巴(ba)戟(ji)天探(tan)針法PCR鑒定試劑盒保(bao)存

儲存條(tiao)件(jian)：
14℃或(huo)－20℃樣(yang)品收集(ji)、處理及保(bao)存方(fang)法(fa)
1. 血(xue)清(qing)：使用不含(han)熱(re)原和內(nei)毒素(su)的(de)試管，操(cao)作(zuo)過(guo)程中避(bi)免(mian)任(ren)何(he)細(xi)胞(bao)刺(ci)激，收(shou)集(ji)血液後(hou)，3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)將(jiang)血(xue)清(qing)和紅(hong)細(xi)胞(bao)迅速(su)小心(xin)地(di)分離。
2. 血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬(meng)酸鹽或(huo)肝(gan)素(su)抗(kang)凝。3000 轉(zhuan)離心(xin)30 分(fen)鐘(zhong)取(qu)上(shang)清(qing)。
3. 細(xi)胞(bao)上清(qing)液：3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)去(qu)除顆(ke)粒和(he)聚合物。
4. 組(zu)織勻(yun)漿(jiang)：將組(zu)織加(jia)入(ru)適(shi)量生理鹽(yan)水(shui)搗(dao)碎。3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)取(qu)上(shang)清(qing)。
5. 保(bao)存：如果樣(yang)本(ben)收集(ji)後不(bu)及時檢測(ce)，請按壹次(ci)用量分裝(zhuang)，凍存於(yu)-20℃，避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍融，在(zai)室(shi)溫(wen)下解凍並確保(bao)樣品(pin)均(jun)勻(yun)地(di)充(chong)分解凍。

特(te)點：
1. 即(ji)開即(ji)用，用戶(hu)只(zhi)需要提供(gong)病(bing)毒樣(yang)品。
2. 根據地(di)黃(huang)保(bao)守序(xu)列(lie)設(she)計(ji)的(de)專(zhuan)壹性(xing)引(yin)物(wu)，與(yu)相關病(bing)毒無(wu)交叉(cha)反應(ying)。
3. 靈(ling)敏度可(ke)以達到幾百拷(kao)貝(bei)/反(fan)應(ying)。
4. 壹(yi)管式熒(ying)光(guang)定量 PCR 檢測(ce)，避(bi)免(mian)後(hou)續(xu)汙(wu)染(ran)。
5. 本(ben)試劑盒足夠(gou) 50 次(ci) 20μL 反(fan)應(ying)體系(xi)的(de)熒(ying)光(guang)定量 PCR。
6. 本(ben)產(chan)品(pin)只(zhi)適(shi)用於(yu)科(ke)研(yan)，不(bu)能用於(yu)臨(lin)床診斷。

使(shi)用方(fang)法(fa)：
壹(yi)、樣品采集(ji)：
1、食(shi)品樣品：樣品的(de)采集(ji)與(yu)預(yu)培(pei)養按照樣品的(de)采集(ji)與(yu)預(yu)培(pei)養按照《食品衛生微(wei)生物學檢驗(yan)阪(ban)崎(qi)腸(chang)桿(gan)菌(jun)檢驗(yan)要求進(jin)行(xing)。
2、血(xue)液樣(yang)品：用無菌(jun)註(zhu)射器抽(chou)取(qu)受(shou)檢者(zhe)靜(jing)脈血(xue)2mL，註(zhu)入(ru)無菌EDTA2Na(或(huo)檸(ning)檬(meng)酸鈉(na))抗(kang)凝管(guan)，立即(ji)混(hun)勻(yun)。
3、糞便(bian)樣(yang)品(pin)：取(qu)糞便(bian)置(zhi)於(yu)滅(mie)菌(jun)的(de)收集(ji)管中送(song)檢。
4、病(bing)竈(zao)部位(wei)樣(yang)品：取發病(bing)部位(wei)新(xin)鮮滲出(chu)物(wu)、粘(zhan)液膿(nong)血(xue)送(song)檢。
壹(yi)、稀釋 PCR 陽(yang)性(xing)對照（以 10E2-10E7 拷(kao)貝/μL 這(zhe) 6 個 10 倍(bei)稀釋度為(wei)例(li)）
1. 註(zhu)意(yi)：由(you)於(yu)標(biao)準(zhun)品濃度非常(chang)高，因此下列(lie)稀釋(shi)操(cao)作(zuo)壹(yi)定要在獨(du)立的(de)區(qu)域進(jin)行(xing)，千(qian)萬不能汙(wu)染(ran)樣品(pin)或(huo)本(ben)試劑盒的(de)其他成分）。為(wei)增(zeng)加(jia)產(chan)品(pin)穩(wen)定性和(he)避(bi)免(mian)擴散傳(chuan)染性(xing)病(bing)原，本(ben)產(chan)品(pin)不(bu)提供活體樣(yang)品做(zuo)陽(yang)性(xing)對照，只(zhi)提供可(ke)以直接使用的(de) DNA段(duan)作(zuo)為(wei)陽(yang)性(xing)對照。
2. 標(biao)記(ji) 6 個離(li)心管(guan)，分別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍(qiang)頭(tou)分(fen)別(bie)加(jia)入(ru) 45 μL 熒(ying)光(guang) PCR 模板稀釋(shi)液（用帶芯槍(qiang)頭(tou)，下(xia)同(tong)）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照，充(chong)分震蕩 1 分(fen)鐘(zhong)，得1×10E7 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照。放冰(bing)上(shang)待用。
5. 換(huan)槍(qiang)頭(tou)，在(zai) 6 號(hao)管中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照(上(shang)步(bu)稀釋(shi)所得)，充(chong)分震蕩 1 分(fen)鐘(zhong)，得 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照。放冰(bing)上(shang)待用。
6. 換(huan)槍(qiang)頭(tou)，在(zai) 5 號(hao)管中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照到 5 號(hao)管中，充(chong)分震蕩 1 分(fen)鐘(zhong)，得 1×10E5 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照。放冰(bing)上(shang)待用。
7. 重(zhong)復上面的(de)操作(zuo)直到得到 6 個稀(xi)釋度的(de)陽(yang)性(xing)對照。放冰(bing)上(shang)待用。
註(zhu)：上述樣品建議經(jing)過(guo)增菌後，收集(ji)培(pei)養物用於(yu)檢測(ce)。 
二(er)、DNA提(ti)取：
可(ke)采用PCR試劑盒配(pei)備(bei)的(de)DNA抽(chou)提(ti)液，按以下(xia)說(shuo)明(ming)進(jin)行(xing)DNA核酸的(de)粗(cu)提。也(ye)可(ke)采購上海澤葉生物科(ke)技有限公司生產(chan)的(de)DNA提(ti)取試劑盒(過(guo)柱法-熒(ying)光(guang)配(pei)套(tao))或(huo)其(qi)他合適(shi)的(de)商業化(hua)產(chan)品(pin)，並(bing)按照相應(ying)試劑盒說明(ming)進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo)。
1、液體(ti)培(pei)養物：取液體(ti)培(pei)養物100μL加(jia)到1.5mL無(wu)菌離心管中，8000rpm離(li)心3min，盡(jin)量吸棄(qi)上清(qing)，加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min，取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
2、固(gu)體(ti)培(pei)養物：挑取單(dan)克隆菌(jun)落(luo)與(yu)50μL DNA抽(chou)提(ti)液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min，取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
3、糞便(bian)樣(yang)品(pin)：挑(tiao)取(qu)米粒大小(xiao)糞便(bian)於(yu)滅(mie)菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中，加(jia)入(ru)0.5mL生理鹽(yan)水(shui)，振蕩(dang)混(hun)勻(yun)，13000rpm離(li)心3分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)上清(qing)，沈澱中加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
4、其(qi)他液體(ti)標(biao)本(ben)：取標(biao)本(ben)2-3mL，13000rpm離(li)心3min，棄(qi)上清(qing)，沈澱中加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
註(zhu)：陽(yang)性(xing)對照和陰性(xing)對照為已經(jing)抽(chou)提(ti)好的(de)核酸(無(wu)需提(ti)取)，直接取5μL加(jia)入(ru)到反應(ying)體系(xi)中即可(ke)。由(you)於(yu)陽(yang)性(xing)對照濃度較(jiao)高，建議在(zai)樣(yang)品制(zhi)備區(qu)域加(jia)入(ru)陽(yang)性(xing)對照。 
CM-R078大鼠大隱(yin)靜(jing)脈平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞(bao)*培(pei)養基100mL羅漢果皂(zao)苷Ⅲemogroside III e質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品

Ishikawa, 人(ren)內膜癌(ai)細(xi)胞(bao)系 胚(pei)肺細(xi)胞(bao),2BS細(xi)胞(bao) SNU-398(人(ren)肝(gan)癌(ai)細(xi)胞(bao))羅漢果黃(huang)素Grosverine質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品

C3H/An小(xiao)鼠結(jie)締組(zu)織細(xi)胞(bao)(L929-TK-);LTK-白皮(pi)杉(shan)醇,3'-羥基白藜(li)蘆(lu)醇;比(bi)杉(shan)特(te)醇(標(biao)準(zhun)品)Piceatanl質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC≥95%，標(biao)準(zhun)品

TNFRSF19 Others Mouse 小(xiao)鼠 TNFRSF19 / OY 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解液 (陽(yang)性(xing)對照) 氯(lv)化(hua)鎂Magnesium chloride質(zhi)量規(gui)格(ge)：工業級(ji)

人(ren)小細(xi)胞(bao)肺癌(ai);NCI-H2227苜(mu)蓿(xu)素(標(biao)準(zhun)品)Tricin質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品
CL-001195-D(人(ren)高轉(zhuan)移肺癌(ai)細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶×2人(ren)參皂(zao)苷RK3(標(biao)準(zhun)品)質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%,標(biao)準(zhun)品Ginseside RK3

小(xiao)鼠垂(chui)體(ti)瘤(liu)細(xi)胞(bao)(分(fen)泌(mi)促生長激(ji)素分(fen)泌(mi)激素(su));AtT-20 小(xiao)鼠支氣管上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)*培(pei)養基 100mL人(ren)參皂(zao)苷RH4質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品Ginseside RH4

人(ren)臍靜(jing)脈平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞(bao) Human乙(yi)酰(xian)輔酶(mei)A三(san)鋰鹽質量規(gui)格(ge)：95%,美(mei)國(guo)進口原(yuan)裝(zhuang)Acetyl coenzyme A trilithium salt

CSF1R Others Mouse 小(xiao)鼠 CSF1R / M-CSFR / CD115 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解液 (陽(yang)性(xing)對照) 尿素(su)酶(mei),脲(niao)酶(mei)(巨豆(dou))質(zhi)量規(gui)格(ge)：>45 U/mg,進(jin)分Urease

大鼠少(shao)突膠質(zhi)前體(ti)細(xi)胞(bao)ROPC蛋(dan)白酶(mei)VIII質(zhi)量規(gui)格(ge)：美(mei)國(guo)*7-15 units/mg,來源於(yu)地(di)衣芽孢桿(gan)菌(jun)Protease type VIII
hMNC-CB 人(ren)類臍帶(dai)血(xue)單(dan)核細(xi)胞(bao)團塊(kuai)單壹捐(juan)獻(xian)者(zhe)，超 > 1 mio.cells 人(ren)心臟(zang)微(wei)血(xue)管內皮細(xi)胞(bao)總(zong)RNAHCMEC NANBD-H (=4-肼基-7-硝(xiao)基-2,1,3-苯(ben)並惡二(er)唑肼)(>98.0%(HPLC))質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98.0%(HPLC)NBD-H (=4-Hydrazi-7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole Hydrazine)

CM-M058小(xiao)鼠膀(pang)胱(guang)上(shang)皮細(xi)胞(bao)*培(pei)養基100mL1,3-環(huan)己(ji)二(er)酮(>98.0%(GC)(T))質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98.0%(GC)(T)1,3-Cyclohexanedione

BCCIP Others Human 人(ren) BRCA2 / BCCIP 桿(gan)狀病(bing)毒-昆(kun)蟲細(xi)胞(bao)裂解液 (陽(yang)性(xing)對照) 環(huan)胞(bao)甙(dai)鹽(yan)酸鹽；鹽酸環(huan)胞(bao)苷；安(an)西(xi)他濱(bin)鹽酸鹽質量規(gui)格(ge)：>98%,BRCyclocytidine

星形(xing)膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞(bao)培(pei)養基AM-prf5'-三(san)1酸胞苷三(san)鈉(na)鹽(yan)質量規(gui)格(ge)：>98%,分(fen)子生物學級(ji)Cytidine-5'-triphosphate (CTP), 3

水(shui)牛皮(pi)膚(fu)成纖維樣(yang)細(xi)胞(bao);WB-S1 卵(luan)巢癌(ai)細(xi)胞(bao)，H08910細(xi)胞(bao) K-562(慢性(xing)髓(sui)原白血(xue)病(bing)細(xi)胞(bao))細(xi)胞(bao)弛(chi)素(su)A(>98%，BR)質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%，BRCytochalasin A
巴(ba)戟天探針法PCR鑒(jian)定試劑盒保(bao)存食(shi)管上皮細(xi)胞(bao)Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105方(fang)(1ml)（標(biao)準(zhun)品）質量規(gui)格(ge)：HPLC法(fa)含量測定Dimenhydrinate

DYRK3 Others Human 人(ren) DYRK3 / REDK 桿(gan)狀病(bing)毒-昆(kun)蟲細(xi)胞(bao)裂解液 (陽(yang)性(xing)對照) 醋(cu)酸潑(po)尼(ni)龍（標(biao)準(zhun)品）質量規(gui)格(ge)：含(han)量測定Prednisolone acetate

tTA基因修(xiu)飾的(de)小鼠畸(ji)胎(tai)瘤(liu)細(xi)胞(bao)(B類(lei));F9-CAG-tTA-4D6醋(cu)酸（標(biao)準(zhun)品）質量規(gui)格(ge)：含(han)量測定xx

COLO 205細(xi)胞(bao)，結(jie)腸(chang)癌(ai)細(xi)胞(bao) 正(zheng)常(chang)人(ren)肝(gan)細(xi)胞(bao),L
實(shi)驗流(liu)程：
1. 整(zheng)個檢測(ce)過(guo)程應(ying)嚴格(ge)按照本說明(ming)書(shu)要求分(fen)別(bie)在試劑準(zhun)備(bei)區(qu)、樣(yang)本處(chu)理區(qu)和(he)PCR擴增區(qu)進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo)，各(ge)區(qu)實(shi)驗服(fu)、儀(yi)器 、耗材(cai)應(ying)獨(du)立使(shi)用，不能混(hun)用；實驗(yan)用吸頭(tou)采(cai)用帶濾(lv)芯吸頭(tou)；樣(yang)本(ben)處(chu)理區(qu)應(ying)配(pei)有(you)生物安(an)全(quan)櫃，樣(yang)本(ben)處(chu)理在(zai)生物安(an)全(quan)櫃中進行(xing)操(cao)作(zuo)；三(san)個區(qu)應(ying)該配(pei)有(you)紫(zi)外(wai)線(xian)殺菌裝(zhuang)置(zhi)。
2. 為(wei)避(bi)免(mian)RNA降(jiang)解，樣本(ben)處(chu)理過(guo)程應(ying)在0-4℃條(tiao)件下操作(zuo)，且(qie)完(wan)成實驗(yan)後(hou)立即(ji)上(shang)機(ji)檢測(ce)；樣(yang)本(ben)處(chu)理過(guo)程中使用的(de)器具(ju)耗材(cai)應(ying)經過(guo)無核酶(mei)處(chu)理。

3. 每次實(shi)驗(yan)應(ying)該設(she)置(zhi)陰、陽(yang)性(xing)對照。
4. 試劑盒所有(you)試劑在(zai)使(shi)用前應(ying)該在常(chang)溫(wen)下充(chong)分融(rong)化(hua)混勻(yun)，並應(ying)瞬時(shi)離心。
5. 試劑盒內所配(pei)陰性(xing)和陽(yang)性(xing)對照在壹次使(shi)用前應(ying)全(quan)部轉(zhuan)移至(zhi)標(biao)本(ben)準備區(qu)，並(bing)單獨(du)存(cun)放。
6. 為(wei)防止熒(ying)光(guang)幹(gan)擾(rao)，應(ying)避(bi)免(mian)裸(luo)手(shou)直接接觸PCR反(fan)應(ying)管，並(bing)應(ying)避(bi)免(mian)在(zai)PCR反(fan)應(ying)管上(shang)進(jin)行(xing)任(ren)何(he)標(biao)記(ji)。
7. 儀(yi)器 擴增相關參數(shu)應(ying)按照本說明(ming)書(shu)相關要求進(jin)行(xing)設(she)置(zhi)；不同批(pi)號(hao)試劑不(bu)能混(hun)用。
8. ABI系(xi)列(lie)熒(ying)光(guang)定量PCR儀(yi)參數設(she)置(zhi)中不選(xuan)ROX校(xiao)正，淬(cui)滅(mie)基因選擇(ze)None。
9. 實(shi)驗過(guo)程中產(chan)品(pin)的(de)廢棄(qi)物應(ying)該進行(xing)無(wu)害(hai)化(hua)處理後(hou)方(fang)可(ke)丟(diu)棄(qi)。