豬苓(ling)染(ran)料(liao)法PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑盒*

儲(chu)存(cun)條件(jian)：
14℃或－20℃樣(yang)品(pin)收集(ji)、處理及保存(cun)方法
1. 血(xue)清：使用不(bu)含熱原(yuan)和內(nei)毒(du)素的試(shi)管(guan)，操作過程中(zhong)避(bi)免(mian)任(ren)何細胞刺激，收集(ji)血(xue)液後，3000 轉離(li)心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)將(jiang)血(xue)清和(he)紅(hong)細胞迅速小心地(di)分(fen)離(li)。
2. 血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬酸(suan)鹽(yan)或肝素抗(kang)凝。3000 轉離(li)心(xin)30 分(fen)鐘(zhong)取上清。
3. 細胞上清液(ye)：3000 轉離(li)心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)去除顆粒(li)和(he)聚(ju)合物。
4. 組(zu)織勻(yun)漿(jiang)：將(jiang)組(zu)織加(jia)入(ru)適量生理鹽(yan)水搗(dao)碎(sui)。3000 轉離(li)心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)取上清。
5. 保存(cun)：如(ru)果樣(yang)本收集(ji)後不及時(shi)檢測，請按(an)壹次(ci)用量分(fen)裝(zhuang)，凍存(cun)於(yu)-20℃，避(bi)免(mian)反(fan)復凍融，在(zai)室溫(wen)下解凍並確保樣品(pin)均(jun)勻地(di)充(chong)分(fen)解凍。

特點：
1. 即(ji)開(kai)即(ji)用，用戶(hu)只需要(yao)提(ti)供(gong)病毒(du)樣品(pin)。
2. 根據(ju)地(di)黃(huang)保守序列設(she)計的專(zhuan)壹性(xing)引物，與(yu)相關病毒(du)無交叉(cha)反(fan)應。
3. 靈(ling)敏(min)度(du)可以(yi)達(da)到幾百拷(kao)貝/反(fan)應。
4. 壹管(guan)式熒(ying)光定(ding)量 PCR 檢測，避(bi)免(mian)後續汙染(ran)。
5. 本(ben)試(shi)劑盒足夠 50 次(ci) 20μL 反(fan)應體系(xi)的熒(ying)光定(ding)量 PCR。
6. 本(ben)產(chan)品(pin)只(zhi)適用於(yu)科研(yan)，不(bu)能用於(yu)臨床(chuang)診斷(duan)。

使用方法：
壹、樣(yang)品(pin)采(cai)集(ji)：
1、食(shi)品(pin)樣(yang)品(pin)：樣(yang)品(pin)的采(cai)集(ji)與(yu)預(yu)培養按(an)照樣品(pin)的采(cai)集(ji)與(yu)預(yu)培養按(an)照《食(shi)品(pin)衛(wei)生(sheng)微(wei)生(sheng)物學(xue)檢驗(yan)阪崎(qi)腸桿菌檢驗(yan)要(yao)求進行(xing)。
2、血(xue)液樣(yang)品(pin)：用無菌註(zhu)射(she)器抽(chou)取受檢者(zhe)靜(jing)脈(mai)血(xue)2mL，註(zhu)入(ru)無菌EDTA2Na(或檸(ning)檬酸(suan)鈉(na))抗(kang)凝管(guan)，立即(ji)混(hun)勻。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品(pin)：取糞(fen)便(bian)置(zhi)於滅(mie)菌(jun)的收集(ji)管(guan)中(zhong)送檢。
4、病竈(zao)部(bu)位樣品(pin)：取發(fa)病部位新鮮滲(shen)出物(wu)、粘液(ye)膿(nong)血(xue)送檢。
壹、稀釋(shi) PCR 陽(yang)性(xing)對照（以(yi) 10E2-10E7 拷(kao)貝/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍(bei)稀釋(shi)度(du)為例）
1. 註(zhu)意(yi)：由(you)於(yu)標(biao)準(zhun)品(pin)濃(nong)度(du)非常(chang)高(gao)，因此下(xia)列稀釋(shi)操(cao)作壹定(ding)要(yao)在(zai)獨(du)立的區域進行(xing)，千(qian)萬不(bu)能汙染(ran)樣品(pin)或本(ben)試(shi)劑盒的其他成(cheng)分(fen)）。為增(zeng)加(jia)產(chan)品(pin)穩(wen)定(ding)性和(he)避(bi)免(mian)擴散傳(chuan)染(ran)性病原(yuan)，本產(chan)品(pin)不(bu)提(ti)供(gong)活體(ti)樣品(pin)做(zuo)陽(yang)性(xing)對照，只提(ti)供(gong)可以(yi)直(zhi)接(jie)使用的 DNA段(duan)作(zuo)為陽(yang)性(xing)對照。
2. 標(biao)記 6 個(ge)離(li)心(xin)管(guan)，分(fen)別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭(tou)分(fen)別加(jia)入(ru) 45 μL 熒(ying)光 PCR 模板(ban)稀釋(shi)液(ye)（用帶芯槍頭(tou)，下同）。
4. 在(zai) 7 號管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性(xing)對照，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de)1×10E7 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性(xing)對照。放(fang)冰(bing)上待(dai)用。
5. 換(huan)槍頭(tou)，在(zai) 6 號管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性(xing)對照(上步(bu)稀釋(shi)所(suo)得(de))，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性(xing)對照。放(fang)冰(bing)上待(dai)用。
6. 換(huan)槍頭(tou)，在(zai) 5 號管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性(xing)對照到 5 號管(guan)中(zhong)，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E5 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性(xing)對照。放(fang)冰(bing)上待(dai)用。
7. 重(zhong)復(fu)上面(mian)的操(cao)作(zuo)直(zhi)到得(de)到 6 個(ge)稀釋(shi)度(du)的陽(yang)性(xing)對照。放(fang)冰(bing)上待(dai)用。
註(zhu)：上述樣(yang)品(pin)建(jian)議(yi)經過(guo)增(zeng)菌(jun)後，收集(ji)培(pei)養物用於(yu)檢測。 
二(er)、DNA提(ti)取：
可(ke)采(cai)用PCR試(shi)劑盒配(pei)備的DNA抽(chou)提(ti)液(ye)，按(an)以(yi)下(xia)說(shuo)明(ming)進行(xing)DNA核(he)酸(suan)的粗(cu)提(ti)。也可采(cai)購(gou)上海澤(ze)葉(ye)生物科(ke)技有(you)限公司生產(chan)的DNA提(ti)取試(shi)劑盒(過柱法(fa)-熒(ying)光配(pei)套)或其他合(he)適的商業化(hua)產品(pin)，並(bing)按(an)照相應試(shi)劑盒說(shuo)明(ming)進行(xing)操(cao)作(zuo)。
1、液體培養物：取液體培(pei)養物100μL加(jia)到1.5mL無菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，8000rpm離(li)心(xin)3min，盡(jin)量吸(xi)棄上清，加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取上清5μL進行(xing)PCR反(fan)應。
2、固(gu)體培養物：挑(tiao)取單克(ke)隆菌(jun)落與(yu)50μL DNA抽(chou)提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取上清5μL進行(xing)PCR反(fan)應。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品(pin)：挑(tiao)取米(mi)粒(li)大(da)小糞(fen)便(bian)於(yu)滅(mie)菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，加(jia)入(ru)0.5mL生(sheng)理(li)鹽(yan)水，振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)，13000rpm離(li)心(xin)3分(fen)鐘(zhong)，棄上清，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取上清5μL進行(xing)PCR反(fan)應。
4、其他液(ye)體(ti)標本：取標本2-3mL，13000rpm離(li)心(xin)3min，棄上清，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取上清5μL進行(xing)PCR反(fan)應。
註(zhu)：陽(yang)性(xing)對照和陰性(xing)對照為已(yi)經抽(chou)提(ti)好的核(he)酸(suan)(無需提(ti)取)，直(zhi)接(jie)取5μL加(jia)入(ru)到反(fan)應體系(xi)中(zhong)即(ji)可(ke)。由(you)於(yu)陽(yang)性(xing)對照濃度(du)較(jiao)高(gao)，建議(yi)在(zai)樣品(pin)制(zhi)備區域加(jia)入(ru)陽(yang)性(xing)對照。 
軟(ruan)骨細胞Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105方(1ml)普伐(fa)他汀(ting)1,1,3,3-TetramethylbutylaminePravastatin 1,1,3,3-Tetramethylbutylamine質(zhi)量規格：美(mei)國(guo)進口(kou)

JTB Others Human 人(ren) Jumping anslocation Breakpoi / JTB 人(ren)細胞裂解液 (陽(yang)性(xing)對照) 普伐(fa)他汀(ting)內(nei)酯Pravastatin Lactone質(zhi)量規格：美(mei)國(guo)進口(kou)

615小(xiao)鼠(shu)網織(zhi)細胞性白(bai)血(xue)病瘤株;L615波尼(ni)龍(long)-d6Prednisolone-d6質(zhi)量規格：美(mei)國(guo)進口(kou)

SK-LU-1細胞，人(ren)低(di)分(fen)化(hua)肺腺癌(ai)細胞 大鼠(shu)腎成(cheng)纖(xian)微(wei)細胞,NRK-49F細胞 CL-0106HFL1(人(ren)肺成纖(xian)維(wei)細胞)5×106cells/瓶(ping)×2波尼(ni)龍(long)21-半琥珀(po)酸(suan)鈉(na)鹽(yan)Prednisolone 21-hemisuccinate  salt質(zhi)量規格：美(mei)國(guo)進口(kou)

T84(人(ren)結腸腺(xian)癌(ai)肺轉移(yi)細胞) 5×106cells/瓶(ping)×26α-甲基波尼(ni)龍(long)21-醋(cu)酸(suan)6α-Methylprednisolone 21-Acetate質(zhi)量規格：美(mei)國(guo)進口(kou)
狗(gou)肺成纖(xian)維(wei)樣細胞;DogL12-芴(wu)(>95.0%(T))2-Fluorenecarboxaldehyde質(zhi)量規格：>95.0%(T)

GLIPR1 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) GLIPR1 / RTVP1 人(ren)細胞裂解液 (陽(yang)性(xing)對照) 2-羥(qiang)基-9-芴(wu)酮(tong)(>90.0%(HPLC)(T))2-Hydroxy-9-fluorene質(zhi)量規格：>90.0%(HPLC)(T)

破(po)骨(gu)細胞Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105方(1ml)2,6-二溴(xiu)蒽醌(kun)(>95.0%(HPLC))2,6-Dibromoanthraquine質(zhi)量規格：>95.0%(HPLC)

Cyc-tAg細胞，小鼠(shu)T細胞瘤(SV40T抗(kang)原(yuan)轉染(ran)) 人(ren)卵巢(chao)癌(ai)耐藥(yao)株,A2780/Taxol細胞 人(ren)肺動脈(mai)成(cheng)纖(xian)維細胞裂解物HPAFL2,7-二(er)溴(xiu)芴(wu)(>98.0%(GC))2,7-Dibromofluorene質(zhi)量規格：>98.0%(GC)

非(fei)洲綠猴腎細胞;GL-372,7-二溴(xiu)-9-芴(wu)酮(tong)(>98.0%(GC))2,7-Dibromo-9-fluorene質(zhi)量規格：>98.0%(GC)
MDBK (NBL-1)牛(niu)腎細胞 MDBK (NBL-1) of bovine kidney cell RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS維生(sheng)素(su) D3 ((膽骨化(hua)醇)質(zhi)量規格：>98.0%(HPLC)4000萬(wan)IU/gVitamin D3

IL18 Protein Mouse 重(zhong)組(zu)小鼠(shu) IL18 / IL-18 蛋白帕(pa)唑(zuo)帕(pa)尼(ni)鹽(yan)酸(suan)鹽(yan)質(zhi)量規格：>99%,BR,可(ke)用於(yu)細胞培養 Pazopanib HCl

NCI-H524(人(ren)非小(xiao)細胞肺癌(ai)細胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 MCF7(癌(ai)細胞)質(zhi)量規格：>97%,BR,無水物(wu)Tiotropium bromide anhydrous

CL-0440SK-MEL-1(人(ren)皮膚色素(su)瘤(liu)細胞)5×106cells/瓶(ping)×2氨標準(zhun)溶液（1000μg/ml,溶劑:水(shui)）質(zhi)量規格：1000μg/ml,溶劑:水(shui)Ammonia solution

TNFSF11 Others Human 人(ren) RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 人(ren)細胞裂解液 (陽(yang)性(xing)對照) 酰(xian)嘧磺(huang)隆（標(biao)準(zhun)品(pin)）質(zhi)量規格：分(fen)析(xi)標準(zhun)品(pin)Amidosulfuron
豬苓(ling)染(ran)料(liao)法PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑盒*MIF Protein Mouse 重(zhong)組(zu)小鼠(shu) MIF / Migration Inhibitory Factor 蛋白 (His 標(biao)簽(qian))4,4'-二氯(lv)二苯(ben)碸(>98.0%(GC))質(zhi)量規格：>98.0%(GC)4,4'-Dichlorodiphenyl Sulfone

人(ren)胚胎(tai)胰(yi)腺(xian)組(zu)織來(lai)源(yuan)細胞;CCC-HPE-2 人(ren)支氣管(guan)平滑肌(ji)細胞*培養基 100mL雙[3,5-二(er)溴(xiu)-4-(2-羥乙(yi)氧(yang)基)苯(ben)基]碸(>96.0%(GC))質(zhi)量規格：>96.0%(GC)Bis[3,5-dibromo-4-(2-hydroxy
實驗(yan)流程：
1. 整(zheng)個(ge)檢(jian)測過程應嚴格按(an)照本說明(ming)書要(yao)求分(fen)別在(zai)試(shi)劑準(zhun)備區、樣本(ben)處理區和PCR擴增(zeng)區進行(xing)操(cao)作(zuo)，各(ge)區實驗(yan)服、儀(yi)器 、耗材(cai)應獨(du)立使用，不(bu)能混(hun)用；實驗(yan)用吸(xi)頭(tou)采(cai)用帶濾芯吸(xi)頭(tou)；樣(yang)本(ben)處理區應配(pei)有生物(wu)安全櫃(gui)，樣(yang)本(ben)處理在(zai)生物(wu)安全櫃(gui)中(zhong)進行(xing)操(cao)作(zuo)；三(san)個(ge)區應該配(pei)有紫外線殺菌裝(zhuang)置(zhi)。
2. 為避(bi)免(mian)RNA降解，樣本處理過(guo)程應在(zai)0-4℃條件(jian)下(xia)操作，且完成(cheng)實驗(yan)後立即(ji)上機檢(jian)測；樣本(ben)處理過(guo)程中(zhong)使用的器(qi)具(ju)耗(hao)材(cai)應經過無核酶(mei)處理。

3. 每(mei)次(ci)實驗(yan)應該設置(zhi)陰、陽(yang)性(xing)對照。
4. 試(shi)劑盒所(suo)有(you)試(shi)劑在(zai)使用前應該在(zai)常溫(wen)下(xia)充(chong)分(fen)融(rong)化(hua)混勻(yun)，並應瞬時(shi)離(li)心(xin)。
5. 試(shi)劑盒內(nei)所(suo)配(pei)陰性和(he)陽(yang)性(xing)對照在(zai)壹次(ci)使用前應全部轉移(yi)至(zhi)標(biao)本(ben)準(zhun)備區，並單(dan)獨(du)存(cun)放(fang)。
6. 為防止熒(ying)光幹擾，應避(bi)免(mian)裸(luo)手直(zhi)接(jie)接(jie)觸(chu)PCR反(fan)應管(guan)，並應避(bi)免(mian)在(zai)PCR反(fan)應管(guan)上進行(xing)任(ren)何標(biao)記。
7. 儀(yi)器 擴增(zeng)相關參數(shu)應按(an)照本說明(ming)書相關要(yao)求進行(xing)設(she)置(zhi)；不同批號試(shi)劑不能(neng)混(hun)用。
8. ABI系(xi)列熒(ying)光定(ding)量PCR儀(yi)參數(shu)設(she)置(zhi)中(zhong)不選(xuan)ROX校正，淬滅(mie)基因選(xuan)擇None。
9. 實驗(yan)過程中(zhong)產品(pin)的廢棄物應該進行(xing)無害化(hua)處理後方可丟棄。