ru)到(dao)反應(ying)體系(xi)中即可。由(you)於(yu)陽性(xing)對(dui)照(zhao)濃度(du)較(jiao)高(gao)，建議(yi)在樣品制備(bei)區(qu)域(yu)加(jia)入(ru)陽性(xing)對(dui)照(zhao)。 
CFSC-2G細(xi)胞(bao)，大(da)鼠(shu)肝(gan)星形(xing)細(xi)胞(bao) 7721(7721肝(gan)癌細(xi)胞(bao)) tTA基(ji)因(yin)修(xiu)飾的小鼠(shu)胰(yi)腺癌細(xi)胞(bao)(B類(lei));Pan02-CAG-tTA-3E6，前(qian)列(lie)腺素E1Alprostadil,PGE1,質量(liang)規(gui)格：>95%,BR,USP30

EFNB3 Protein Rat 重(zhong)組(zu)大鼠 Ephrin-B3 / EFNB3 蛋(dan)白 (His 標(biao)簽)四1雌酮,1丙(bing)孕(yun)素Altregest質量(liang)規(gui)格：> 99%

Y1(Y-1) (小鼠(shu)腎上腺皮質細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 小鼠(shu)細(xi)胞(bao)白(bai)血病(bing);L1210四1雌酮,1丙(bing)孕(yun)素(標(biao)準品)Altregest質量(liang)規(gui)格：HPLC>98%,標(biao)準品

山(shan)羊腎上皮樣細(xi)胞(bao);DG-K1Amantadine HCl質量(liang)規(gui)格：>98%,BR

人(ren)膀胱基(ji)質成纖維(wei)細(xi)胞(bao)(HBdSF)(5×105)（標(biao)準品）Amantadine HCl質量(liang)規(gui)格：HPLC>98%,標(biao)準品
HNE2-LMP1/2細(xi)胞(bao)，人(ren)鼻(bi)咽癌(ai)細(xi)胞(bao)系(xi) 小鼠(shu)肝(gan)癌細(xi)胞(bao),H22細(xi)胞(bao) CM-H071人(ren)腎動(dong)脈(mai)平(ping)滑(hua)肌(ji)細(xi)胞(bao)*培養(yang)基(ji)100mL4-硝(xiao)基(ji)兒茶酚(fen)4-NITROCATECHOL質量(liang)規(gui)格：>98.0% ，進口分裝

OS-RC-2(人(ren)腎癌細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×2曲(qu)格列(lie)酮Troglitazone(CS-045)質量(liang)規(gui)格：>98%,BR

Promocell C-27101 Chondrocyte Growth Medium, 軟(ruan)骨(gu)細(xi)胞(bao)生長(chang)培養(yang)基(ji)(即用型(xing)) 500ml2-氨(an)基-4'-氟二苯(ben)甲酮2-Ami-4'-fluorobenzophene 質量(liang)規(gui)格：>98%

骨(gu)骼(ge)肌(ji)細(xi)胞(bao)Many types of cells包(bao)裝：5 × 105方(fang)(1ml)2-氨(an)基-4'-氯二苯(ben)甲酮2-ami-4'-chlorobenzophene 質量(liang)規(gui)格：大於(yu)98%，化學(xue)

WIF1 Others Mouse 小鼠(shu) WIF1 / WIF-1 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) 原(yuan)百(bai)部(bu)堿(標(biao)準品)Protostemonine質量(liang)規(gui)格：HPLC≥98%，標(biao)準品
MMP8 Others Mouse 小鼠(shu) MMP8 / CLG1 CHO細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) （標(biao)準品）質量(liang)規(gui)格：含量(liang)測(ce)定Uracil

EB病(bing)毒轉(zhuan)化的人(ren)B細(xi)胞(bao);KM9801溴丙(bing)胺肽林（標(biao)準品）質量(liang)規(gui)格：HPLC法(fa)含量測(ce)定Propantheline bromide

豹(bao)貓肺(fei)成纖維(wei)樣細(xi)胞(bao);LCL1 張(zhang)氏肝(gan)細(xi)胞(bao)，HeLa[Chang Liver]細(xi)胞(bao) LLC-PK1細(xi)胞(bao)，豬腎細(xi)胞(bao)（標(biao)準品）質量(liang)規(gui)格：HPLC法(fa)含量測(ce)定Tulobuterol

人(ren)肺(fei)成纖維(wei)細(xi)胞(bao);HFL1無(wu)水(shui)1酸氫二鈉（標(biao)準品）質量(liang)規(gui)格：含量(liang)測(ce)定N-(Isoxazol-5-yl)sulphanilamide

HA Others H6N1 甲型(xing)流感(gan) H6N1 血凝(ning)素(su) (Hemagglutinin / HA) 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) 質量(liang)規(gui)格：>99%,可(ke)用(yong)於(yu)細(xi)胞(bao)培養(yang)Uracil
紫河(he)車(che)染料法(fa)PCR鑒(jian)定試劑盒(he)說明書(shu)MN-c, 小鼠(shu)皮(pi)質神經元(yuan)DG-18瓊(qiong)脂25毫(hao)升(sheng)2～8℃

小鼠(shu)神經幹細(xi)胞(bao)BOC-D-天冬酸 Boc-Asp-OH,99% 13726-67-5 1G 通(tong)用(yong)試劑

人(ren)胚(pei)胎，皮膚，肌(ji)肉;M-22 人(ren)食(shi)管上皮細(xi)胞(bao)*培養(yang)基(ji) 100mL Ibuprofqn 12687-7-1

人(ren)間(jian)充質幹(gan)細(xi)胞(bao)(脂(zhi)肪(fang))cDNAHMSC-ad cDNAMFC培養(yang)基(ji)1米(mi)

TNFSF11 Others Human 人(ren) RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) 1400-62-0地(di)衣紅OR
實(shi)驗(yan)流程：
1. 整(zheng)個(ge)檢測(ce)過(guo)程應(ying)嚴格按照(zhao)本說明書(shu)要求(qiu)分(fen)別(bie)在試劑準(zhun)備(bei)區(qu)、樣本處理(li)區(qu)和(he)PCR擴增(zeng)區(qu)進行操作，各(ge)區(qu)實(shi)驗(yan)服(fu)、儀器(qi) 、耗(hao)材(cai)應(ying)獨(du)立(li)使用，不(bu)能混(hun)用；實驗(yan)用吸(xi)頭(tou)采(cai)用帶濾(lv)芯(xin)吸(xi)頭(tou)；樣本處理(li)區(qu)應(ying)配有(you)生物安全(quan)櫃，樣本處理(li)在生物安全(quan)櫃中進行操作；三(san)個區(qu)應(ying)該(gai)配有(you)紫外線(xian)殺菌(jun)裝置(zhi)。
2. 為避免(mian)RNA降(jiang)解，樣本處理(li)過(guo)程應(ying)在0-4℃條(tiao)件下操作，且(qie)完(wan)成實(shi)驗(yan)後(hou)立(li)即上機檢測(ce)；樣本處理(li)過(guo)程中使用的器具(ju)耗(hao)材(cai)應(ying)經過無核(he)酶(mei)處理(li)。

3. 每(mei)次實驗(yan)應該(gai)設(she)置(zhi)陰(yin)、陽性(xing)對(dui)照(zhao)。
4. 試劑盒(he)所有(you)試劑在使用前應該(gai)在常溫下(xia)充分(fen)融(rong)化混勻，並(bing)應瞬(shun)時(shi)離(li)心(xin)。
5. 試劑盒(he)內(nei)所(suo)配陰(yin)性(xing)和陽性(xing)對(dui)照(zhao)在壹次使用前應全(quan)部(bu)轉(zhuan)移(yi)至標(biao)本準備(bei)區(qu)，並(bing)單(dan)獨(du)存(cun)放。
6. 為防(fang)止熒(ying)光幹擾，應(ying)避免(mian)裸(luo)手直(zhi)接接(jie)觸PCR反應(ying)管，並(bing)應避(bi)免(mian)在PCR反應(ying)管上進行任(ren)何標(biao)記(ji)。
7. 儀器(qi) 擴增(zeng)相(xiang)關參數應按照(zhao)本說明書(shu)相(xiang)關要求(qiu)進行設(she)置(zhi)；不(bu)同批(pi)號試劑不(bu)能混(hun)用。
8. ABI系(xi)列(lie)熒(ying)光定量PCR儀參數設(she)置(zhi)中不(bu)選ROX校(xiao)正(zheng)，淬(cui)滅(mie)基因(yin)選擇None。
9. 實(shi)驗(yan)過程中產(chan)品的廢棄物應該(gai)進行無害化處理(li)後(hou)方(fang)可丟(diu)棄。