狗脊(ji)探(tan)針(zhen)法PCR鑒定試(shi)劑(ji)盒說(shuo)明(ming)書

特點：
1. 即開即用，用戶(hu)只(zhi)需要(yao)提(ti)供(gong)病毒(du)樣(yang)品。
2. 根據(ju)地(di)黃保守(shou)序列(lie)設計的專壹性引物，與(yu)相關病毒(du)無交叉(cha)反(fan)應。
3. 靈敏度可(ke)以(yi)達(da)到幾百拷(kao)貝/反(fan)應。
4. 壹管(guan)式(shi)熒光定(ding)量(liang) PCR 檢(jian)測，避免(mian)後(hou)續(xu)汙(wu)染(ran)。
5. 本(ben)試(shi)劑(ji)盒足夠 50 次 20μL 反(fan)應體系的熒(ying)光定(ding)量(liang) PCR。
6. 本(ben)產品只(zhi)適用於(yu)科研，不能(neng)用於(yu)臨床診斷(duan)。

使用方(fang)法：
壹、樣(yang)品采集：
1、食品樣(yang)品：樣(yang)品的(de)采集與(yu)預培(pei)養(yang)按(an)照(zhao)樣(yang)品的(de)采集與(yu)預培(pei)養(yang)按(an)照(zhao)《食(shi)品衛生微生物學(xue)檢(jian)驗(yan)阪崎腸(chang)桿菌檢(jian)驗(yan)要求進行。
2、血液(ye)樣(yang)品：用無菌註(zhu)射器(qi)抽(chou)取(qu)受檢(jian)者(zhe)靜(jing)脈(mai)血2mL，註入(ru)無菌EDTA2Na(或(huo)檸(ning)檬(meng)酸(suan)鈉)抗(kang)凝(ning)管(guan)，立(li)即混勻。
3、糞便樣(yang)品：取(qu)糞便置(zhi)於(yu)滅菌的(de)收集(ji)管(guan)中(zhong)送檢(jian)。
4、病竈部(bu)位樣(yang)品：取(qu)發(fa)病(bing)部(bu)位新(xin)鮮(xian)滲出(chu)物、粘(zhan)液膿(nong)血(xue)送(song)檢(jian)。
壹、稀(xi)釋(shi) PCR 陽性對(dui)照(zhao)（以(yi) 10E2-10E7 拷(kao)貝/μL 這(zhe) 6 個 10 倍稀(xi)釋(shi)度為(wei)例(li)）
1. 註意(yi)：由(you)於(yu)標準品濃(nong)度非(fei)常(chang)高(gao)，因(yin)此下(xia)列(lie)稀(xi)釋(shi)操作(zuo)壹定要在獨立(li)的區(qu)域(yu)進行，千(qian)萬(wan)不能(neng)汙(wu)染(ran)樣(yang)品或(huo)本(ben)試(shi)劑(ji)盒的(de)其(qi)他成(cheng)分(fen)）。為(wei)增(zeng)加產品穩(wen)定性和避免(mian)擴散(san)傳染(ran)性病原(yuan)，本(ben)產品不提供(gong)活體樣(yang)品做(zuo)陽性對(dui)照(zhao)，只(zhi)提供可(ke)以(yi)直接使用的(de) DNA段作(zuo)為陽性對(dui)照(zhao)。
2. 標記 6 個離(li)心(xin)管(guan)，分(fen)別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭(tou)分(fen)別(bie)加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀(xi)釋(shi)液(ye)（用帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭(tou)，下(xia)同(tong)）。
4. 在 7 號管(guan)中(zhong)加入 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝/μL 的陽性對(dui)照(zhao)，充(chong)分震蕩 1 分鐘(zhong)，得1×10E7 拷(kao)貝/μL 的陽性對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待(dai)用。
5. 換槍(qiang)頭(tou)，在 6 號管(guan)中(zhong)加入 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝/μL 的陽性對(dui)照(zhao)(上(shang)步稀(xi)釋(shi)所(suo)得)，充(chong)分震蕩 1 分鐘(zhong)，得 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的陽性對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待(dai)用。
6. 換槍(qiang)頭(tou)，在 5 號管(guan)中(zhong)加入 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的陽性對(dui)照(zhao)到 5 號管(guan)中(zhong)，充(chong)分震蕩 1 分鐘(zhong)，得 1×10E5 拷(kao)貝/μL 的陽性對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待(dai)用。
7. 重(zhong)復上(shang)面(mian)的(de)操作(zuo)直到得到 6 個稀(xi)釋(shi)度的(de)陽性對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待(dai)用。
註：上(shang)述(shu)樣(yang)品建(jian)議經過(guo)增(zeng)菌(jun)後(hou)，收集(ji)培(pei)養(yang)物用於(yu)檢(jian)測。 
二、DNA提取(qu)：
可(ke)采用PCR試(shi)劑(ji)盒配(pei)備的(de)DNA抽(chou)提(ti)液，按以(yi)下說(shuo)明(ming)進(jin)行DNA核酸的(de)粗提(ti)。也(ye)可(ke)采購上(shang)海(hai)澤(ze)葉(ye)生物科(ke)技有限公(gong)司生產的DNA提取(qu)試(shi)劑(ji)盒(過柱(zhu)法-熒光配(pei)套)或(huo)其(qi)他合(he)適的(de)商業化(hua)產品，並(bing)按照相(xiang)應試(shi)劑(ji)盒說(shuo)明(ming)進(jin)行操作(zuo)。
1、液體培養(yang)物：取(qu)液體培養(yang)物100μL加到1.5mL無菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，8000rpm離心(xin)3min，盡量(liang)吸(xi)棄(qi)上(shang)清(qing)，加入50μL DNA抽(chou)提(ti)液充(chong)分混勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取上(shang)清(qing)5μL進行PCR反(fan)應。
2、固(gu)體培養(yang)物：挑(tiao)取單克隆菌落(luo)與(yu)50μL DNA抽(chou)提(ti)液充(chong)分混勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取上(shang)清(qing)5μL進行PCR反(fan)應。
3、糞便樣(yang)品：挑(tiao)取米粒(li)大(da)小(xiao)糞便於(yu)滅菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，加入0.5mL生理鹽水(shui)，振(zhen)蕩混勻，13000rpm離心(xin)3分鐘(zhong)，棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱中加入50μL DNA抽(chou)提(ti)液充(chong)分混勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取上(shang)清(qing)5μL進行PCR反(fan)應。
4、其(qi)他液(ye)體標本(ben)：取(qu)標(biao)本(ben)2-3mL，13000rpm離心(xin)3min，棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱中加入50μL DNA抽(chou)提(ti)液充(chong)分混勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取上(shang)清(qing)5μL進行PCR反(fan)應。
註：陽性對(dui)照(zhao)和(he)陰性對(dui)照(zhao)為(wei)已經抽(chou)提(ti)好(hao)的(de)核酸(無需提(ti)取(qu))，直接取(qu)5μL加入到反(fan)應體系中即(ji)可(ke)。由(you)於(yu)陽性對(dui)照(zhao)濃(nong)度較(jiao)高(gao)，建(jian)議在樣(yang)品制(zhi)備區域(yu)加入陽性對(dui)照(zhao)。 
實(shi)驗(yan)流(liu)程：
1. 整(zheng)個(ge)檢(jian)測過程應嚴格按照本(ben)說(shuo)明(ming)書要(yao)求(qiu)分(fen)別(bie)在試(shi)劑(ji)準備(bei)區(qu)、樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)區和PCR擴增(zeng)區(qu)進行操作(zuo)，各(ge)區(qu)實(shi)驗(yan)服(fu)、儀器(qi) 、耗材應獨立(li)使用，不能(neng)混用；實(shi)驗(yan)用吸(xi)頭(tou)采用帶(dai)濾芯(xin)吸(xi)頭(tou)；樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)區應配有生物安(an)全櫃(gui)，樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)在生物安(an)全櫃(gui)中(zhong)進行操作(zuo)；三個(ge)區應該(gai)配(pei)有紫外線殺(sha)菌(jun)裝置(zhi)。
2. 為避免(mian)RNA降(jiang)解(jie)，樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)過程應在0-4℃條件(jian)下操作(zuo)，且完(wan)成(cheng)實(shi)驗(yan)後(hou)立(li)即(ji)上(shang)機(ji)檢(jian)測；樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)過程中使用的(de)器(qi)具(ju)耗材應經過(guo)無核酶處(chu)理(li)。
3. 每(mei)次(ci)實(shi)驗(yan)應該(gai)設(she)置(zhi)陰、陽性對(dui)照(zhao)。
4. 試(shi)劑(ji)盒所(suo)有試(shi)劑(ji)在使用前(qian)應該(gai)在常溫(wen)下(xia)充(chong)分融(rong)化(hua)混勻，並(bing)應瞬(shun)時離(li)心(xin)。
5. 試(shi)劑(ji)盒內(nei)所(suo)配陰性和陽性對(dui)照(zhao)在壹次使用前(qian)應全部(bu)轉移(yi)至標(biao)本(ben)準備(bei)區(qu)，並單獨存(cun)放。
6. 為防(fang)止(zhi)熒光幹擾，應避免(mian)裸手(shou)直接接觸(chu)PCR反(fan)應管(guan)，並(bing)應避免(mian)在PCR反(fan)應管(guan)上(shang)進(jin)行任(ren)何(he)標(biao)記。
7. 儀器(qi) 擴增(zeng)相(xiang)關參數(shu)應按照本(ben)說(shuo)明(ming)書相(xiang)關(guan)要(yao)求進行設置(zhi)；不同批號試(shi)劑(ji)不能(neng)混用。
8. ABI系列(lie)熒光定(ding)量(liang)PCR儀參數(shu)設置(zhi)中(zhong)不選(xuan)ROX校正，淬滅基(ji)因(yin)選(xuan)擇(ze)None。
9. 實(shi)驗(yan)過程中產品的(de)廢棄(qi)物應該(gai)進(jin)行無害化(hua)處(chu)理(li)後(hou)方(fang)可(ke)丟(diu)棄(qi)。
儲存(cun)條件(jian)：
14℃或(huo)－20℃樣(yang)品收集(ji)、處(chu)理(li)及(ji)保存方法
1. 血清(qing)：使用不含(han)熱(re)原(yuan)和(he)內(nei)毒(du)素(su)的試(shi)管(guan)，操作(zuo)過程中避免(mian)任(ren)何(he)細(xi)胞(bao)刺(ci)激，收集(ji)血(xue)液後(hou)，3000 轉離(li)心(xin)10 分鐘(zhong)將血清(qing)和紅(hong)細(xi)胞(bao)迅(xun)速小(xiao)心(xin)地(di)分(fen)離(li)。
2. 血漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬(meng)酸(suan)鹽(yan)或(huo)肝素(su)抗(kang)凝(ning)。3000 轉離(li)心(xin)30 分鐘(zhong)取(qu)上(shang)清(qing)。
3. 細(xi)胞(bao)上(shang)清(qing)液：3000 轉離(li)心(xin)10 分鐘(zhong)去(qu)除顆粒(li)和(he)聚(ju)合(he)物。
4. 組織(zhi)勻(yun)漿(jiang)：將組織(zhi)加入適量(liang)生理鹽水(shui)搗碎(sui)。3000 轉離(li)心(xin)10 分鐘(zhong)取(qu)上(shang)清(qing)。
5. 保存：如果樣(yang)本(ben)收集(ji)後(hou)不及(ji)時(shi)檢(jian)測，請(qing)按(an)壹次用量(liang)分裝，凍(dong)存(cun)於(yu)-20℃，避免(mian)反(fan)復凍融(rong)，在室溫(wen)下(xia)解(jie)凍並(bing)確保樣(yang)品均(jun)勻地(di)充(chong)分解(jie)凍。
CHL1 Others Mouse 小鼠(shu) CHL-1 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽性對(dui)照(zhao)) 頭(tou)孢(bao)磺啶鈉Cefsulodine 質(zhi)量(liang)規格：Cefsulodine> 864μg /mg,BR

CM-R106大(da)鼠(shu)神(shen)經膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞(bao)*培(pei)養(yang)基(ji)100mL鄰苯(ben)二o-Phthalaldehyde質(zhi)量(liang)規格：>97%,BR

KYSR450細(xi)胞(bao)，人(ren)食管(guan)癌(ai)細(xi)胞(bao) 人(ren)XG惡性膠質(zhi)瘤(liu)細(xi)胞(bao),SF-295細(xi)胞(bao) 豬(zhu)靜(jing)脈(mai)血管(guan)內(nei)皮細(xi)胞(bao);ZYM-SVEC01醋(cu)酸美(mei)倫孕(yun)酮; 甲1雌醇乙酸(suan)酯(zhi)Melengestrol acetate質(zhi)量(liang)規格：USP

CHL(倉鼠(shu)肺細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×2膽(dan)酯酶(mei);膽(dan)甾醇酯酶Cholesterol esterase 質(zhi)量(liang)規格：>300 U/mg,進分(fen)

CD27 Others Human 人(ren) CD27 / TNFRSF7 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽性對(dui)照(zhao)) 1,9-吡唑並(bing)蒽(en)酮(tong);SP600125SP600125質(zhi)量(liang)規格：HPLC>98%,進分(fen),JNK抑制劑(ji)
PADI4 Others Human 人(ren) PAD4 / PADI4 桿狀病(bing)毒(du)-昆蟲(chong)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽性對(dui)照(zhao)) L-乙酯(zhi)鹽(yan)酸(suan)鹽H-Leu-OEt·HCl質(zhi)量(liang)規格：>98%

615小鼠(shu)癌(ai)瘤(liu)株(zhu);Ca763L-苯(ben)乙酯(zhi)鹽(yan)酸(suan)鹽H-Phe-OEt.HCl質(zhi)量(liang)規格：>98%,BR

MC3T3-E1 Subclone 14細(xi)胞(bao)，小(xiao)鼠(shu)原成(cheng)骨細(xi)胞(bao) 人(ren)肝癌(ai)細(xi)胞(bao)系,LM-6細(xi)胞(bao) CL-0112HMy2.CIR(人(ren)B母細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶×2乙酯(zhi)鹽(yan)酸(suan)鹽Glycine ethyl ester 質(zhi)量(liang)規格：>98%,BR

中國(guo)倉鼠(shu)肺細(xi)胞(bao);CHLL-蛋氨(an)酸(suan)乙酯(zhi)鹽(yan)酸(suan)鹽;L-乙酯(zhi)鹽(yan)酸(suan)鹽L-Mine ethyl ester 質(zhi)量(liang)規格：>98%(T),BR

TNFRSF1A Others Human 人(ren) TNFRSF1A / TNFRI / CD120a 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽性對(dui)照(zhao)) L-乙酯(zhi)鹽(yan)酸(suan)鹽L-Tyrosine ethyl ester  質(zhi)量(liang)規格：0.98
大(da)鼠(shu)成纖(xian)維細(xi)胞(bao)*培(pei)養(yang)基(ji) 100mL表木栓醇（標準品）質(zhi)量(liang)規格：鑒別(bie)FRIEDELAN-3BETA-OL

Lec1倉鼠(shu)卵巢細(xi)胞(bao) Lec1 Chinese hamster ovary cells MEMα培養(yang)基(ji)(GIBCO)+10%FBS老(lao)龍(long)皮酸；網脊(ji)衣酸 A（標準品）質(zhi)量(liang)規格：鑒別(bie)用(4S)-2α,3β-Dihydroxy-D:C-friedo-B':A'-neogammacer-9(11)-en-23-oic acid

IGFBP5 Protein Canine 重(zhong)組狗 IGFBP5 / IGFBP-5 蛋白(bai) (Fc 標簽(qian))焦性沒食(shi)子酸（標準品）質(zhi)量(liang)規格：含(han)量測定Pyrogallol

EB (NBL-4) (牛(niu)胚(pei)氣(qi)管(guan)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 大(da)鼠(shu)垂體細(xi)胞(bao)RPC正十(shi)九烷(wan)（標(biao)準品）質(zhi)量(liang)規格：內(nei)標(biao) N-NONADECANE

胰腺(xian)導管(guan)上(shang)皮細(xi)胞(bao)Many types of cells包(bao)裝：5 × 105方(1ml)木蝴(hu)蝶苷(gan)B（標準品）質(zhi)量(liang)規格：HPLC≥98%，標準品Oroxin B
狗脊(ji)探(tan)針(zhen)法PCR鑒定試(shi)劑(ji)盒說(shuo)明(ming)書小鼠(shu)漿(jiang)細(xi)胞(bao)瘤(liu);MPC-11HRP標記羊抗(kang)人(ren)纖維蛋白(bai)shēng huà shì jì容(rong)量(liang)：RT2000只(zhi)/箱

PDGFRB Others Human 人(ren) CD140b / PDGFRB 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液 (陽性對(dui)照(zhao)) 鱗(lin)晴基(ji)P4-t-Bu四拂硼醋(cu)鹽 ≥97.0% (NMR) 1-TqRT-BUTYL-4,4,4-TRIS(DIMqTHYLcMINO)-2,2-BIS[TRIS(DIMqTHYLcMINO) PHOSPHORcNYLIDq-NcMINO]-2LcMBDc5,4LcMBDc5-CcTqNcDI(PH