黃連染(ran)料(liao)法(fa)PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑(ji)盒(he)*

實(shi)驗流(liu)程：
1. 整個檢(jian)測過程應(ying)嚴(yan)格(ge)按(an)照本(ben)說明書要(yao)求(qiu)分別(bie)在試(shi)劑(ji)準(zhun)備(bei)區、樣本(ben)處(chu)理(li)區和(he)PCR擴(kuo)增區(qu)進行操作(zuo)，各區(qu)實(shi)驗服、儀器 、耗材應(ying)獨立使(shi)用(yong)，不能混(hun)用(yong)；實(shi)驗用(yong)吸(xi)頭采(cai)用(yong)帶(dai)濾芯(xin)吸(xi)頭；樣本(ben)處(chu)理(li)區應配有生(sheng)物安全(quan)櫃(gui)，樣本(ben)處(chu)理(li)在生(sheng)物安全(quan)櫃(gui)中(zhong)進行操作(zuo)；三個區(qu)應(ying)該(gai)配有紫外(wai)線殺(sha)菌裝置(zhi)。
2. 為(wei)避免RNA降(jiang)解，樣本(ben)處(chu)理(li)過程應(ying)在0-4℃條(tiao)件(jian)下操作(zuo)，且完(wan)成實(shi)驗後立即上機檢(jian)測；樣本(ben)處(chu)理(li)過程中(zhong)使用(yong)的(de)器具(ju)耗材應(ying)經過無核酶處(chu)理(li)。
3. 每(mei)次(ci)實(shi)驗應該(gai)設(she)置(zhi)陰、陽(yang)性對(dui)照。
4. 試(shi)劑(ji)盒(he)所(suo)有試(shi)劑(ji)在(zai)使用(yong)前(qian)應(ying)該(gai)在(zai)常溫下充分融(rong)化混(hun)勻，並應(ying)瞬(shun)時離心。
5. 試(shi)劑(ji)盒(he)內所(suo)配陰(yin)性和(he)陽性對(dui)照在(zai)壹次使用(yong)前(qian)應(ying)全(quan)部轉(zhuan)移(yi)至標本(ben)準(zhun)備(bei)區，並(bing)單(dan)獨(du)存(cun)放。
6. 為(wei)防(fang)止熒光幹(gan)擾(rao)，應(ying)避免裸(luo)手直接接觸(chu)PCR反(fan)應管(guan)，並應(ying)避免在(zai)PCR反(fan)應管(guan)上進(jin)行任(ren)何(he)標記(ji)。
7. 儀器 擴(kuo)增相(xiang)關(guan)參數(shu)應(ying)按(an)照本(ben)說明書相(xiang)關(guan)要(yao)求(qiu)進(jin)行設(she)置(zhi)；不同(tong)批號(hao)試(shi)劑(ji)不能混(hun)用(yong)。
8. ABI系(xi)列(lie)熒光定(ding)量(liang)PCR儀參數(shu)設(she)置(zhi)中(zhong)不選(xuan)ROX校(xiao)正(zheng)，淬(cui)滅(mie)基因選(xuan)擇(ze)None。
9. 實(shi)驗過程中(zhong)產(chan)品的(de)廢(fei)棄物應該(gai)進(jin)行無(wu)害化處(chu)理(li)後方可丟棄。

特(te)點：
1. 即開即用(yong)，用(yong)戶(hu)只需(xu)要(yao)提供病(bing)毒(du)樣品。
2. 根(gen)據地(di)黃保(bao)守序列(lie)設計(ji)的(de)專(zhuan)壹性引物，與相(xiang)關(guan)病(bing)毒(du)無(wu)交(jiao)叉反(fan)應(ying)。
3. 靈(ling)敏度可以(yi)達(da)到(dao)幾百(bai)拷(kao)貝/反(fan)應。
4. 壹管(guan)式(shi)熒(ying)光定(ding)量(liang) PCR 檢(jian)測，避免後續汙染(ran)。
5. 本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)足(zu)夠 50 次(ci) 20μL 反(fan)應體(ti)系(xi)的(de)熒(ying)光定(ding)量(liang) PCR。
6. 本(ben)產(chan)品只適(shi)用(yong)於科(ke)研(yan)，不能用(yong)於臨床診斷。
使(shi)用(yong)方(fang)法(fa)：
壹、樣品采(cai)集：
1、食(shi)品樣品：樣品的(de)采(cai)集與預培(pei)養(yang)按(an)照樣品的(de)采(cai)集與預培(pei)養(yang)按(an)照《食(shi)品衛生(sheng)微(wei)生(sheng)物學(xue)檢(jian)驗阪崎(qi)腸(chang)桿菌(jun)檢(jian)驗要(yao)求(qiu)進(jin)行。
2、血(xue)液(ye)樣品：用(yong)無(wu)菌(jun)註(zhu)射器抽(chou)取受(shou)檢(jian)者(zhe)靜脈血(xue)2mL，註(zhu)入無菌(jun)EDTA2Na(或檸(ning)檬(meng)酸鈉)抗(kang)凝(ning)管(guan)，立即混(hun)勻。
3、糞(fen)便樣品：取糞便(bian)置(zhi)於滅(mie)菌的(de)收(shou)集管(guan)中(zhong)送(song)檢(jian)。
4、病(bing)竈(zao)部位樣品：取發(fa)病(bing)部位新(xin)鮮(xian)滲出(chu)物、粘液(ye)膿(nong)血(xue)送(song)檢(jian)。
壹、稀釋(shi) PCR 陽(yang)性對(dui)照（以(yi) 10E2-10E7 拷(kao)貝/μL 這 6 個 10 倍(bei)稀釋(shi)度為例(li)）
1. 註(zhu)意：由於標(biao)準品濃(nong)度非常高，因此(ci)下列(lie)稀釋(shi)操作(zuo)壹定(ding)要(yao)在獨(du)立的(de)區(qu)域進(jin)行，千(qian)萬不能汙染(ran)樣品或本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)的(de)其他成(cheng)分）。為增(zeng)加(jia)產(chan)品穩定(ding)性和(he)避免擴(kuo)散傳(chuan)染(ran)性病(bing)原(yuan)，本(ben)產(chan)品不提供活(huo)體樣品做陽性對(dui)照，只提供可以(yi)直接使用(yong)的(de) DNA段(duan)作(zuo)為陽(yang)性對(dui)照。
2. 標(biao)記(ji) 6 個離心管(guan)，分別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭分別(bie)加(jia)入(ru) 45 μL 熒(ying)光 PCR 模(mo)板稀釋(shi)液(ye)（用(yong)帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭，下同(tong)）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照，充分震蕩 1 分鐘(zhong)，得1×10E7 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照。放冰(bing)上待(dai)用(yong)。
5. 換(huan)槍頭，在 6 號(hao)管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照(上(shang)步稀釋(shi)所(suo)得)，充分震蕩 1 分鐘(zhong)，得 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照。放冰(bing)上待(dai)用(yong)。
6. 換(huan)槍頭，在 5 號(hao)管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照到(dao) 5 號(hao)管(guan)中(zhong)，充分震蕩 1 分鐘(zhong)，得 1×10E5 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照。放冰(bing)上待(dai)用(yong)。
7. 重復(fu)上(shang)面(mian)的(de)操作(zuo)直到(dao)得到(dao) 6 個稀釋(shi)度的(de)陽(yang)性對(dui)照。放冰(bing)上待(dai)用(yong)。
註(zhu)：上述(shu)樣品建(jian)議(yi)經過增(zeng)菌後，收集培(pei)養(yang)物用(yong)於檢(jian)測。 
二(er)、DNA提取：
可(ke)采(cai)用(yong)PCR試(shi)劑(ji)盒(he)配備(bei)的(de)DNA抽(chou)提液(ye)，按(an)以下說明進行DNA核酸的(de)粗(cu)提。也(ye)可(ke)采(cai)購(gou)上(shang)海澤葉(ye)生(sheng)物科(ke)技(ji)有限(xian)公(gong)司生(sheng)產(chan)的(de)DNA提取試(shi)劑(ji)盒(he)(過(guo)柱法-熒(ying)光配套(tao))或其他合(he)適的(de)商業化產(chan)品，並按(an)照相(xiang)應(ying)試(shi)劑(ji)盒(he)說明進行操作(zuo)。
1、液(ye)體(ti)培養(yang)物：取液(ye)體(ti)培養(yang)物100μL加(jia)到(dao)1.5mL無(wu)菌離心管(guan)中(zhong)，8000rpm離心3min，盡(jin)量(liang)吸(xi)棄上清(qing)，加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
2、固體培(pei)養(yang)物：挑取單(dan)克(ke)隆菌(jun)落(luo)與50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
3、糞(fen)便樣品：挑取米(mi)粒大(da)小(xiao)糞便(bian)於滅(mie)菌離心管(guan)中(zhong)，加(jia)入(ru)0.5mL生(sheng)理(li)鹽水(shui)，振(zhen)蕩混(hun)勻，13000rpm離心3分鐘(zhong)，棄上清(qing)，沈澱中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
4、其他液(ye)體(ti)標本：取標本(ben)2-3mL，13000rpm離心3min，棄上清(qing)，沈澱中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
註(zhu)：陽性對(dui)照和(he)陰性對(dui)照為(wei)已(yi)經(jing)抽(chou)提好的(de)核酸(無(wu)需(xu)提取)，直接取5μL加(jia)入(ru)到(dao)反應體(ti)系(xi)中(zhong)即可。由(you)於陽(yang)性對(dui)照濃(nong)度較高，建(jian)議(yi)在樣品制備(bei)區域(yu)加(jia)入(ru)陽(yang)性對(dui)照。 
CL-0067COLO 320(人(ren)結(jie)腸(chang)癌(ai)細胞)5×106cells/瓶(ping)×2乙(yi)酰(xian)水(shui)楊(yang)酸-d4Acetylsalicylic Acid-d4質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：美(mei)國進(jin)口(kou)

小(xiao)鼠(shu)胚(pei)胎成纖維(wei)細胞;NIH/3T3 大(da)鼠(shu)牙(ya)細胞*培(pei)養(yang)基 100mLDL-賴(lai)氨酸乙(yi)酰(xian)水(shui)楊(yang)酸（）DL-Lysine Acetylsalicylate質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：美(mei)國進(jin)口(kou)

LOVO/Adr 結(jie)腸(chang)癌(ai)耐(nai)藥株(zhu)酰(xian)基乙(yi)酰(xian)水(shui)楊(yang)酸-β-D-葡(pu)萄(tao)糖苷酸Acetylsalicylic Acid Acyl-β-D-glucuronide質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：美(mei)國進(jin)口(kou)

EML1 Others Human 人(ren) EML1 / TLT-1 人(ren)細胞裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性對(dui)照) 乙(yi)酰(xian)水(shui)楊(yang)酸1Acetylsalicylic Anhydride質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：美(mei)國進(jin)口(kou)

中(zhong)國倉(cang)鼠(shu)卵(luan)巢(chao)細胞(亞系(xi)克隆);CHO 1beta9,12.5 Clone 36脫氫(qing)Dehydro Nicardipine 質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：美(mei)國進(jin)口(kou)
HEPG2.2.15 肝(gan)癌細胞HBV病(bing)毒(du)株(zhu)草酰(xian)乙(yi)酸Oxaloacetic acid質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：>97%,BR

CL-0290MDA-MB-468(人(ren)癌細胞)5×106cells/瓶(ping)×2硫(liu)酸鋅七水(shui)(AR)Zinc sulfate, heptahydrate質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：>99.5%,AR

RLF, 大(da)鼠(shu)成(cheng)纖維(wei)細胞1酸鉀鈉四(si)水(shui)Potassium  tatrate, tetrahydrate質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：>98%,BR

雙(shuang)位點HC-kit受(shou)體細胞株(zhu);DMF7 人(ren)內膜(mo)上皮(pi)細胞*培(pei)養(yang)基 100mL縮(suo)二脲Biuret質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：>98%,BR

人(ren)脊髓星(xing)形(xing)膠(jiao)質(zhi)細胞總(zong)RNAHA-sp NA無(wu)水(shui)(分子生(sheng)物學(xue)級)Magnesium sulfate anhydrous質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：>99%,分子生(sheng)物學(xue)級
小(xiao)鼠(shu)神(shen)經母(mu)細胞瘤細胞;Neuro-2a [N2a; Neuro-2a]右(you)旋質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：>98.5%,BR(S)-Ketoprofen trometamol

BPIFA2 Others Human 人(ren) BPIFA2 / C20orf70 人(ren)細胞裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性對(dui)照) 右(you)旋(標(biao)準品)質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：含(han)量(liang)測定(ding)(S)-Ketoprofen trometamol

人(ren)食(shi)管(guan)上皮(pi)細胞*培(pei)養(yang)基 100mL植物凝(ning)膠(jiao)(Sigma)質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：進分;SigmaP8169Phytagel

7WML6.0細胞，人(ren)APP-PS1(M146L)雙(shuang)基因轉(zhuan)染(ran)CHO細胞株(zhu) 生(sheng)孢梭(suo)菌 狗(gou)肺(fei)成纖維(wei)樣細胞;DogL1右(you)旋質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：>98.5%(S)-(+)-Ketoprofen

PPBP Protein Cynomolgus 重組食(shi)蟹猴 NAP-2 / PPBP / CXCL7 蛋白(bai) (Fc 標(biao)簽)-甲(jia)基-d3質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：美(mei)國進(jin)口(kou)Methotrexate-methyl-d3
黃連染(ran)料(liao)法(fa)PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑(ji)盒(he)*中(zhong)國倉(cang)鼠(shu)卵(luan)巢(chao)細胞(亞系(xi)克隆);CHO-HCV-NS3PROTEINASEK,20MG/MLSOLUTION蛋白(bai)酶(mei)K,20mg/ml溶(rong)液(ye)生(sheng)物技術級5MLCOLD

JF-305細胞，人(ren)胰(yi)腺(xian)癌(ai)細胞 人(ren)皮膚癌(ai)細胞系(xi),HS-1細胞 KM小(xiao)鼠(shu)腦(nao)神(shen)經膠(jiao)質(zhi)母(mu)細胞瘤瘤株(zhu);G422本(ben)達(da) Bqntczonq 2027-89-0

HuH-7(人(ren)肝(gan)癌細胞) 5×106cells/瓶(ping)×2Cytidine胞(bao)嘧啶(ding)核苷7.5KUBR，98%

Promocell C-22011 Endothelial Cell GrowthMedium 2
儲(chu)存(cun)條件(jian)：
14℃或－20℃樣品收集、處(chu)理(li)及保(bao)存(cun)方法(fa)
1. 血(xue)清(qing)：使用(yong)不含(han)熱原(yuan)和(he)內毒(du)素(su)的(de)試(shi)管(guan)，操作(zuo)過程中(zhong)避免任(ren)何細胞刺(ci)激(ji)，收集血(xue)液(ye)後，3000 轉(zhuan)離心10 分鐘(zhong)將(jiang)血(xue)清(qing)和(he)紅細胞迅(xun)速(su)小(xiao)心地(di)分離。
2. 血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬酸鹽或肝(gan)素(su)抗(kang)凝(ning)。3000 轉(zhuan)離心30 分鐘(zhong)取上清(qing)。
3. 細胞上(shang)清(qing)液(ye)：3000 轉(zhuan)離心10 分鐘(zhong)去(qu)除顆粒和(he)聚合(he)物。
4. 組(zu)織勻漿：將(jiang)組(zu)織加(jia)入(ru)適(shi)量(liang)生(sheng)理(li)鹽水(shui)搗(dao)碎。3000 轉(zhuan)離心10 分鐘(zhong)取上清(qing)。
5. 保(bao)存(cun)：如果樣本(ben)收(shou)集後不及時檢(jian)測，請按(an)壹次用(yong)量(liang)分裝，凍(dong)存(cun)於-20℃，避免反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)，在(zai)室溫下解凍並確保(bao)樣品均(jun)勻地(di)充分解凍。