蓮(lian)子(zi)心PCR鑒(jian)定試劑盒(he)直銷(xiao)

特(te)點：
1. 即開(kai)即用(yong)，用(yong)戶只(zhi)需(xu)要提(ti)供病(bing)毒(du)樣品(pin)。
2. 根據地黃(huang)保(bao)守序(xu)列設計的專(zhuan)壹性引(yin)物，與相(xiang)關病(bing)毒(du)無交叉(cha)反應。
3. 靈敏度(du)可(ke)以(yi)達到(dao)幾(ji)百拷(kao)貝(bei)/反應。
4. 壹管式(shi)熒(ying)光定量 PCR 檢測(ce)，避免(mian)後續(xu)汙(wu)染。
5. 本(ben)試劑盒(he)足夠(gou) 50 次 20μL 反應體系(xi)的熒(ying)光定量 PCR。
6. 本(ben)產(chan)品(pin)只(zhi)適用(yong)於(yu)科(ke)研(yan)，不(bu)能用(yong)於(yu)臨(lin)床(chuang)診斷。

使(shi)用(yong)方(fang)法(fa)：
壹、樣品(pin)采(cai)集：
1、食品(pin)樣品(pin)：樣品(pin)的采(cai)集(ji)與預(yu)培養(yang)按照(zhao)樣品(pin)的采(cai)集(ji)與預(yu)培養(yang)按照(zhao)《食品(pin)衛(wei)生微生物學(xue)檢驗(yan)阪(ban)崎(qi)腸(chang)桿(gan)菌(jun)檢驗(yan)要(yao)求(qiu)進(jin)行。
2、血液樣品(pin)：用(yong)無(wu)菌(jun)註(zhu)射器抽(chou)取(qu)受檢者靜脈血2mL，註入無(wu)菌EDTA2Na(或(huo)檸(ning)檬酸(suan)鈉(na))抗(kang)凝管，立(li)即(ji)混(hun)勻。
3、糞(fen)便樣品(pin)：取(qu)糞(fen)便置於(yu)滅菌的收集管中送(song)檢(jian)。
4、病(bing)竈(zao)部(bu)位樣品(pin)：取(qu)發病(bing)部(bu)位新(xin)鮮(xian)滲(shen)出(chu)物、粘(zhan)液膿血送(song)檢(jian)。
壹、稀釋(shi) PCR 陽(yang)性對照(zhao)（以 10E2-10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 這 6 個 10 倍(bei)稀(xi)釋(shi)度(du)為例(li)）
1. 註意(yi)：由於標準(zhun)品(pin)濃(nong)度(du)非常高(gao)，因此下(xia)列稀釋(shi)操作(zuo)壹定要(yao)在(zai)獨立(li)的區(qu)域進(jin)行，千(qian)萬不(bu)能汙(wu)染樣品(pin)或(huo)本(ben)試劑盒(he)的其他(ta)成(cheng)分）。為增加產(chan)品(pin)穩(wen)定性和避免(mian)擴(kuo)散(san)傳染(ran)性病(bing)原(yuan)，本(ben)產(chan)品(pin)不(bu)提供(gong)活體樣品(pin)做(zuo)陽(yang)性對照(zhao)，只提(ti)供可(ke)以(yi)直接使(shi)用(yong)的 DNA段(duan)作(zuo)為陽(yang)性對照(zhao)。
2. 標記(ji) 6 個離(li)心管，分(fen)別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶(dai)芯(xin)槍頭分別(bie)加入 45 μL 熒(ying)光 PCR 模板(ban)稀釋(shi)液（用(yong)帶(dai)芯(xin)槍頭，下(xia)同）。
4. 在(zai) 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性對照(zhao)，充分(fen)震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性對照(zhao)。放冰上待(dai)用(yong)。
5. 換(huan)槍(qiang)頭(tou)，在(zai) 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性對照(zhao)(上步(bu)稀釋(shi)所(suo)得(de))，充分(fen)震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性對照(zhao)。放冰上待(dai)用(yong)。
6. 換(huan)槍(qiang)頭(tou)，在(zai) 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性對照(zhao)到(dao) 5 號管中，充分(fen)震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性對照(zhao)。放冰上待(dai)用(yong)。
7. 重(zhong)復(fu)上面的操作(zuo)直到(dao)得到(dao) 6 個稀(xi)釋(shi)度(du)的陽(yang)性對照(zhao)。放冰上待(dai)用(yong)。
註：上述(shu)樣品(pin)建(jian)議經過(guo)增(zeng)菌(jun)後(hou)，收集培(pei)養(yang)物用(yong)於(yu)檢(jian)測(ce)。 
二(er)、DNA提取(qu)：
可采(cai)用(yong)PCR試劑盒(he)配備(bei)的DNA抽(chou)提(ti)液，按以(yi)下(xia)說明進(jin)行DNA核酸(suan)的粗(cu)提。也(ye)可采購(gou)上海澤(ze)葉(ye)生物科(ke)技(ji)有(you)限(xian)公(gong)司(si)生產(chan)的DNA提取(qu)試劑盒(he)(過(guo)柱(zhu)法(fa)-熒(ying)光配套)或(huo)其他(ta)合(he)適的商(shang)業(ye)化產(chan)品(pin)，並(bing)按照(zhao)相(xiang)應試劑盒(he)說明進(jin)行操作(zuo)。
1、液體培養(yang)物：取(qu)液體培養(yang)物100μL加到(dao)1.5mL無菌(jun)離(li)心管中，8000rpm離(li)心3min，盡(jin)量吸棄上清(qing)，加入50μL DNA抽(chou)提(ti)液充分(fen)混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心3min，取上清(qing)5μL進(jin)行PCR反應。
2、固體培養(yang)物：挑(tiao)取單(dan)克隆菌(jun)落與50μL DNA抽(chou)提(ti)液充分(fen)混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心3min，取上清(qing)5μL進(jin)行PCR反應。
3、糞(fen)便樣品(pin)：挑(tiao)取米粒大(da)小(xiao)糞(fen)便於(yu)滅菌離(li)心管中，加入0.5mL生理(li)鹽水，振蕩混(hun)勻，13000rpm離(li)心3分鐘，棄上清(qing)，沈(chen)澱中加入50μL DNA抽(chou)提(ti)液充分(fen)混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心3min取上清(qing)5μL進(jin)行PCR反應。
4、其他(ta)液體標本(ben)：取標(biao)本(ben)2-3mL，13000rpm離(li)心3min，棄上清(qing)，沈(chen)澱中加入50μL DNA抽(chou)提(ti)液充分(fen)混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心3min取上清(qing)5μL進(jin)行PCR反應。
註：陽(yang)性對照(zhao)和陰性對照(zhao)為已(yi)經抽(chou)提(ti)好(hao)的核(he)酸(suan)(無需(xu)提取(qu))，直接取5μL加入到(dao)反應體系(xi)中即可(ke)。由於陽(yang)性對照(zhao)濃(nong)度(du)較高，建(jian)議在(zai)樣品(pin)制(zhi)備(bei)區(qu)域加入陽(yang)性對照(zhao)。 
實驗(yan)流程(cheng)：
1. 整個檢(jian)測(ce)過(guo)程(cheng)應嚴格(ge)按照(zhao)本(ben)說明書要求(qiu)分別(bie)在(zai)試劑準(zhun)備(bei)區(qu)、樣本(ben)處(chu)理(li)區和PCR擴(kuo)增(zeng)區進(jin)行操作(zuo)，各區(qu)實(shi)驗(yan)服(fu)、儀(yi)器 、耗材應獨立(li)使(shi)用(yong)，不(bu)能混(hun)用(yong)；實(shi)驗(yan)用(yong)吸頭(tou)采(cai)用(yong)帶(dai)濾芯吸頭(tou)；樣本(ben)處(chu)理(li)區應配有(you)生物安全櫃(gui)，樣本(ben)處(chu)理(li)在(zai)生物安全櫃(gui)中進(jin)行操作(zuo)；三(san)個區(qu)應該(gai)配有(you)紫(zi)外線(xian)殺菌(jun)裝置。
2. 為避免(mian)RNA降解(jie)，樣本(ben)處(chu)理(li)過(guo)程(cheng)應在(zai)0-4℃條件(jian)下(xia)操作(zuo)，且完(wan)成(cheng)實驗(yan)後(hou)立(li)即(ji)上機(ji)檢(jian)測(ce)；樣本(ben)處(chu)理(li)過(guo)程(cheng)中使(shi)用(yong)的器具耗材應經過(guo)無(wu)核(he)酶(mei)處(chu)理(li)。
3. 每(mei)次(ci)實驗(yan)應該(gai)設置陰、陽(yang)性對照(zhao)。
4. 試劑盒(he)所有(you)試劑在(zai)使(shi)用(yong)前應該(gai)在(zai)常溫下(xia)充分融(rong)化混(hun)勻，並(bing)應瞬時(shi)離(li)心。
5. 試劑盒(he)內所(suo)配陰性和陽(yang)性對照(zhao)在(zai)壹次使(shi)用(yong)前應全部(bu)轉移(yi)至(zhi)標(biao)本(ben)準(zhun)備(bei)區(qu)，並(bing)單(dan)獨存(cun)放。
6. 為防止熒(ying)光幹擾，應避免(mian)裸(luo)手(shou)直接接觸(chu)PCR反應管，並(bing)應避免(mian)在(zai)PCR反應管上進(jin)行任(ren)何(he)標記(ji)。
7. 儀(yi)器 擴(kuo)增(zeng)相(xiang)關參(can)數應按照(zhao)本(ben)說明書相(xiang)關要(yao)求(qiu)進(jin)行設置；不(bu)同批(pi)號(hao)試劑不(bu)能混(hun)用(yong)。
8. ABI系(xi)列熒(ying)光定量PCR儀(yi)參(can)數設置中不(bu)選ROX校正，淬(cui)滅基因選擇None。
9. 實驗(yan)過(guo)程(cheng)中產(chan)品(pin)的廢棄物應該(gai)進(jin)行無(wu)害化處(chu)理(li)後方可丟棄。
儲存(cun)條件(jian)：
14℃或(huo)－20℃樣品(pin)收集、處(chu)理(li)及保(bao)存方(fang)法(fa)
1. 血清(qing)：使(shi)用(yong)不(bu)含熱(re)原(yuan)和內(nei)毒(du)素的試管，操作(zuo)過(guo)程(cheng)中避免(mian)任(ren)何(he)細(xi)胞(bao)刺激，收集血液後，3000 轉離(li)心10 分鐘將血清(qing)和紅(hong)細(xi)胞(bao)迅(xun)速(su)小(xiao)心地分離(li)。
2. 血漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬酸(suan)鹽(yan)或(huo)肝(gan)素抗(kang)凝。3000 轉離(li)心30 分鐘取上清(qing)。
3. 細(xi)胞(bao)上清(qing)液：3000 轉離(li)心10 分鐘去(qu)除顆(ke)粒和聚合(he)物(wu)。
4. 組織勻(yun)漿(jiang)：將(jiang)組織加入適量生理(li)鹽水搗(dao)碎。3000 轉離(li)心10 分鐘取上清(qing)。
5. 保(bao)存：如(ru)果樣本(ben)收集後(hou)不(bu)及時(shi)檢測(ce)，請按壹次用(yong)量分(fen)裝，凍(dong)存於(yu)-20℃，避免(mian)反復(fu)凍(dong)融(rong)，在(zai)室(shi)溫下(xia)解(jie)凍(dong)並(bing)確(que)保(bao)樣品(pin)均(jun)勻地(di)充分(fen)解(jie)凍(dong)。
CDC37 Others Mouse 小(xiao)鼠 CDC37 / CDC37A 桿狀(zhuang)病(bing)毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照(zhao)) 芪(qi)偶氮Stilbazo質量規(gui)格：鋁和(he)其他(ta)金(jin)屬(shu)等(deng)用(yong)分(fen)光(guang)光(guang)度(du)試劑

腮腺細(xi)胞(bao)Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)熒(ying)光鎵試劑(>98.0%(T))Lumogallion 質量規(gui)格：>98.0%(T)

高背(bei)鯽魚尾鰭細(xi)胞(bao);GBJd 人(ren)正常皮(pi)膚(fu)細(xi)胞(bao)，TE 353.Sk細(xi)胞(bao) HO-8910(卵巢癌(ai)細(xi)胞(bao))浴酮(tong)靈二(er)磺酸(suan)二(er)鈉(na)鹽Di Bathocuproinedisulfonate質量規(gui)格：用(yong)於(yu)血液中銅的測(ce)定

人(ren)神經膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞(bao)瘤細(xi)胞(bao);U251水合(he)紅(hong)菲(fei)繞啉(lin)二(er)磺酸(suan)鈉(na)水合(he)物(wu)Bathophenanthrolinedisulfonic Acid Di Salt Hydrate質量規(gui)格：用(yong)於(yu)亞(ya)鐵(tie)離(li)子(zi)的測(ce)定

TNFRSF19 Others Mouse 小(xiao)鼠 TNFRSF19 / OY 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照(zhao)) 浴銅(tong)靈 (升華(hua)提)(>99.0%(HPLC)(T))Bathocuproine (purified by sublimation)質量規(gui)格：>99.0%(HPLC)(T)
PTGS2 Others Human 人(ren) PTGS2 / COX2 / PGHS-2 桿狀(zhuang)病(bing)毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照(zhao)) 7-差向(xiang)紫(zi)杉酚7-epi-Taxol質量規(gui)格：美(mei)國進(jin)口

人(ren)細(xi)胞(bao);C-33ACPaclitaxel C質量規(gui)格：美(mei)國進(jin)口

RAW 264.7細(xi)胞(bao)，單(dan)核巨(ju)噬細(xi)胞(bao)白血病(bing)細(xi)胞(bao) 人(ren)肝細(xi)胞(bao),FL62891細(xi)胞(bao) CL-0216SMMC-7721(人(ren)肝癌(ai)細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×22'-O-(tert-Butyldimethylsilyl)-6α-羥(qiang)基-7-差向(xiang)-紫(zi)衫醇2'-O-(tert-Butyldimethylsilyl)-6α-hydroxy-7-epi-paclitaxel質量規(gui)格：美(mei)國進(jin)口

中國倉(cang)鼠卵巢細(xi)胞(bao)(亞(ya)系(xi)克隆);CHO-HCV-CN-Debenzoyl-7-N-Debenzoyl-7-paclitaxel質量規(gui)格：美(mei)國進(jin)口

P4HB Others Human 人(ren) P4HB / ERBA2L 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照(zhao)) 6α,3'-對二(er)羥(qiang)基6α,3'-p-Dihydroxy Paclitaxel質量規(gui)格：美(mei)國進(jin)口
MGC80-3(MGC-803)人(ren)胃癌(ai)細(xi)胞(bao)馬來(lai)酸（標準(zhun)品(pin)）質(zhi)量規(gui)格：HPLC法(fa)含(han)量測(ce)定Amlodipine maleate

EB病(bing)毒(du)轉化的人(ren)B細(xi)胞(bao);KMY0923 人(ren)腦動脈血管內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)*培養(yang)基 100mL馬來(lai)酸質量規(gui)格：>98%,BRAmlodipine maleate

小(xiao)鼠色素瘤(liu)細(xi)胞(bao);B16-F1（標準(zhun)品(pin)）質(zhi)量規(gui)格：含(han)量測(ce)定Diflunisal

CD80 Others Mouse 小(xiao)鼠 CD80 / B7-1 / CD28LG 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照(zhao)) 丹芝醇B(標準(zhun)品(pin)）質(zhi)量規(gui)格：HPLC≥98%,標準(zhun)品(pin)Gaderol B

LOVO 人(ren)結(jie)腸(chang)癌(ai)細(xi)胞(bao)富勒1提取(qu)物,C60(含約(yue)20%的C70)，球提(ti)取物質量規(gui)格：>70.0%(HPLC)ullerene Extract, C60 (contains ca. 20% C70)
蓮子(zi)心PCR鑒(jian)定試劑盒(he)直銷(xiao)人(ren)腸微(wei)血管內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)物(wu)HIMECL福(fu)氏(shi)不(bu)*佐(zuo)劑shēng huà shì jì容(rong)量：RT250克

EFNA5 Others Cymolgus 食蟹(xie)猴 Ephrin-A5 / EFNA5 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照(zhao)) 姆沙(sha)伯　104 CHROMOSORB 104 3949-0-4

人(ren)神經小(xiao)膠質細(xi)胞(bao)*培養(yang)基 100mL聚乙(yi)二(er)醇 2000 Poly(ethylene glycol) 2,000 (PEG 2000) 25322-68-3 250G 通(tong)用(yong)試劑

MC-3T3細(xi)胞(bao)，小(xiao)鼠前成(cheng)骨細(xi)胞(bao) LoVo(人(ren)結(jie)腸(chang)