甘(gan)草(cao)PCR鑒(jian)定(ding)試劑盒說(shuo)明(ming)書

實(shi)驗(yan)流程：
1. 整(zheng)個檢測過程應嚴格(ge)按照本(ben)說(shuo)明(ming)書要(yao)求分(fen)別(bie)在(zai)試劑準備區、樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)區和PCR擴(kuo)增區進行(xing)操(cao)作(zuo)，各區實(shi)驗(yan)服(fu)、儀器 、耗(hao)材應獨(du)立使用，不能(neng)混(hun)用；實(shi)驗(yan)用吸頭采(cai)用帶(dai)濾(lv)芯吸頭；樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)區應配(pei)有生物(wu)安(an)全(quan)櫃(gui)，樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)在(zai)生物(wu)安(an)全(quan)櫃(gui)中進行(xing)操(cao)作(zuo)；三個區應該(gai)配(pei)有紫外線殺菌(jun)裝置(zhi)。
2. 為(wei)避免RNA降(jiang)解，樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)過(guo)程應在(zai)0-4℃條件下(xia)操(cao)作(zuo)，且(qie)完(wan)成實(shi)驗(yan)後立(li)即上機檢(jian)測；樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)過(guo)程中使用的器(qi)具耗(hao)材應經(jing)過無(wu)核酶處(chu)理(li)。
3. 每(mei)次實(shi)驗(yan)應該(gai)設(she)置(zhi)陰、陽(yang)性對(dui)照。
4. 試劑盒所有試劑在(zai)使用前應該(gai)在(zai)常溫下(xia)充(chong)分融(rong)化(hua)混(hun)勻，並(bing)應瞬(shun)時(shi)離心(xin)。
5. 試劑盒內所配(pei)陰性(xing)和陽(yang)性對(dui)照在(zai)壹(yi)次使用前應全(quan)部轉(zhuan)移至(zhi)標(biao)本準(zhun)備區，並(bing)單獨(du)存(cun)放。
6. 為(wei)防(fang)止(zhi)熒光幹擾(rao)，應避(bi)免裸手(shou)直接(jie)接(jie)觸(chu)PCR反(fan)應管，並(bing)應避(bi)免在(zai)PCR反(fan)應管上(shang)進行(xing)任(ren)何標(biao)記(ji)。
7. 儀器 擴(kuo)增相(xiang)關(guan)參數(shu)應按(an)照本(ben)說(shuo)明(ming)書相(xiang)關(guan)要(yao)求進行(xing)設(she)置(zhi)；不同批(pi)號(hao)試劑不能(neng)混(hun)用。
8. ABI系列(lie)熒(ying)光定(ding)量PCR儀參數(shu)設(she)置(zhi)中不選(xuan)ROX校正，淬滅基因(yin)選(xuan)擇(ze)None。
9. 實(shi)驗(yan)過(guo)程(cheng)中產(chan)品(pin)的廢(fei)棄物應該(gai)進行(xing)無(wu)害(hai)化(hua)處(chu)理(li)後方(fang)可丟棄。

特點(dian)：
1. 即開(kai)即用，用戶只需要(yao)提供(gong)病毒樣(yang)品(pin)。
2. 根(gen)據地(di)黃(huang)保(bao)守(shou)序列(lie)設(she)計(ji)的專(zhuan)壹(yi)性(xing)引物(wu)，與(yu)相(xiang)關(guan)病毒無(wu)交(jiao)叉(cha)反(fan)應。
3. 靈(ling)敏(min)度可(ke)以(yi)達到(dao)幾百(bai)拷貝/反(fan)應。
4. 壹(yi)管式(shi)熒(ying)光定(ding)量 PCR 檢(jian)測，避免後續(xu)汙染。
5. 本(ben)試劑盒足(zu)夠(gou) 50 次 20μL 反(fan)應體(ti)系的熒(ying)光定(ding)量 PCR。
6. 本(ben)產品(pin)只適用於(yu)科(ke)研，不能(neng)用於(yu)臨床診(zhen)斷(duan)。
使用方法：
壹(yi)、樣(yang)品(pin)采(cai)集：
1、食品(pin)樣(yang)品(pin)：樣(yang)品(pin)的采(cai)集與(yu)預培(pei)養按照樣(yang)品(pin)的采(cai)集與(yu)預培(pei)養按照《食品(pin)衛生微生物(wu)學(xue)檢(jian)驗(yan)阪(ban)崎腸(chang)桿(gan)菌(jun)檢驗(yan)要(yao)求進行(xing)。
2、血(xue)液樣(yang)品(pin)：用無(wu)菌(jun)註射(she)器(qi)抽(chou)取受(shou)檢者靜脈(mai)血(xue)2mL，註入無(wu)菌(jun)EDTA2Na(或檸(ning)檬(meng)酸鈉)抗(kang)凝管，立(li)即混(hun)勻。
3、糞(fen)便樣(yang)品(pin)：取糞(fen)便置於(yu)滅菌(jun)的收(shou)集管中送(song)檢(jian)。
4、病竈(zao)部位(wei)樣(yang)品(pin)：取發(fa)病部位(wei)新鮮(xian)滲出物(wu)、粘(zhan)液膿(nong)血(xue)送(song)檢(jian)。
壹(yi)、稀(xi)釋 PCR 陽(yang)性對(dui)照（以(yi) 10E2-10E7 拷貝/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍(bei)稀釋度為(wei)例(li)）
1. 註意：由於(yu)標(biao)準品(pin)濃度非常(chang)高，因(yin)此(ci)下(xia)列稀(xi)釋操(cao)作(zuo)壹(yi)定(ding)要(yao)在(zai)獨(du)立的區域進行(xing)，千萬(wan)不能(neng)汙染樣(yang)品(pin)或本(ben)試劑盒的其(qi)他成分(fen)）。為增加產(chan)品(pin)穩定(ding)性和避免擴(kuo)散(san)傳染性病原(yuan)，本(ben)產品(pin)不提供(gong)活(huo)體(ti)樣(yang)品(pin)做(zuo)陽(yang)性對(dui)照，只提供(gong)可(ke)以直接(jie)使用的 DNA段作為(wei)陽(yang)性對(dui)照。
2. 標(biao)記(ji) 6 個(ge)離心(xin)管，分(fen)別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭分(fen)別(bie)加入 45 μL 熒(ying)光 PCR 模(mo)板稀釋液（用帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭，下(xia)同）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管中加(jia)入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照，充(chong)分震(zhen)蕩 1 分(fen)鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上(shang)待用。
5. 換槍(qiang)頭，在(zai) 6 號(hao)管中加(jia)入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照(上(shang)步(bu)稀釋所得)，充(chong)分震(zhen)蕩 1 分(fen)鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上(shang)待用。
6. 換槍(qiang)頭，在(zai) 5 號(hao)管中加(jia)入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照到(dao) 5 號(hao)管中，充(chong)分震(zhen)蕩 1 分(fen)鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上(shang)待用。
7. 重(zhong)復上面(mian)的操(cao)作(zuo)直到(dao)得(de)到 6 個(ge)稀釋度的陽(yang)性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上(shang)待用。
註：上(shang)述(shu)樣(yang)品(pin)建議經過增菌(jun)後，收(shou)集培(pei)養物用於(yu)檢測。 
二(er)、DNA提取：
可(ke)采(cai)用PCR試劑盒配(pei)備的DNA抽(chou)提液，按(an)以(yi)下(xia)說(shuo)明(ming)進行(xing)DNA核酸的粗提。也(ye)可采(cai)購(gou)上海澤(ze)葉(ye)生物(wu)科(ke)技有(you)限(xian)公(gong)司(si)生產(chan)的DNA提取試劑盒(過(guo)柱法-熒(ying)光配(pei)套)或其(qi)他合適的商(shang)業(ye)化(hua)產(chan)品(pin)，並(bing)按照相(xiang)應試劑盒說(shuo)明(ming)進行(xing)操(cao)作(zuo)。
1、液(ye)體(ti)培(pei)養物：取(qu)液體(ti)培(pei)養物100μL加(jia)到1.5mL無(wu)菌(jun)離心(xin)管中，8000rpm離心(xin)3min，盡量吸棄上清(qing)，加(jia)入50μL DNA抽(chou)提液充(chong)分混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min，取(qu)上清(qing)5μL進行(xing)PCR反(fan)應。
2、固(gu)體(ti)培(pei)養物：挑(tiao)取單克隆(long)菌(jun)落與(yu)50μL DNA抽(chou)提液充(chong)分混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min，取(qu)上清(qing)5μL進行(xing)PCR反(fan)應。
3、糞(fen)便樣(yang)品(pin)：挑(tiao)取米(mi)粒(li)大(da)小糞(fen)便於(yu)滅菌(jun)離心(xin)管中，加(jia)入0.5mL生理(li)鹽(yan)水，振蕩(dang)混(hun)勻，13000rpm離心(xin)3分(fen)鐘，棄上清(qing)，沈(chen)澱(dian)中加(jia)入50μL DNA抽(chou)提液充(chong)分混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min取(qu)上清(qing)5μL進行(xing)PCR反(fan)應。
4、其(qi)他液體(ti)標(biao)本：取(qu)標(biao)本2-3mL，13000rpm離心(xin)3min，棄上清(qing)，沈(chen)澱(dian)中加(jia)入50μL DNA抽(chou)提液充(chong)分混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min取(qu)上清(qing)5μL進行(xing)PCR反(fan)應。
註：陽(yang)性對(dui)照和陰性對(dui)照為(wei)已(yi)經(jing)抽(chou)提好(hao)的核酸(無(wu)需(xu)提取)，直接(jie)取(qu)5μL加(jia)入到(dao)反(fan)應體(ti)系中即可。由於(yu)陽(yang)性對(dui)照濃度較高(gao)，建議在(zai)樣(yang)品(pin)制(zhi)備區域加(jia)入陽(yang)性對(dui)照。 
IL12B Others Marmoset 狨猴(hou) IL12B / IL-12B 人細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對(dui)照) 絡(luo)塞(sai)琳(lin)（標(biao)準品(pin)）Rosarin質(zhi)量規格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準品(pin)

大(da)鼠(shu)腎小球(qiu)系膜細胞(bao);HBZY-1絡(luo)緦（標(biao)準品(pin)）Rosin質(zhi)量規格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準品(pin)

HepG-2細胞(bao)，人肝癌細胞(bao) 上(shang)頜牙齦癌頸結(jie)轉移癌,GNM細胞(bao) 大(da)鼠(shu)胚胎心(xin)肌細胞(bao);H9c2(2-1)AT7519.HClAT7-519.HCl質(zhi)量規格(ge)：>98%,多種(zhong)CDK抑制(zhi)劑(ji)

Jurkat, Clone E6-1 (人急性T細胞(bao)白(bai)血(xue)病細胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2培(pei)利替尼;貝(bei)利替尼;EKB569Pelitinib (EKB-569)質(zhi)量規格(ge)：>98%,不可(ke)逆(ni)EGFR抑制(zhi)劑(ji)

Promocell C-25110 Hepatocyte Growth MediumKIT, 肝(gan)細胞(bao)生長(chang)培(pei)養基套(tao)裝 500ml乙(yi)素（標(biao)準品(pin)）Tripdiolide質(zhi)量規格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準品(pin)
CN1 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) Coactin 1 / CN1 人細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對(dui)照) 伊(yi)文思(si)藍；埃文(wen)斯藍質量規格(ge)：BS,進分(fen)BIOFER,>85%Evans Blue

散(san)鱗(lin)鏡鯉(li)尾(wei)鰭細胞(bao);YZ21曲(qu)利苯藍質量規格(ge)：BSTrypan Blue

NCI-H1688細胞(bao)，人經典小細胞(bao)肺(fei)癌細胞(bao) 大(da)鼠(shu)腎上腺嗜鉻細胞(bao)瘤(liu)細胞(bao)(未(wei)分化(hua)),PC-12細胞(bao) CM-H135人脈(mai)絡膜微血(xue)管細胞(bao)*培(pei)養基100mL吲哚(duo)(standard for GC,>99.5%(GC))質(zhi)量規格(ge)：standard for GC,>99.5%(GC)Indole

PC-3(人前列腺癌細胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2辛(xin)酸乙酯(Standard for GC,>99%(GC))質(zhi)量規格(ge)：Standard for GC,>99%(GC)Ethyl octaate

Promocell C-28021 Hematopoietic Progenitor CellExpansion Medium DXF, 造(zao)血(xue)祖細胞(bao)擴(kuo)展(zhan)培(pei)養基DXF 500ml異(yi)辛(xin)醇(standard for GC, ≥99.5% (GC))質(zhi)量規格(ge)：standard for GC, ≥99.5% (GC)2-Ethyl-1-hexal
HRCEpC-c 人腎皮質上皮細胞(bao)(HRCEpC) 500,000cells 人星(xing)形(xing)膠(jiao)質細胞(bao)HA夏(xia)佛塔苷（標(biao)準品(pin)）質量規格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準品(pin)Schaftoside

原(yuan)代單核細胞(bao)培(pei)養特制(zhi)添(tian)加劑(ji)Many types of cells包(bao)裝：5/2.5/1ml二(er)氫(qing)小檗堿（標(biao)準品(pin)）質量規格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準品(pin)9,10-Dimethoxy-2,3-(methylenedioxy)-13,13a-didehydrob

BLK Others Human 人 BLK / B Lymphocyte Kinase 桿(gan)狀病毒-昆(kun)蟲細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對(dui)照) 桔(ju)紅(hong)素(su);桔(ju)皮素(標(biao)準品(pin))質(zhi)量規格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準品(pin)Tangeretin

中國(guo)倉鼠(shu)卵巢細胞(bao)K1(亞系克(ke)隆(long));CHO-K1桔(ju)紅(hong)素(su);桔(ju)皮素質量規格(ge)：HPLC≥98%,BRTangeretin

A549[A-549]細胞(bao)，肺(fei)癌細胞(bao) 人肝癌細胞(bao),SMMC-7721細胞(bao) T-104BII型膠原(yuan)酶(含(han)100mL酶(mei)解緩沖(chong)液)10mL-d8質(zhi)量規格(ge)：美國(guo)進口rfloxacin-d8
甘(gan)草(cao)PCR鑒(jian)定(ding)試劑盒說(shuo)明(ming)書GPNMB Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) GPNMB / Osteoactivin 人細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對(dui)照) CBZ-L-纈(xie)酸shēng huà shì jì容量：100克(ke)

人腦動脈(mai)血(xue)管平(ping)滑(hua)肌(ji)細胞(bao)*培(pei)養基 100mL4-甲(jia)氧(yang)基(ji) 4-Methoxy,99% 104-01-8 10G 通(tong)用試劑

COS-6細胞(bao)，非洲(zhou)綠猴(hou)腎細胞(bao) A375(人類惡性色素(su)瘤) 中國(guo)倉鼠(shu)卵巢細胞(bao)(亞系克(ke)隆(long));DUKXB11 carrying pDEF202-hTPO-P1牛(niu)血(xue)紅蛋(dan)柏(bai)(+4℃) HqMOGLOBIN 9008-0-
儲(chu)存(cun)條件：
14℃或－20℃樣(yang)品(pin)收(shou)集、處(chu)理(li)及保(bao)存(cun)方法(fa)
1. 血(xue)清(qing)：使用不含(han)熱原和內毒素(su)的試管，操(cao)作(zuo)過程中避(bi)免任(ren)何細胞(bao)刺(ci)激，收(shou)集血(xue)液後，3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分(fen)鐘將血(xue)清(qing)和紅細胞(bao)迅(xun)速(su)小(xiao)心(xin)地(di)分(fen)離。
2. 血(xue)漿：EDTA、檸(ning)檬(meng)酸鹽(yan)或肝(gan)素抗(kang)凝。3000 轉(zhuan)離心(xin)30 分(fen)鐘取上(shang)清(qing)。
3. 細胞(bao)上(shang)清(qing)液(ye)：3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分(fen)鐘去除(chu)顆粒(li)和聚合物。
4. 組織勻(yun)漿：將(jiang)組織加(jia)入適(shi)量生理(li)鹽(yan)水搗碎。3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分(fen)鐘取上(shang)清(qing)。
5. 保(bao)存(cun)：如果樣(yang)本(ben)收(shou)集後不及時(shi)檢測，請按壹(yi)次用量分裝(zhuang)，凍存(cun)於(yu)-20℃，避(bi)免反復凍融(rong)，在(zai)室溫下(xia)解凍(dong)並(bing)確保樣(yang)品(pin)均勻地(di)充(chong)分解(jie)凍(dong)。