PCR鑒(jian)定試(shi)劑盒(he)直(zhi)銷(xiao)

特(te)點：
1. 即開即用(yong)，用(yong)戶(hu)只(zhi)需要(yao)提(ti)供(gong)病毒樣(yang)品。
2. 根(gen)據地(di)黃(huang)保守序(xu)列(lie)設(she)計(ji)的(de)專壹(yi)性引物(wu)，與(yu)相(xiang)關(guan)病毒無(wu)交叉反(fan)應。
3. 靈(ling)敏(min)度(du)可(ke)以(yi)達(da)到(dao)幾百(bai)拷貝/反(fan)應。
4. 壹(yi)管式(shi)熒(ying)光定量(liang) PCR 檢(jian)測(ce)，避(bi)免(mian)後續(xu)汙染(ran)。
5. 本(ben)試(shi)劑盒(he)足夠(gou) 50 次(ci) 20μL 反(fan)應體(ti)系(xi)的熒(ying)光定量(liang) PCR。
6. 本(ben)產(chan)品只(zhi)適用(yong)於(yu)科研，不能用(yong)於(yu)臨床(chuang)診斷(duan)。

使(shi)用(yong)方法：
壹(yi)、樣品采(cai)集：
1、食(shi)品樣(yang)品：樣(yang)品的(de)采(cai)集與(yu)預培(pei)養按照(zhao)樣品的(de)采(cai)集與(yu)預培(pei)養按照(zhao)《食(shi)品衛(wei)生(sheng)微(wei)生(sheng)物學檢(jian)驗阪(ban)崎(qi)腸桿菌檢(jian)驗要(yao)求(qiu)進(jin)行(xing)。
2、血(xue)液樣(yang)品：用(yong)無(wu)菌註射器抽取受檢(jian)者(zhe)靜脈(mai)血2mL，註(zhu)入無(wu)菌EDTA2Na(或(huo)檸(ning)檬(meng)酸(suan)鈉)抗(kang)凝管，立即混(hun)勻。
3、糞便(bian)樣(yang)品：取糞便(bian)置(zhi)於(yu)滅菌的收集管中送(song)檢(jian)。
4、病竈(zao)部(bu)位樣(yang)品：取發(fa)病部位(wei)新鮮(xian)滲(shen)出(chu)物(wu)、粘液膿血送(song)檢(jian)。
壹(yi)、稀釋 PCR 陽性(xing)對照(zhao)（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍(bei)稀釋度(du)為(wei)例(li)）
1. 註(zhu)意：由於(yu)標準品濃度(du)非(fei)常高(gao)，因此(ci)下列(lie)稀釋操(cao)作(zuo)壹(yi)定要(yao)在(zai)獨立的(de)區域(yu)進(jin)行(xing)，千萬(wan)不能汙染樣(yang)品或(huo)本(ben)試(shi)劑盒(he)的其(qi)他(ta)成(cheng)分）。為增(zeng)加產(chan)品穩定性(xing)和避(bi)免(mian)擴散(san)傳(chuan)染性(xing)病原，本(ben)產(chan)品不(bu)提(ti)供(gong)活(huo)體(ti)樣(yang)品做(zuo)陽性(xing)對照(zhao)，只(zhi)提供(gong)可(ke)以(yi)直(zhi)接使(shi)用(yong)的(de) DNA段(duan)作為陽性(xing)對照(zhao)。
2. 標記 6 個(ge)離心管，分別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶芯(xin)槍(qiang)頭(tou)分(fen)別(bie)加入 45 μL 熒(ying)光 PCR 模(mo)板(ban)稀釋液（用(yong)帶芯(xin)槍(qiang)頭(tou)，下同）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管中加(jia)入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的(de)陽性(xing)對照(zhao)，充(chong)分(fen)震蕩 1 分(fen)鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的(de)陽性(xing)對照(zhao)。放冰(bing)上待(dai)用(yong)。
5. 換槍頭，在(zai) 6 號(hao)管中加(jia)入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的(de)陽性(xing)對照(zhao)(上(shang)步稀釋所(suo)得)，充(chong)分(fen)震蕩 1 分(fen)鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的(de)陽性(xing)對照(zhao)。放冰(bing)上待(dai)用(yong)。
6. 換槍頭，在(zai) 5 號(hao)管中加(jia)入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的(de)陽性(xing)對照(zhao)到(dao) 5 號(hao)管中，充(chong)分(fen)震蕩 1 分(fen)鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的(de)陽性(xing)對照(zhao)。放冰(bing)上待(dai)用(yong)。
7. 重復(fu)上面的(de)操(cao)作(zuo)直(zhi)到(dao)得到(dao) 6 個(ge)稀釋度(du)的(de)陽性(xing)對照(zhao)。放冰(bing)上待(dai)用(yong)。
註(zhu)：上述樣品建議(yi)經過(guo)增(zeng)菌後，收集培養(yang)物(wu)用(yong)於(yu)檢(jian)測(ce)。 
二(er)、DNA提(ti)取：
可(ke)采(cai)用(yong)PCR試(shi)劑盒(he)配(pei)備的DNA抽提液，按以(yi)下說明進(jin)行(xing)DNA核(he)酸(suan)的粗(cu)提。也可(ke)采(cai)購(gou)上海澤葉生(sheng)物科技有限公(gong)司(si)生(sheng)產(chan)的(de)DNA提(ti)取試劑(ji)盒(he)(過(guo)柱(zhu)法-熒(ying)光配(pei)套(tao))或(huo)其(qi)他合適的商(shang)業化(hua)產(chan)品，並(bing)按照(zhao)相(xiang)應試(shi)劑盒(he)說明進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo)。
1、液體(ti)培(pei)養物：取液體(ti)培(pei)養物100μL加(jia)到(dao)1.5mL無(wu)菌離心(xin)管中，8000rpm離(li)心3min，盡(jin)量(liang)吸棄(qi)上(shang)清(qing)，加(jia)入50μL DNA抽提液充(chong)分(fen)混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心3min，取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應。
2、固體(ti)培(pei)養物：挑(tiao)取單克隆(long)菌落(luo)與(yu)50μL DNA抽提液充(chong)分(fen)混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心3min，取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應。
3、糞便(bian)樣(yang)品：挑(tiao)取米(mi)粒大(da)小(xiao)糞便(bian)於(yu)滅菌離心(xin)管中，加(jia)入0.5mL生(sheng)理鹽水，振蕩混(hun)勻，13000rpm離(li)心3分(fen)鐘，棄上清(qing)，沈(chen)澱中加入50μL DNA抽提液充(chong)分(fen)混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心3min取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應。
4、其(qi)他液體(ti)標本(ben)：取標本(ben)2-3mL，13000rpm離(li)心3min，棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱中加入50μL DNA抽提液充(chong)分(fen)混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心3min取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應。
註(zhu)：陽性(xing)對照(zhao)和陰性對照(zhao)為已(yi)經(jing)抽提好(hao)的(de)核(he)酸(suan)(無(wu)需提取)，直(zhi)接取5μL加(jia)入到(dao)反應(ying)體(ti)系(xi)中即可(ke)。由(you)於(yu)陽性(xing)對照(zhao)濃度(du)較高，建議(yi)在樣品制(zhi)備區域(yu)加(jia)入陽性(xing)對照(zhao)。 
實(shi)驗流程(cheng)：
1. 整(zheng)個檢(jian)測(ce)過(guo)程(cheng)應(ying)嚴(yan)格按照(zhao)本(ben)說(shuo)明書(shu)要(yao)求(qiu)分別(bie)在試(shi)劑(ji)準備區、樣(yang)本(ben)處(chu)理區和PCR擴(kuo)增區進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo)，各(ge)區實(shi)驗服、儀(yi)器 、耗材(cai)應(ying)獨(du)立使(shi)用(yong)，不(bu)能混(hun)用(yong)；實(shi)驗用(yong)吸(xi)頭(tou)采(cai)用(yong)帶濾(lv)芯(xin)吸(xi)頭(tou)；樣(yang)本(ben)處(chu)理區應(ying)配(pei)有(you)生(sheng)物安全櫃(gui)，樣本(ben)處(chu)理在生(sheng)物安全櫃(gui)中進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo)；三個區(qu)應該配(pei)有(you)紫(zi)外(wai)線(xian)殺菌裝(zhuang)置(zhi)。
2. 為(wei)避(bi)免(mian)RNA降解，樣本(ben)處(chu)理過(guo)程(cheng)應(ying)在(zai)0-4℃條(tiao)件(jian)下操(cao)作(zuo)，且(qie)完(wan)成實(shi)驗後立即上(shang)機(ji)檢(jian)測(ce)；樣本(ben)處(chu)理過(guo)程(cheng)中(zhong)使(shi)用(yong)的(de)器(qi)具(ju)耗材(cai)應(ying)經(jing)過(guo)無(wu)核(he)酶處(chu)理。
3. 每(mei)次實(shi)驗應該設(she)置(zhi)陰、陽性(xing)對照(zhao)。
4. 試(shi)劑盒(he)所有(you)試(shi)劑(ji)在使(shi)用(yong)前(qian)應(ying)該(gai)在(zai)常溫(wen)下充(chong)分(fen)融(rong)化(hua)混(hun)勻，並(bing)應瞬時離心。
5. 試(shi)劑盒(he)內所(suo)配(pei)陰(yin)性和陽性(xing)對照(zhao)在壹(yi)次(ci)使(shi)用(yong)前(qian)應(ying)全(quan)部(bu)轉移至標本(ben)準備區，並(bing)單(dan)獨存(cun)放。
6. 為(wei)防止熒(ying)光幹(gan)擾(rao)，應(ying)避(bi)免(mian)裸手直(zhi)接接觸PCR反(fan)應管，並應(ying)避(bi)免(mian)在PCR反(fan)應管上進(jin)行(xing)任何標記。
7. 儀(yi)器 擴(kuo)增相(xiang)關(guan)參數應按照(zhao)本(ben)說(shuo)明書(shu)相(xiang)關(guan)要(yao)求(qiu)進(jin)行(xing)設(she)置(zhi)；不同批(pi)號試劑不(bu)能混(hun)用(yong)。
8. ABI系(xi)列(lie)熒(ying)光定量(liang)PCR儀(yi)參數設(she)置(zhi)中不(bu)選(xuan)ROX校(xiao)正，淬滅(mie)基(ji)因選(xuan)擇(ze)None。
9. 實(shi)驗過(guo)程(cheng)中(zhong)產(chan)品的(de)廢(fei)棄物(wu)應該進(jin)行(xing)無害化(hua)處(chu)理後方可(ke)丟(diu)棄。
儲(chu)存(cun)條(tiao)件(jian)：
14℃或(huo)－20℃樣(yang)品收集、處(chu)理及(ji)保存(cun)方法
1. 血(xue)清(qing)：使(shi)用(yong)不(bu)含(han)熱(re)原(yuan)和內毒素(su)的(de)試管，操(cao)作(zuo)過(guo)程(cheng)中(zhong)避(bi)免(mian)任何細(xi)胞(bao)刺激(ji)，收集血液後(hou)，3000 轉離心10 分(fen)鐘將(jiang)血(xue)清(qing)和紅細胞迅速小(xiao)心(xin)地(di)分(fen)離。
2. 血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬(meng)酸(suan)鹽或(huo)肝(gan)素(su)抗(kang)凝。3000 轉離心30 分(fen)鐘取上清(qing)。
3. 細(xi)胞上清(qing)液：3000 轉離心10 分(fen)鐘去除顆(ke)粒和聚合物。
4. 組(zu)織勻漿(jiang)：將(jiang)組(zu)織加(jia)入適量(liang)生(sheng)理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分(fen)鐘取上清(qing)。
5. 保存(cun)：如果樣(yang)本(ben)收集後不(bu)及(ji)時檢(jian)測(ce)，請按壹(yi)次用(yong)量(liang)分裝(zhuang)，凍(dong)存(cun)於(yu)-20℃，避(bi)免(mian)反復(fu)凍(dong)融(rong)，在室溫下解凍(dong)並確(que)保樣品均(jun)勻地(di)充(chong)分(fen)解凍(dong)。
小(xiao)鼠胚(pei)胎(tai)成(cheng)纖(xian)維細胞(bao)(MEF)(5×105)羅硝唑(zuo)(標準品)Ronidazole質量(liang)規格(ge)：HPLC>98%,標準品

大(da)鼠骨(gu)髓(sui)瘤(liu)細(xi)胞(bao);IR983F乙(yi)基纖維素(su)Ethyl cellulose質量(liang)規格(ge)：CP

雜(za)交瘤(B類(lei));Z153A2A5B3A12 小(xiao)鼠牙細胞(bao)*培養(yang)基(ji) 100mL維生(sheng)素(su) K1Vitamin K1質量(liang)規格(ge)：>98.0%,油狀

LX-2, 人(ren)肝星(xing)形細胞(bao)株 Human9-氨(an)基米(mi)諾環素(su)鹽(yan)酸(suan)鹽9-Ami-micycline HCl質量(liang)規格(ge)：>97.0%（HPLC）

CTLA4 Others Mouse 小(xiao)鼠 CTLA4 / CD152 人(ren)細胞裂(lie)解液 (陽性(xing)對照(zhao)) 阿法替(ti)尼(ni)Afatinib/BIBW2992質量(liang)規格(ge)：>99%,BR,可(ke)用(yong)於(yu)細胞培養
CD79B Others Rat 大(da)鼠 CD79B / B29 人(ren)細胞裂(lie)解液 (陽性(xing)對照(zhao)) 利(li)谷隆(long)（標準品）質量(liang)規格(ge)：分(fen)析標準品 Linuron

人(ren)呼吸(xi)道(dao)上(shang)皮(pi)細胞*培養(yang)基 100mL苯(ben)噻(sai)草(cao)胺（標準品）質量(liang)規格(ge)：分(fen)析標準品,98.5%Mefenacet

Tca8113-P60細(xi)胞，人舌癌細(xi)胞(bao)系 銅綠(lv)假(jia)單(dan)胞菌 大(da)鼠肝(gan)細(xi)胞(bao);BRL 3A異(yi)質量(liang)規格(ge)：>98%,BRIsonicotinic acid

CCL23 Protein Human 重組(zu)人 CCL23 / MIP 3 蛋(dan)白L-蘋果酸(suan)質量(liang)規格(ge)：>98%,BRL-Malic acid

MLTC-1(小(xiao)鼠間(jian)質細胞(bao)瘤細(xi)胞) 5×106cells/瓶×2 小(xiao)鼠 FGFR2 / CD332 人(ren)細胞裂(lie)解液 (陽性(xing)對照(zhao)) 蛋(dan)白酶K溶(rong)液(20 mg/ml)質量(liang)規格(ge)：20 mg/mlProteinase K Solution, 20 mg/ml
HOB Pellet 人(ren)成骨細胞(bao)團(tuan)塊(kuai) > 1 mio.cells 人(ren)脈絡叢內(nei)皮細胞總RNAHCPEC NAZ-Glu-OHN-BOC-L-谷(gu)酸(suan)25克BR，98%

CL-0010786-O(人(ren)腎透(tou)明細胞癌細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶×2鉍(bi)試劑Ⅰ 1,3,4-Thiadiazole-2,5-dithiol,98% 1072-71-5 5G 通(tong)用(yong)試(shi)劑(ji)

IFNG Others Human 人(ren) IFN-gamma / IFNG / γ-IFN CHO細(xi)胞裂(lie)解液 (陽性(xing)對照(zhao)) 草(cao)甘(gan)膦 Glyphosctq 1071-83-6

肝(gan)細胞生(sheng)長添加物HGSDTT(DL-DITHIOTHREITOL)二(er)硫(liu)蘇糖醇蛋白組(zu)學級白色結(jie)晶粉末(mo)FROZENsigma

牦(mao)牛皮膚細胞(bao);BMU-S1 單(dan)核(he)細胞巨(ju)噬(shi)細胞(bao)，J774A1細(xi)胞 Raji(Butt's 瘤(liu)細胞)105-75-9反(fan)二(er)酸(suan)二(er)丁(ding)酯(zhi)Dibutyl fumarate
PCR鑒(jian)定試(shi)劑盒(he)直(zhi)銷(xiao)Hep 3B2.1-7人(ren)肝癌細(xi)胞(bao) Hep 3B2.1-7 human hepatocarcima cells MEM培(pei)養基(GIBCO)+10%FBS花(hua)寶3號(hao)，英文名或(huo)英(ying)文縮(suo)寫：N-P-K，級別(bie)：生(sheng)物技術級，95%，規格(ge)：1毫(hao)克

血(xue)小(xiao)板(ban)衍(yan)生(sheng)生(sheng)長因子2-1單(dan)聚物 2-Vinylpyridinq

人(ren)肺動脈成(cheng)纖(xian)維細胞(bao) (HPAF)( 5×105 ) RLFs, 大(da)鼠肺(fei)成(cheng)纖(xian)維細胞(bao) RattusTRIS,1.0MSTERILESOLUTION,pH7.0TRIS無(wu)菌溶(rong)液生(sheng)物技術級透(tou)明無色液體(ti)RTsigma

犬(quan)腎細