蓮子心染(ran)料法PCR鑒定試劑(ji)盒(he)保(bao)存

特(te)點：
1. 即開(kai)即用，用戶只(zhi)需(xu)要(yao)提供病毒(du)樣品。
2. 根(gen)據(ju)地黃保守序(xu)列設(she)計的專壹(yi)性引(yin)物(wu)，與(yu)相(xiang)關(guan)病(bing)毒(du)無交(jiao)叉反(fan)應(ying)。
3. 靈(ling)敏度(du)可(ke)以(yi)達(da)到幾百(bai)拷(kao)貝/反(fan)應(ying)。
4. 壹(yi)管(guan)式(shi)熒光定量(liang) PCR 檢(jian)測，避(bi)免(mian)後續(xu)汙染。
5. 本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)足(zu)夠 50 次 20μL 反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)的(de)熒光定量(liang) PCR。
6. 本(ben)產(chan)品(pin)只(zhi)適用於科研(yan)，不(bu)能用於臨(lin)床(chuang)診斷。

使(shi)用方(fang)法：
壹(yi)、樣品采(cai)集(ji)：
1、食(shi)品樣品：樣品的采(cai)集(ji)與(yu)預培(pei)養(yang)按(an)照(zhao)樣品的采(cai)集(ji)與(yu)預培(pei)養(yang)按(an)照(zhao)《食(shi)品衛(wei)生(sheng)微(wei)生(sheng)物(wu)學(xue)檢(jian)驗阪崎腸(chang)桿(gan)菌(jun)檢(jian)驗要(yao)求進行(xing)。
2、血(xue)液(ye)樣品：用無菌(jun)註(zhu)射器抽(chou)取(qu)受檢(jian)者靜脈(mai)血(xue)2mL，註(zhu)入(ru)無菌(jun)EDTA2Na(或(huo)檸檬(meng)酸(suan)鈉(na))抗(kang)凝(ning)管(guan)，立(li)即混勻。
3、糞(fen)便(bian)樣品：取糞便(bian)置(zhi)於滅菌的收(shou)集(ji)管中送(song)檢(jian)。
4、病(bing)竈(zao)部位(wei)樣品：取發病部位(wei)新鮮滲出物(wu)、粘(zhan)液(ye)膿(nong)血送(song)檢(jian)。
壹(yi)、稀(xi)釋(shi) PCR 陽(yang)性對(dui)照(zhao)（以 10E2-10E7 拷(kao)貝/μL 這 6 個 10 倍(bei)稀(xi)釋(shi)度(du)為(wei)例(li)）
1. 註(zhu)意：由於標準(zhun)品(pin)濃(nong)度(du)非(fei)常高，因(yin)此(ci)下(xia)列稀(xi)釋(shi)操作壹(yi)定要在(zai)獨(du)立(li)的(de)區域進行(xing)，千萬(wan)不(bu)能汙染樣品或本試(shi)劑(ji)盒(he)的(de)其(qi)他(ta)成(cheng)分）。為(wei)增(zeng)加產(chan)品(pin)穩(wen)定性和避(bi)免(mian)擴(kuo)散傳(chuan)染性病原(yuan)，本(ben)產(chan)品(pin)不(bu)提供活體(ti)樣品做(zuo)陽(yang)性對(dui)照(zhao)，只(zhi)提供可(ke)以(yi)直(zhi)接(jie)使(shi)用的 DNA段(duan)作(zuo)為(wei)陽(yang)性對(dui)照(zhao)。
2. 標(biao)記 6 個離心管(guan)，分別(bie)為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別(bie)加入(ru) 45 μL 熒光 PCR 模板(ban)稀釋(shi)液(ye)（用帶芯槍頭，下(xia)同(tong)）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管(guan)中加入(ru) 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照(zhao)，充分震蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得1×10E7 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待用。
5. 換槍頭，在(zai) 6 號(hao)管(guan)中加入(ru) 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照(zhao)(上(shang)步(bu)稀釋(shi)所(suo)得(de))，充分震蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待用。
6. 換槍頭，在(zai) 5 號(hao)管(guan)中加入(ru) 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照(zhao)到 5 號(hao)管(guan)中，充分震蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得 1×10E5 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待用。
7. 重(zhong)復(fu)上(shang)面的操作直到得到 6 個稀釋(shi)度(du)的(de)陽性對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待用。
註(zhu)：上述(shu)樣品建議(yi)經(jing)過(guo)增(zeng)菌後，收(shou)集(ji)培(pei)養(yang)物(wu)用於檢(jian)測。 
二(er)、DNA提取：
可(ke)采(cai)用PCR試(shi)劑(ji)盒(he)配(pei)備(bei)的DNA抽(chou)提液，按(an)以(yi)下(xia)說(shuo)明進行(xing)DNA核(he)酸(suan)的粗(cu)提。也可(ke)采(cai)購上海澤(ze)葉(ye)生(sheng)物(wu)科技(ji)有限公司生(sheng)產(chan)的(de)DNA提取試劑(ji)盒(he)(過(guo)柱法(fa)-熒光配(pei)套(tao))或(huo)其(qi)他(ta)合(he)適(shi)的(de)商業(ye)化(hua)產(chan)品(pin)，並按(an)照(zhao)相應(ying)試(shi)劑(ji)盒(he)說(shuo)明(ming)進行(xing)操作。
1、液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)：取(qu)液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)100μL加到1.5mL無菌(jun)離心管(guan)中(zhong)，8000rpm離心3min，盡(jin)量(liang)吸棄上(shang)清，加入(ru)50μL DNA抽(chou)提液充分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心3min，取(qu)上(shang)清5μL進行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
2、固(gu)體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)：挑(tiao)取單(dan)克(ke)隆(long)菌落與(yu)50μL DNA抽(chou)提液充分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心3min，取(qu)上(shang)清5μL進行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
3、糞(fen)便(bian)樣品：挑(tiao)取米(mi)粒(li)大(da)小糞便(bian)於滅菌離心管(guan)中(zhong)，加入(ru)0.5mL生(sheng)理鹽水(shui)，振蕩(dang)混(hun)勻(yun)，13000rpm離心3分鐘(zhong)，棄上(shang)清，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加入(ru)50μL DNA抽(chou)提液充分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心3min取(qu)上(shang)清5μL進行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
4、其(qi)他(ta)液(ye)體(ti)標(biao)本(ben)：取標(biao)本2-3mL，13000rpm離心3min，棄上(shang)清，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加入(ru)50μL DNA抽(chou)提液充分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心3min取(qu)上(shang)清5μL進行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
註(zhu)：陽性對(dui)照(zhao)和陰性對(dui)照(zhao)為(wei)已(yi)經(jing)抽提好的核(he)酸(suan)(無需(xu)提取)，直(zhi)接(jie)取5μL加入(ru)到反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)中(zhong)即可(ke)。由(you)於陽性對(dui)照(zhao)濃度(du)較(jiao)高，建(jian)議(yi)在(zai)樣品制備(bei)區域加入(ru)陽性對(dui)照(zhao)。 
實驗流程：
1. 整個檢(jian)測過(guo)程(cheng)應嚴格按(an)照(zhao)本說(shuo)明(ming)書(shu)要(yao)求分別(bie)在試(shi)劑(ji)準(zhun)備(bei)區、樣本處理區和(he)PCR擴(kuo)增(zeng)區進行(xing)操作，各(ge)區實驗服、儀(yi)器(qi) 、耗(hao)材應(ying)獨立(li)使(shi)用，不能混用；實驗用吸頭(tou)采(cai)用帶濾芯吸(xi)頭(tou)；樣本處理區應(ying)配(pei)有生(sheng)物(wu)安(an)全(quan)櫃，樣本處理在(zai)生(sheng)物(wu)安(an)全(quan)櫃中進行(xing)操作；三個區應(ying)該(gai)配(pei)有紫(zi)外(wai)線殺(sha)菌裝置。
2. 為(wei)避(bi)免(mian)RNA降(jiang)解(jie)，樣本處理過(guo)程(cheng)應在0-4℃條(tiao)件(jian)下操作，且(qie)完(wan)成(cheng)實驗後立(li)即上機檢(jian)測；樣本處理過(guo)程(cheng)中使(shi)用的器(qi)具(ju)耗(hao)材應(ying)經(jing)過(guo)無核(he)酶處理。
3. 每次實驗應該設(she)置(zhi)陰、陽性對(dui)照(zhao)。
4. 試(shi)劑(ji)盒(he)所(suo)有試劑(ji)在使(shi)用前應(ying)該(gai)在常溫下充分融(rong)化(hua)混勻，並應(ying)瞬(shun)時離心。
5. 試(shi)劑(ji)盒(he)內(nei)所配(pei)陰性和陽(yang)性對(dui)照(zhao)在壹(yi)次使(shi)用前應(ying)全(quan)部轉移(yi)至標本(ben)準(zhun)備(bei)區，並單(dan)獨(du)存放。
6. 為(wei)防(fang)止熒光幹擾，應(ying)避(bi)免(mian)裸(luo)手(shou)直(zhi)接(jie)接觸PCR反(fan)應(ying)管(guan)，並應(ying)避(bi)免(mian)在(zai)PCR反(fan)應(ying)管(guan)上(shang)進行(xing)任何(he)標(biao)記。
7. 儀(yi)器(qi) 擴(kuo)增(zeng)相關(guan)參(can)數(shu)應按(an)照(zhao)本說(shuo)明(ming)書(shu)相(xiang)關(guan)要(yao)求進行(xing)設置(zhi)；不(bu)同(tong)批號(hao)試(shi)劑(ji)不能混用。
8. ABI系(xi)列熒光定量(liang)PCR儀(yi)參(can)數(shu)設置(zhi)中不(bu)選ROX校正，淬(cui)滅基(ji)因(yin)選擇(ze)None。
9. 實驗過(guo)程(cheng)中產(chan)品(pin)的(de)廢棄物(wu)應(ying)該(gai)進行(xing)無害(hai)化(hua)處理後方(fang)可(ke)丟棄。
儲(chu)存條件(jian)：
14℃或(huo)－20℃樣品收(shou)集(ji)、處理及(ji)保(bao)存方(fang)法
1. 血(xue)清：使(shi)用不含熱(re)原(yuan)和(he)內(nei)毒(du)素的試(shi)管(guan)，操作過(guo)程(cheng)中避免(mian)任(ren)何(he)細胞(bao)刺激(ji)，收(shou)集(ji)血液後，3000 轉(zhuan)離心10 分鐘(zhong)將血清和(he)紅細胞(bao)迅速小(xiao)心地分離。
2. 血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸檬(meng)酸(suan)鹽或肝素(su)抗(kang)凝(ning)。3000 轉(zhuan)離心30 分鐘(zhong)取上(shang)清。
3. 細胞(bao)上(shang)清液(ye)：3000 轉(zhuan)離心10 分鐘(zhong)去除顆(ke)粒(li)和聚(ju)合(he)物(wu)。
4. 組(zu)織(zhi)勻漿：將組(zu)織(zhi)加入(ru)適量(liang)生(sheng)理鹽水(shui)搗(dao)碎(sui)。3000 轉(zhuan)離心10 分鐘(zhong)取上(shang)清。
5. 保(bao)存：如果(guo)樣本收(shou)集(ji)後不及(ji)時檢(jian)測，請(qing)按(an)壹(yi)次用量(liang)分裝，凍(dong)存於-20℃，避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融，在室溫(wen)下(xia)解(jie)凍(dong)並確保(bao)樣品均勻地充分解(jie)凍(dong)。
山(shan)羊(yang)皮(pi)膚(fu)細胞(bao);WGS1Olealic acid質量(liang)規格：HPLC≥95%，BR

CAMK4 Others Mouse 小(xiao)鼠 CAMK4 / CaMKIV 桿(gan)狀(zhuang)病毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對(dui)照(zhao)) (高98%）Olealic acid質量(liang)規格：HPLC≥98%，BR

CL-0137NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Sain L](小(xiao)鼠成(cheng)纖(xian)維(wei)5×106cells/瓶(ping)×2(標(biao)準(zhun)品(pin)）Olealic acid質量(liang)規格：HPLC≥98%,標(biao)準(zhun)品(pin)

HGC-27人(ren)胃(wei)癌細胞(bao) 細胞(bao)，HelaS3細胞(bao) ES-2(卵(luan)巢透(tou)明(ming)細胞(bao)癌(ai)細胞(bao))莽草酸(suan)Shikimic acid質量(liang)規格：≥98%,BR

人(ren)小(xiao)細胞(bao)肺(fei)癌(ai);NCI-H2227莽草酸(suan)(標(biao)準(zhun)品(pin))Shikimic acid質量(liang)規格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)
過(guo)氧(yang)化(hua)物(wu)酶(mei)分析(xi)試劑(ji)盒(he)GPX7-差(cha)向(xiang) 10-去(qu)乙(yi)酰基(ji)紫(zi)衫醇(chun)7-Epi 10-Desacetyl Paclitaxel質量(liang)規格：美(mei)國(guo)進口(kou)

TLK2 Others Human 人(ren) TLK2 / PKU-ALPHA (aa 397-772 ) 桿(gan)狀(zhuang)病毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對(dui)照(zhao)) (S,S)-帕洛(luo)諾司(si)瓊(qiong)鹽酸(suan)鹽-d4(S,S)-Palosetron  Labeled d4質量(liang)規格：美(mei)國(guo)進口(kou)

人(ren)結(jie)直腸(chang)腺(xian)癌(ai)細胞(bao);COLO 320DM [COLO320DM]2'-O-(2-甲氧(yang)乙基(ji)）腺苷2'-O-(2-Methoxyethyl)adesine質量(liang)規格：美(mei)國(guo)進口(kou)

CBRH-7919細胞(bao)，肝癌(ai)細胞(bao) 人(ren)未分化(hua)胃癌細胞(bao),HGC-27細胞(bao) 牛(niu)陀螺(luo)狀(zhuang)細胞(bao);BT(S)-腺(xian)苷，環(huan)3',5'-（氫(qing)化(hua)硫代1酸(suan)酯）三(san)乙基(ji)胺(an)(S)-Adesine, cyclic 3',5'-(hydrogenphosphorothioate) triethylammonium 質量(liang)規格：美(mei)國(guo)進口(kou)

tTA基(ji)因(yin)修(xiu)飾(shi)的小(xiao)鼠胰腺癌細胞(bao)(B類(lei));Pan02-CAG-tTA-4C52'-脫(tuo)氧(yang)-β-L-腺(xian)苷2'-Deoxy-β-L-adesine  質量(liang)規格：美(mei)國(guo)進口(kou)
MFC-GFP(小(xiao)鼠前(qian)胃癌(ai)細胞(bao)(綠(lv)色(se)熒光蛋白(bai)標記)) 5×106cells/瓶(ping)×2噻(sai)奈(nai)普汀(ting)酸(suan);噻(sai)奈(nai)普汀(ting)質量(liang)規格：>98%,BRTianeptine

B16(小(xiao)鼠色(se)素瘤(liu)細胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 CM-R107大(da)鼠海(hai)馬神(shen)經(jing)元(yuan)細胞(bao)*培(pei)養(yang)基(ji)100mL EB病(bing)毒(du)轉化(hua)的人B細胞(bao);KMY0920噻(sai)奈(nai)普汀(ting)酸(suan);噻(sai)奈(nai)普汀(ting)(標(biao)準(zhun)品(pin))質量(liang)規格：HPLC>99%,標(biao)準(zhun)品(pin)Tianeptine

CM-H031人(ren)食(shi)管上(shang)皮細胞(bao)*培(pei)養(yang)基(ji)100mL醋(cu)酸(suan)恩夫韋地 質量(liang)規格：BR,>98%Enfuvirtide Acetate

B18R Others Vaccinia Virus 牛(niu)痘(dou)病毒(du) B18R / B19R 桿(gan)狀(zhuang)病毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對(dui)照(zhao)) D-海(hai)藻糖(tang)無水(shui)質量(liang)規格：≥99%,BRD-(+)-Trehalose Anhydrous

平(ping)滑(hua)肌細胞(bao)Many types of cells包(bao)裝：5 × 105方(fang)(1ml)二(er)醋(cu)酸(suan)(LH-RH)質量(liang)規格：>98%,二(er)醋(cu)酸(suan)鹽Gonadorelin Acetate
蓮(lian)子心染(ran)料法PCR鑒(jian)定試劑(ji)盒(he)保(bao)存ECE2 Others Human 人(ren) ECE-2 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對(dui)照(zhao)) 2-溴(xiu)芴(wu)(>98.0%(GC))質量(liang)規格：>98.0%(GC)2-Bromofluorene

人(ren)正常前列腺(xian)上皮(pi)細胞(bao);RWPE-12-溴(xiu)-9-芴(wu)酮(>96.0%(GC))質量(liang)規格：>96.0%(GC)2-Bromo-9-fluorene

人(ren)肺(fei)動(dong)脈(mai)內(nei)皮細胞(bao)(HPAEC) ( 5×105 )2-溴(xiu)-9,9-二(er)甲基(ji)芴(wu)(>98.0%(GC))質量(liang)規格：>98.0%(GC)2-Bromo-9,9-dimethylfluorene

CL-0