澤蘭探針法(fa)PCR鑒定(ding)試(shi)劑(ji)盒說明(ming)書(shu)

儲(chu)存條件(jian)：
14℃或－20℃樣(yang)品收(shou)集、處(chu)理(li)及保(bao)存方(fang)法
1. 血清(qing)：使(shi)用不(bu)含(han)熱(re)原和內毒(du)素(su)的試(shi)管，操(cao)作過(guo)程(cheng)中避(bi)免任何細胞刺(ci)激(ji)，收(shou)集血液(ye)後(hou)，3000 轉(zhuan)離心10 分鐘將血清(qing)和紅(hong)細胞(bao)迅速(su)小心地分離。
2. 血漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬酸鹽(yan)或肝素(su)抗(kang)凝。3000 轉(zhuan)離心30 分鐘取上(shang)清(qing)。
3. 細(xi)胞(bao)上(shang)清(qing)液(ye)：3000 轉(zhuan)離心10 分鐘去除(chu)顆粒和聚合物(wu)。
4. 組(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)：將(jiang)組(zu)織(zhi)加入(ru)適量生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)搗(dao)碎。3000 轉(zhuan)離心10 分鐘取上(shang)清(qing)。
5. 保(bao)存：如(ru)果樣(yang)本收(shou)集後(hou)不及時(shi)檢(jian)測，請按(an)壹(yi)次(ci)用量分裝(zhuang)，凍存於-20℃，避(bi)免反復(fu)凍融，在(zai)室溫下解(jie)凍並(bing)確(que)保樣(yang)品均勻(yun)地充(chong)分解(jie)凍。

特(te)點：
1. 即(ji)開即(ji)用，用戶(hu)只(zhi)需(xu)要提供病毒(du)樣(yang)品。
2. 根(gen)據(ju)地黃(huang)保守(shou)序列(lie)設計(ji)的專(zhuan)壹(yi)性引物(wu)，與(yu)相關(guan)病(bing)毒(du)無(wu)交(jiao)叉(cha)反應(ying)。
3. 靈敏(min)度可(ke)以達到(dao)幾(ji)百(bai)拷貝/反(fan)應(ying)。
4. 壹(yi)管(guan)式(shi)熒光定(ding)量 PCR 檢(jian)測，避免後續(xu)汙染。
5. 本(ben)試(shi)劑(ji)盒足夠(gou) 50 次(ci) 20μL 反(fan)應(ying)體系(xi)的熒光定(ding)量 PCR。
6. 本(ben)產(chan)品只(zhi)適用於科研，不能(neng)用於臨床(chuang)診(zhen)斷。

使(shi)用方(fang)法(fa)：
壹(yi)、樣(yang)品采集(ji)：
1、食(shi)品樣(yang)品：樣(yang)品的采(cai)集與(yu)預(yu)培(pei)養(yang)按(an)照樣(yang)品的采(cai)集與(yu)預(yu)培(pei)養(yang)按(an)照《食(shi)品衛(wei)生微(wei)生(sheng)物(wu)學(xue)檢(jian)驗阪(ban)崎腸桿菌檢(jian)驗要(yao)求進行(xing)。
2、血液(ye)樣(yang)品：用無(wu)菌註射器抽取(qu)受(shou)檢(jian)者(zhe)靜(jing)脈血2mL，註(zhu)入(ru)無(wu)菌EDTA2Na(或檸(ning)檬酸鈉(na))抗(kang)凝管，立(li)即混(hun)勻(yun)。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品：取糞(fen)便(bian)置(zhi)於滅菌的收(shou)集管(guan)中送(song)檢(jian)。
4、病(bing)竈(zao)部(bu)位樣(yang)品：取發(fa)病(bing)部(bu)位新(xin)鮮(xian)滲(shen)出(chu)物(wu)、粘(zhan)液(ye)膿(nong)血送(song)檢(jian)。
壹(yi)、稀(xi)釋(shi) PCR 陽(yang)性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍(bei)稀釋(shi)度為例）
1. 註(zhu)意：由(you)於標準品濃(nong)度非(fei)常高，因此(ci)下列稀(xi)釋操(cao)作壹(yi)定(ding)要(yao)在(zai)獨立(li)的區(qu)域(yu)進行(xing)，千萬不(bu)能(neng)汙染樣(yang)品或本(ben)試(shi)劑(ji)盒的其(qi)他(ta)成(cheng)分）。為增(zeng)加產(chan)品穩定(ding)性和避(bi)免擴散傳(chuan)染性病原，本(ben)產品不提供活體樣(yang)品做陽(yang)性對照，只(zhi)提供可(ke)以直(zhi)接(jie)使(shi)用的 DNA段作為陽性對照。
2. 標(biao)記(ji) 6 個(ge)離心管(guan)，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶(dai)芯(xin)槍頭(tou)分別加入(ru) 45 μL 熒光 PCR 模(mo)板(ban)稀釋(shi)液(ye)（用帶(dai)芯(xin)槍頭(tou)，下同）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管(guan)中加入(ru) 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yang)性對照，充(chong)分震(zhen)蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yang)性對照。放(fang)冰(bing)上(shang)待(dai)用。
5. 換(huan)槍頭，在(zai) 6 號(hao)管(guan)中加入(ru) 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yang)性對照(上(shang)步(bu)稀(xi)釋(shi)所得(de))，充(chong)分震(zhen)蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yang)性對照。放(fang)冰(bing)上(shang)待(dai)用。
6. 換(huan)槍頭，在(zai) 5 號(hao)管(guan)中加入(ru) 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yang)性對照到(dao) 5 號(hao)管(guan)中，充(chong)分震(zhen)蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yang)性對照。放(fang)冰(bing)上(shang)待(dai)用。
7. 重復(fu)上(shang)面(mian)的操(cao)作直(zhi)到(dao)得到(dao) 6 個(ge)稀(xi)釋度的陽(yang)性對照。放(fang)冰(bing)上(shang)待(dai)用。
註(zhu)：上(shang)述(shu)樣(yang)品建議(yi)經過(guo)增(zeng)菌後，收(shou)集培(pei)養物(wu)用於檢(jian)測。 
二、DNA提取(qu)：
可(ke)采(cai)用PCR試(shi)劑(ji)盒配備的DNA抽(chou)提液(ye)，按(an)以下說明(ming)進行(xing)DNA核(he)酸的粗(cu)提。也(ye)可(ke)采(cai)購(gou)上(shang)海(hai)澤葉生物(wu)科技有限(xian)公司(si)生(sheng)產的DNA提取(qu)試(shi)劑(ji)盒(過(guo)柱法-熒光配套)或其(qi)他(ta)合適的商(shang)業化(hua)產品，並(bing)按(an)照相應(ying)試(shi)劑(ji)盒說明(ming)進(jin)行(xing)操(cao)作。
1、液(ye)體培(pei)養(yang)物(wu)：取(qu)液(ye)體培(pei)養(yang)物(wu)100μL加到(dao)1.5mL無(wu)菌離心管(guan)中，8000rpm離心3min，盡(jin)量吸(xi)棄(qi)上(shang)清(qing)，加入(ru)50μL DNA抽(chou)提液(ye)充(chong)分混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取(qu)上(shang)清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
2、固(gu)體培(pei)養(yang)物(wu)：挑(tiao)取(qu)單克(ke)隆菌落(luo)與(yu)50μL DNA抽(chou)提液(ye)充(chong)分混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取(qu)上(shang)清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品：挑取(qu)米粒大小糞便(bian)於滅菌離心管(guan)中，加入(ru)0.5mL生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)，振蕩混勻(yun)，13000rpm離心3分鐘，棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)中加入(ru)50μL DNA抽(chou)提液(ye)充(chong)分混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取(qu)上(shang)清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
4、其(qi)他(ta)液體標(biao)本(ben)：取標(biao)本(ben)2-3mL，13000rpm離心3min，棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)中加入(ru)50μL DNA抽(chou)提液(ye)充(chong)分混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取(qu)上(shang)清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
註(zhu)：陽(yang)性對照和陰(yin)性對照為已經抽提好(hao)的核(he)酸(無(wu)需(xu)提取(qu))，直(zhi)接(jie)取5μL加入(ru)到(dao)反應(ying)體系(xi)中即(ji)可(ke)。由(you)於陽性對照濃(nong)度較高(gao)，建議在(zai)樣(yang)品制(zhi)備區(qu)域(yu)加入(ru)陽性對照。 
ENG Others Human 人(ren) Endoglin / CD105 / ENG 人(ren)細胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照) 熊(xiong)果苷(gan)Arbutin質(zhi)量規(gui)格(ge)：≥98%，BR

兔主(zhu)動(dong)脈平(ping)滑(hua)肌(ji)細(xi)胞;CCC-SMC-2氯(lv)化(hua)血根(gen)堿(jian)(標(biao)準(zhun)品)Sanguinarine chloride質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%,標(biao)準(zhun)品

NGFR Others Mouse 小鼠 NGFR / P75 人(ren)細胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照) 亞(ya)麻(ma)木酚(fen)素(su)（標(biao)準(zhun)品）Secoisolariciresil Diglucoside質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品

(含(han)100mL酶(mei)解(jie)緩沖液) 10mL氨基丙二酸Amimalonic acid 質(zhi)量規(gui)格(ge)：≥98%,BR

PK15-EGFP-puro(慢(man)病(bing)毒(du)構(gou)建穩(wen)定(ding)株)豬腎(shen)上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao) PK15-EGFP-puro (leiviral consuct stable sain) porcine kidney epithelial cells EMEM+10%FBS+1%P/S+2ug/ml puromycinAZD4547AZD-4547質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%,FGFR抑(yi)制(zhi)劑(ji)
IFNL3 Others Human 人(ren) IL28B / IL28C / Ierleukin-28B 人(ren)細胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照) 氯(lv)化(hua)（標準(zhun)品）Choline chloride質(zhi)量規(gui)格(ge)：TLC法(fa)檢(jian)查(zha)

鯉(li)魚尾鰭細胞(bao);YZ16靈芝(zhi)酸G(標(biao)準(zhun)品)Gaderic acid G 質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品

NGFR Others Human 人(ren) NGFR / P75 人(ren)細胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照) 6-芐(bian)氨基嘌呤(ling)6-Benzylami purine質(zhi)量規(gui)格(ge)：>99%

I型(xing)膠(jiao)原酶(mei)(含(han)100mL酶(mei)解(jie)緩沖液) 10mL水(shui)(HPLC grade)Water質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC grade

SW579 [SW 579; SW-579]人(ren)甲狀腺鱗癌細(xi)胞 SW579 [SW 579; SW-579] in human thyroid carcima cells L-15培(pei)養(yang)基+10%FBS馬(ma)來(lai)酸,順丁1二酸Maleic acid質(zhi)量規(gui)格(ge)：AR,HPLC>99%
RSC96(大(da)鼠雪旺細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2醋(cu)氯(lv)芬酸(suan)（標準(zhun)品）Aceclofenac質(zhi)量規(gui)格(ge)：UV法(fa)含(han)量測定(ding)

Gibco 10902088 Sf-900 II SFM 1000mlTG101209TG-101209;TG 101209質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%，選(xuan)擇(ze)性JAK2抑(yi)制(zhi)劑(ji)

人(ren)角(jiao)膜(mo)細(xi)胞總RNAHK NA（標(biao)準(zhun)品）Azasetron 質(zhi)量規(gui)格(ge)：含(han)量測定(ding)

小鼠顆粒神(shen)經元(MGC)(1×106)（標(biao)準(zhun)品）Propralol 質(zhi)量規(gui)格(ge)：溶出(chu)度檢(jian)查(zha)

貓(mao)源(yuan)細胞(bao)美(mei)他(ta)多(duo)辛（標(biao)準品）Metadoxine質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC法(fa)含(han)量測定(ding)
澤蘭探針法(fa)PCR鑒定(ding)試(shi)劑(ji)盒說明(ming)書(shu)人(ren)張(zhang)氏(shi)肝細胞(bao);Chang liver二(2-基(ji))二硫，英文名(ming)或英文縮(suo)寫：Allyl disulfide，級(ji)別：BR，98%，規(gui)格(ge)：5克(ke)

SUME-a細(xi)胞(bao)，人(ren)鼻咽癌細(xi)胞系(xi) 大(da)鼠肝癌細(xi)胞,RH-35細(xi)胞(bao) CM-H087人(ren)冠狀動脈內皮(pi)細(xi)胞(bao)*培(pei)養基100mL2-錄三拂(fu)本 99% 2-Chlorobqnzotrifluoridq 88-16-4

P19(小鼠畸胎瘤(liu)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2十三(san)酸(suan)，英文名(ming)或英文縮(suo)寫：Tridecaic acid，級(ji)別：BR，98%，規(gui)格(ge)：5克(ke)

Promocell C-27
實(shi)驗流(liu)程：
1. 整(zheng)個(ge)檢(jian)測過(guo)程(cheng)應(ying)嚴(yan)格(ge)按(an)照本說(shuo)明(ming)書(shu)要(yao)求分別在(zai)試(shi)劑(ji)準備區(qu)、樣(yang)本處(chu)理(li)區(qu)和PCR擴(kuo)增(zeng)區(qu)進(jin)行(xing)操(cao)作，各區(qu)實(shi)驗服(fu)、儀器 、耗(hao)材應(ying)獨立(li)使(shi)用，不(bu)能(neng)混(hun)用；實(shi)驗用吸(xi)頭采(cai)用帶(dai)濾(lv)芯(xin)吸(xi)頭；樣(yang)本處(chu)理(li)區(qu)應(ying)配(pei)有生物(wu)安(an)全(quan)櫃，樣(yang)本處(chu)理(li)在(zai)生(sheng)物(wu)安(an)全(quan)櫃中進(jin)行(xing)操(cao)作；三(san)個(ge)區(qu)應(ying)該(gai)配(pei)有(you)紫(zi)外(wai)線(xian)殺菌裝(zhuang)置。
2. 為避免RNA降(jiang)解(jie)，樣(yang)本處(chu)理(li)過(guo)程(cheng)應(ying)在(zai)0-4℃條件(jian)下操(cao)作，且完(wan)成(cheng)實(shi)驗後(hou)立(li)即上(shang)機(ji)檢(jian)測；樣(yang)本處(chu)理(li)過(guo)程(cheng)中使(shi)用的器(qi)具耗(hao)材應(ying)經過(guo)無(wu)核(he)酶處理(li)。

3. 每(mei)次(ci)實(shi)驗應(ying)該(gai)設置(zhi)陰、陽(yang)性對照。
4. 試(shi)劑(ji)盒所有(you)試(shi)劑(ji)在(zai)使(shi)用前(qian)應(ying)該(gai)在(zai)常(chang)溫下充(chong)分融化混(hun)勻(yun)，並(bing)應(ying)瞬時離心。
5. 試(shi)劑(ji)盒內所配(pei)陰性和陽(yang)性對照在(zai)壹(yi)次(ci)使(shi)用前(qian)應(ying)全(quan)部(bu)轉移(yi)至標本準(zhun)備區(qu)，並(bing)單(dan)獨存放(fang)。
6. 為防止熒光幹擾，應(ying)避(bi)免裸(luo)手(shou)直(zhi)接(jie)接(jie)觸(chu)PCR反(fan)應(ying)管(guan)，並(bing)應(ying)避(bi)免在(zai)PCR反(fan)應(ying)管(guan)上(shang)進(jin)行(xing)任何標記。
7. 儀器 擴(kuo)增(zeng)相關(guan)參(can)數應(ying)按(an)照本說(shuo)明(ming)書(shu)相關(guan)要(yao)求進行(xing)設置(zhi)；不同(tong)批(pi)號(hao)試(shi)劑(ji)不能(neng)混(hun)用。
8. ABI系(xi)列熒光定(ding)量PCR儀參數設置(zhi)中不(bu)選(xuan)ROX校正(zheng)，淬(cui)滅(mie)基因選擇(ze)None。
9. 實(shi)驗過(guo)程(cheng)中產(chan)品的廢(fei)棄(qi)物(wu)應(ying)該(gai)進(jin)行(xing)無(wu)害化(hua)處理(li)後方(fang)可(ke)丟棄(qi)。