豬(zhu)苓(ling)PCR鑒定(ding)試劑(ji)盒說(shuo)明(ming)書(shu)

儲(chu)存(cun)條(tiao)件(jian)：
14℃或(huo)－20℃樣(yang)品(pin)收(shou)集、處理及保(bao)存(cun)方法(fa)
1. 血清：使(shi)用不含(han)熱原(yuan)和內毒(du)素的(de)試管(guan)，操(cao)作過程中避(bi)免任(ren)何(he)細胞(bao)刺激，收(shou)集血液(ye)後(hou)，3000 轉(zhuan)離心10 分(fen)鐘將(jiang)血清(qing)和(he)紅細胞(bao)迅(xun)速小(xiao)心地分(fen)離。
2. 血漿(jiang)：EDTA、檸檬酸(suan)鹽或(huo)肝(gan)素抗(kang)凝。3000 轉(zhuan)離心30 分(fen)鐘取(qu)上(shang)清。
3. 細胞(bao)上(shang)清液(ye)：3000 轉(zhuan)離心10 分(fen)鐘去除(chu)顆粒和聚合(he)物。
4. 組織勻漿(jiang)：將(jiang)組織加(jia)入(ru)適量(liang)生(sheng)理鹽水搗(dao)碎(sui)。3000 轉(zhuan)離心10 分(fen)鐘取(qu)上(shang)清。
5. 保存：如(ru)果(guo)樣(yang)本(ben)收(shou)集後(hou)不及時檢測(ce)，請按(an)壹次(ci)用量(liang)分(fen)裝，凍存(cun)於-20℃，避(bi)免反復凍(dong)融，在室(shi)溫下(xia)解凍(dong)並確(que)保(bao)樣(yang)品(pin)均勻地充(chong)分(fen)解凍(dong)。

特點：
1. 即開即(ji)用，用戶(hu)只需(xu)要提供病毒(du)樣(yang)品(pin)。
2. 根(gen)據(ju)地黃(huang)保(bao)守序(xu)列(lie)設(she)計(ji)的(de)專壹性(xing)引物，與相關(guan)病毒(du)無交叉反應。
3. 靈敏(min)度可以達(da)到(dao)幾(ji)百拷貝/反應。
4. 壹管(guan)式(shi)熒光定(ding)量(liang) PCR 檢測(ce)，避(bi)免後(hou)續(xu)汙(wu)染(ran)。
5. 本(ben)試劑(ji)盒足(zu)夠 50 次 20μL 反應體系(xi)的(de)熒光定(ding)量(liang) PCR。
6. 本(ben)產品(pin)只適用於科研(yan)，不能用於臨床(chuang)診斷。

使用方法(fa)：
壹、樣(yang)品(pin)采集：
1、食品(pin)樣(yang)品(pin)：樣(yang)品(pin)的(de)采集(ji)與預培養(yang)按照樣(yang)品(pin)的(de)采集(ji)與預培養(yang)按照《食品(pin)衛生(sheng)微(wei)生(sheng)物學檢驗(yan)阪崎腸(chang)桿(gan)菌檢驗(yan)要求進行(xing)。
2、血液(ye)樣(yang)品(pin)：用無菌註射器抽取(qu)受(shou)檢者靜脈血(xue)2mL，註入(ru)無菌EDTA2Na(或(huo)檸檬酸(suan)鈉)抗(kang)凝管(guan)，立(li)即(ji)混(hun)勻。
3、糞便樣(yang)品(pin)：取(qu)糞便置於滅(mie)菌(jun)的(de)收(shou)集管(guan)中(zhong)送檢。
4、病竈部(bu)位樣(yang)品(pin)：取(qu)發(fa)病部位新(xin)鮮滲(shen)出物、粘液(ye)膿血(xue)送檢。
壹、稀(xi)釋 PCR 陽(yang)性(xing)對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(ge) 10 倍稀釋度為例）
1. 註意：由於標準品(pin)濃度非常高(gao)，因(yin)此下(xia)列(lie)稀(xi)釋操(cao)作壹定(ding)要在獨立的(de)區域(yu)進行(xing)，千(qian)萬(wan)不能汙(wu)染(ran)樣(yang)品(pin)或(huo)本(ben)試劑(ji)盒的(de)其(qi)他(ta)成(cheng)分(fen)）。為增加(jia)產品(pin)穩定(ding)性(xing)和避(bi)免擴(kuo)散(san)傳(chuan)染性(xing)病原，本(ben)產品(pin)不提供活體(ti)樣(yang)品(pin)做(zuo)陽(yang)性(xing)對照，只提供可以直接(jie)使用的(de) DNA段(duan)作為陽(yang)性(xing)對照。
2. 標記 6 個(ge)離心管(guan)，分(fen)別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭分(fen)別(bie)加(jia)入(ru) 45 μL 熒光 PCR 模板(ban)稀(xi)釋液(ye)（用帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭，下(xia)同）。
4. 在 7 號(hao)管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得(de)1×10E7 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照。放(fang)冰(bing)上(shang)待用。
5. 換(huan)槍(qiang)頭，在 6 號(hao)管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照(上(shang)步稀(xi)釋所(suo)得(de))，充分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得(de) 1×10E6 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照。放(fang)冰(bing)上(shang)待用。
6. 換(huan)槍(qiang)頭，在 5 號(hao)管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照到(dao) 5 號(hao)管(guan)中(zhong)，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得(de) 1×10E5 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照。放(fang)冰(bing)上(shang)待用。
7. 重復上(shang)面的(de)操作直到得(de)到 6 個(ge)稀釋度的(de)陽(yang)性(xing)對照。放(fang)冰(bing)上(shang)待用。
註：上(shang)述樣(yang)品(pin)建(jian)議(yi)經過增(zeng)菌(jun)後(hou)，收(shou)集培養(yang)物用於檢測(ce)。 
二、DNA提取(qu)：
可采用PCR試劑(ji)盒配(pei)備(bei)的(de)DNA抽提液(ye)，按以下(xia)說(shuo)明(ming)進行(xing)DNA核(he)酸(suan)的(de)粗提。也可采購上(shang)海澤葉(ye)生(sheng)物科技有限公(gong)司(si)生(sheng)產的(de)DNA提取(qu)試劑(ji)盒(過柱法(fa)-熒光配(pei)套(tao))或(huo)其(qi)他(ta)合(he)適(shi)的(de)商業(ye)化產品(pin)，並按(an)照相應(ying)試劑(ji)盒說(shuo)明(ming)進行(xing)操(cao)作。
1、液(ye)體培養(yang)物：取(qu)液(ye)體培養(yang)物100μL加(jia)到(dao)1.5mL無菌離心管(guan)中(zhong)，8000rpm離心3min，盡量(liang)吸棄(qi)上(shang)清，加(jia)入(ru)50μL DNA抽提液(ye)充分(fen)混勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心3min，取(qu)上(shang)清5μL進行(xing)PCR反應。
2、固(gu)體(ti)培養(yang)物：挑取(qu)單(dan)克隆(long)菌落(luo)與(yu)50μL DNA抽提液(ye)充分(fen)混勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心3min，取(qu)上(shang)清5μL進行(xing)PCR反應。
3、糞便樣(yang)品(pin)：挑取(qu)米(mi)粒大小(xiao)糞便於滅(mie)菌(jun)離心管(guan)中(zhong)，加(jia)入(ru)0.5mL生(sheng)理鹽水，振(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，13000rpm離心3分(fen)鐘，棄(qi)上(shang)清，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽提液(ye)充分(fen)混勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心3min取(qu)上(shang)清5μL進行(xing)PCR反應。
4、其(qi)他(ta)液(ye)體標(biao)本(ben)：取(qu)標(biao)本(ben)2-3mL，13000rpm離心3min，棄(qi)上(shang)清，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽提液(ye)充分(fen)混勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心3min取(qu)上(shang)清5μL進行(xing)PCR反應。
註：陽(yang)性(xing)對照和(he)陰(yin)性(xing)對照為已(yi)經抽提好的(de)核(he)酸(suan)(無需(xu)提取(qu))，直接(jie)取(qu)5μL加(jia)入(ru)到反應體系(xi)中即可(ke)。由於陽(yang)性(xing)對照濃(nong)度較高(gao)，建(jian)議(yi)在樣(yang)品(pin)制備(bei)區域加(jia)入(ru)陽(yang)性(xing)對照。 
MAP3K8 Others Human 人(ren) TPL2 / MAP3K8 / MEKK8 桿(gan)狀(zhuang)病毒(du)-昆蟲細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性(xing)對照) 普拉格(ge)雷Prasugrel質量(liang)規格(ge)：≥99.0%,BR

KM小(xiao)鼠(shu)子瘤(liu)株;U14Clonidine  質量(liang)規格(ge)：>98.0%,BR

NIH/3T3細胞(bao)，胚胎(tai)成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞(bao) 人(ren)高(gao)轉(zhuan)移(yi)肝(gan)癌細胞(bao),LM3細胞(bao) CL-0104HEp-2(人(ren)喉表皮樣(yang)癌細胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×2(標準品(pin))Clonidine  質量(liang)規格(ge)：HPLC>99%,標準品(pin)

敘利亞(ya)倉鼠(shu)腎(shen)細胞(bao);BHK-212-甲氧基(ji)雌二醇(chun)(進分(fen))2-Methoxyestradiol質量(liang)規格(ge)：進分(fen)，SigmaM6383

SERPINF2 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) SerpinF2 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性(xing)對照) 2-甲氧基(ji)雌二醇(chun)2-Methoxyestradiol質量(liang)規格(ge)：≥98.0%,國產
人(ren)前列(lie)腺成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞(bao)(HPrF)(5×105)2,7-二溴(xiu)芘(bi)(>97.0%(GC))2,7-Dibromopyrene質量(liang)規格(ge)：>97.0%(GC)

CL-0123IBRS-2(豬腎(shen)細胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×22,6-二溴(xiu)蒽(en)(>98.0%(HPLC))2,6-Dibromoanthracene質量(liang)規格(ge)：>98.0%(HPLC)

人(ren)腎(shen)上(shang)腺皮質腺癌細胞(bao);NCI-H295R 大鼠虹(hong)膜(mo)色(se)素上(shang)皮細胞(bao)*培養(yang)基(ji) 100mL2,7-二叔丁(ding)基(ji)芴(>98.0%(GC))2,7-Di-tert-butylfluorene質量(liang)規格(ge)：>98.0%(GC)

BEL/FU 人(ren)肝(gan)癌耐藥株9-芴酮(>98.0%(GC))9-Fluorene質量(liang)規格(ge)：>98.0%(GC)

REG3D Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) REG3D 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性(xing)對照) 9-芴醇(>95.0%(GC))9-Fluorel質量(liang)規格(ge)：>95.0%(GC)
MDBK(牛腎(shen)細胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 小(xiao)鼠(shu) EphB2 / Hek5 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性(xing)對照) 四(乙硫(liu)基(ji))四硫(liu)富(fu)瓦1[有機電子材(cai)料]質量(liang)規格(ge)：Tetrakis(ethylthio)tetrathiafulvalene [Organic Electronic Material]

中國倉鼠(shu)卵巢細胞(bao)(亞系克隆(long)); EPO-CHO-T雙(二硫(liu)代(dai)苯偶酰)鎳(nie)(II)(>95.0%(T))質量(liang)規格(ge)：>95.0%(T)Bis(dithiobenzil)nickel(II)

LYZL2 Others Human 人(ren) Lysozyme 2 / LYZL2 桿(gan)狀(zhuang)病毒(du)-昆蟲細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性(xing)對照) 雙(四丁銨(an))合(he)雙(順(shun)丁(ding)1腈(jing)二硫(liu)醇(chun))鎳(nie)(II)(>97.0%(T))質量(liang)規格(ge)：>97.0%(T)Bis(tetrabutylammonium) Bis(maleonitriledithiolato)nickel(II) Complex

內皮細胞(bao)Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105方(1ml)四丁銨(an)雙(馬來腈(jing)基(ji)二硫(liu)醇(chun))鎳(nie)(Ⅲ)絡合(he)物(>90.0%(T))質量(liang)規格(ge)：>90.0%(T)Tetrabutylammonium Bis(maleonitriledithiolato)nickel(III) Complex

人(ren)臍動(dong)脈(mai)平滑肌(ji)細胞(bao) 人(ren)肺鱗狀(zhuang)細胞(bao)癌，NCI-H2170[H2170]細胞(bao) L6565(小(xiao)鼠(shu)L6565白(bai)血(xue)病克隆(long)細胞(bao)系)順(shun)式(shi)-孟(meng)魯司(si)特質量(liang)規格(ge)：美國進口(kou)cis-Montelukast
豬苓(ling)PCR鑒定(ding)試劑(ji)盒說(shuo)明(ming)書(shu)ITGA8 & ITGB1 Others Human 人(ren) ITGA8 & ITGB1 Heterodimer 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性(xing)對照) EDOT3,4-乙撐(cheng)二氧10克2N，99%

KYSE450 人(ren)食管(guan)癌細胞(bao)流醋間(jian)本(ben)二安(an) 1,3-Phqnylqnqdicminq sulfctq 241-70-8

CL-0328CEM/C1(人(ren)急性(xing)細胞(bao)白(bai)血(xue)病細胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×2言(yan)醋二雙胍相關(guan)物質A MqtforMin Rqlctqd CoMpound c;1-Cycgucnidinq 461-28-2

rE
實驗流(liu)程(cheng)：
1. 整(zheng)個(ge)檢測(ce)過程(cheng)應嚴(yan)格(ge)按照本(ben)說(shuo)明(ming)書(shu)要(yao)求分(fen)別(bie)在試劑(ji)準備(bei)區、樣(yang)本(ben)處理區和PCR擴(kuo)增(zeng)區(qu)進行(xing)操(cao)作，各區實驗(yan)服、儀(yi)器 、耗材應(ying)獨(du)立(li)使用，不能混(hun)用；實(shi)驗(yan)用吸頭采(cai)用帶(dai)濾(lv)芯吸頭；樣(yang)本(ben)處理區應配(pei)有生(sheng)物安全(quan)櫃(gui)，樣(yang)本(ben)處理在生(sheng)物安全(quan)櫃(gui)中(zhong)進行(xing)操(cao)作；三個(ge)區應(ying)該(gai)配有紫(zi)外(wai)線(xian)殺菌裝置。
2. 為避(bi)免RNA降解，樣(yang)本(ben)處理過程應(ying)在0-4℃條(tiao)件(jian)下(xia)操(cao)作，且完成(cheng)實(shi)驗(yan)後(hou)立(li)即(ji)上(shang)機檢測(ce)；樣(yang)本(ben)處理過程中(zhong)使(shi)用的(de)器具(ju)耗(hao)材(cai)應(ying)經過無核(he)酶(mei)處理。

3. 每次實驗應該(gai)設置陰、陽(yang)性(xing)對照。
4. 試劑(ji)盒所(suo)有試劑(ji)在使用前應該(gai)在常溫下(xia)充(chong)分(fen)融化(hua)混(hun)勻(yun)，並應(ying)瞬時離心。
5. 試劑(ji)盒內所配陰性(xing)和(he)陽(yang)性(xing)對照在壹次(ci)使用前應全(quan)部(bu)轉(zhuan)移(yi)至(zhi)標本(ben)準備(bei)區，並單(dan)獨(du)存放(fang)。
6. 為防止(zhi)熒光幹擾(rao)，應(ying)避(bi)免裸手直接(jie)接(jie)觸(chu)PCR反應管(guan)，並應(ying)避(bi)免在PCR反應管(guan)上(shang)進行(xing)任(ren)何(he)標(biao)記。
7. 儀(yi)器 擴(kuo)增(zeng)相關(guan)參(can)數(shu)應(ying)按(an)照本(ben)說(shuo)明(ming)書(shu)相關(guan)要求進行(xing)設(she)置；不同批號(hao)試劑(ji)不能混(hun)用。
8. ABI系列(lie)熒光定(ding)量(liang)PCR儀(yi)參(can)數(shu)設(she)置中不選(xuan)ROX校正，淬(cui)滅(mie)基(ji)因(yin)選(xuan)擇(ze)None。
9. 實驗過(guo)程(cheng)中(zhong)產品(pin)的(de)廢棄(qi)物應該(gai)進行(xing)無害化處理後(hou)方可丟棄(qi)。