烏梅(mei)染料法PCR鑒(jian)定(ding)試劑盒(he)*

特點(dian)：
1. 即開(kai)即用，用戶(hu)只需(xu)要提供病毒樣品。
2. 根據(ju)地(di)黃(huang)保守序列設計的(de)專壹性(xing)引(yin)物(wu)，與(yu)相關病毒無(wu)交(jiao)叉(cha)反應(ying)。
3. 靈(ling)敏度(du)可(ke)以(yi)達(da)到幾(ji)百拷(kao)貝/反應(ying)。
4. 壹管(guan)式(shi)熒(ying)光定(ding)量(liang) PCR 檢測(ce)，避免(mian)後續(xu)汙(wu)染(ran)。
5. 本(ben)試劑盒(he)足夠(gou) 50 次(ci) 20μL 反應(ying)體(ti)系的(de)熒光定(ding)量(liang) PCR。
6. 本(ben)產品只適(shi)用於科(ke)研(yan)，不(bu)能用於臨(lin)床(chuang)診斷。

使用方法：
壹、樣(yang)品采(cai)集(ji)：
1、食品樣品：樣品的(de)采(cai)集(ji)與(yu)預(yu)培養(yang)按(an)照樣(yang)品的(de)采(cai)集(ji)與(yu)預(yu)培養(yang)按(an)照《食品衛(wei)生(sheng)微(wei)生物(wu)學(xue)檢驗(yan)阪崎腸桿菌檢(jian)驗(yan)要求(qiu)進(jin)行(xing)。
2、血液樣(yang)品：用無(wu)菌(jun)註(zhu)射器抽取(qu)受檢(jian)者靜脈血2mL，註入無(wu)菌(jun)EDTA2Na(或(huo)檸檬酸鈉)抗凝(ning)管，立(li)即混勻。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品：取(qu)糞(fen)便(bian)置(zhi)於滅(mie)菌的(de)收(shou)集(ji)管中(zhong)送(song)檢。
4、病竈部位樣品：取(qu)發病(bing)部位新鮮滲出(chu)物(wu)、粘液(ye)膿血送(song)檢。
壹、稀(xi)釋(shi) PCR 陽性(xing)對照（以(yi) 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋(shi)度為例）
1. 註意(yi)：由(you)於標準(zhun)品濃度(du)非常高，因(yin)此(ci)下列稀(xi)釋操(cao)作壹定(ding)要在(zai)獨立(li)的(de)區域(yu)進(jin)行(xing)，千(qian)萬不(bu)能汙(wu)染(ran)樣品或(huo)本(ben)試劑盒(he)的(de)其他(ta)成(cheng)分(fen)）。為增加(jia)產品穩定(ding)性(xing)和(he)避免(mian)擴(kuo)散傳染性(xing)病(bing)原(yuan)，本(ben)產品不(bu)提供活(huo)體(ti)樣品做陽性(xing)對照，只(zhi)提供可(ke)以(yi)直接(jie)使用的(de) DNA段作為陽性(xing)對照。
2. 標記(ji) 6 個離(li)心管(guan)，分(fen)別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭(tou)分別(bie)加(jia)入 45 μL 熒光 PCR 模板稀(xi)釋(shi)液（用帶芯槍頭(tou)，下同）。
4. 在 7 號管中(zhong)加(jia)入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的(de)陽性(xing)對照，充(chong)分(fen)震蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得1×10E7 拷貝/μL 的(de)陽性(xing)對照。放(fang)冰(bing)上待用。
5. 換槍頭(tou)，在(zai) 6 號管中(zhong)加(jia)入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的(de)陽性(xing)對照(上步稀(xi)釋(shi)所得)，充分(fen)震蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得 1×10E6 拷貝/μL 的(de)陽性(xing)對照。放(fang)冰(bing)上待用。
6. 換槍頭(tou)，在(zai) 5 號管中(zhong)加(jia)入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的(de)陽性(xing)對照到(dao) 5 號管中(zhong)，充分(fen)震(zhen)蕩 1 分鐘(zhong)，得 1×10E5 拷貝/μL 的(de)陽性(xing)對照。放(fang)冰(bing)上待用。
7. 重(zhong)復(fu)上面的(de)操作直到得到 6 個稀(xi)釋度(du)的(de)陽性(xing)對照。放(fang)冰(bing)上待用。
註：上述樣品建議(yi)經過(guo)增菌後，收(shou)集(ji)培養(yang)物(wu)用於檢(jian)測(ce)。 
二、DNA提取(qu)：
可(ke)采(cai)用PCR試劑盒(he)配備(bei)的(de)DNA抽提液，按以(yi)下說明進(jin)行(xing)DNA核酸的(de)粗(cu)提。也可(ke)采(cai)購(gou)上海(hai)澤(ze)葉生(sheng)物(wu)科技有(you)限(xian)公(gong)司生(sheng)產的(de)DNA提取(qu)試劑盒(he)(過柱法-熒光配套)或(huo)其(qi)他合(he)適的(de)商業(ye)化(hua)產品，並(bing)按照相應(ying)試劑盒(he)說明進(jin)行(xing)操作。
1、液體(ti)培養(yang)物(wu)：取(qu)液體(ti)培養(yang)物(wu)100μL加(jia)到1.5mL無(wu)菌(jun)離(li)心管(guan)中(zhong)，8000rpm離(li)心3min，盡量(liang)吸(xi)棄(qi)上清(qing)，加(jia)入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min，取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
2、固體(ti)培養(yang)物(wu)：挑(tiao)取(qu)單克隆菌落與(yu)50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min，取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品：挑(tiao)取(qu)米(mi)粒(li)大(da)小(xiao)糞(fen)便(bian)於滅(mie)菌離(li)心管(guan)中(zhong)，加(jia)入0.5mL生理(li)鹽(yan)水(shui)，振(zhen)蕩(dang)混勻，13000rpm離(li)心3分鐘(zhong)，棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加(jia)入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
4、其他(ta)液體(ti)標本(ben)：取(qu)標本(ben)2-3mL，13000rpm離(li)心3min，棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加(jia)入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
註：陽性(xing)對照和(he)陰性(xing)對照為已(yi)經抽(chou)提好的(de)核酸(無(wu)需(xu)提取(qu))，直接(jie)取(qu)5μL加(jia)入到反(fan)應(ying)體(ti)系中(zhong)即可(ke)。由(you)於陽性(xing)對照濃(nong)度(du)較(jiao)高(gao)，建議(yi)在樣(yang)品制備區(qu)域(yu)加(jia)入陽性(xing)對照。 
實(shi)驗(yan)流(liu)程：
1. 整個(ge)檢測(ce)過程應(ying)嚴格按照本(ben)說(shuo)明書(shu)要(yao)求(qiu)分(fen)別在(zai)試劑準(zhun)備(bei)區、樣本(ben)處(chu)理(li)區(qu)和(he)PCR擴(kuo)增區進(jin)行(xing)操作，各(ge)區實(shi)驗(yan)服、儀(yi)器 、耗材(cai)應(ying)獨立(li)使用，不(bu)能混用；實(shi)驗(yan)用吸(xi)頭采(cai)用帶濾芯吸(xi)頭；樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)區(qu)應(ying)配有(you)生(sheng)物(wu)安全(quan)櫃，樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)在(zai)生物(wu)安全(quan)櫃中(zhong)進(jin)行(xing)操作；三(san)個區應(ying)該配(pei)有(you)紫(zi)外(wai)線(xian)殺(sha)菌裝(zhuang)置(zhi)。
2. 為避(bi)免(mian)RNA降解(jie)，樣本(ben)處(chu)理(li)過(guo)程應(ying)在0-4℃條件(jian)下操作，且(qie)完成(cheng)實(shi)驗(yan)後立(li)即上機(ji)檢(jian)測；樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)過(guo)程中(zhong)使用的(de)器具耗材(cai)應(ying)經過(guo)無(wu)核酶處(chu)理(li)。
3. 每(mei)次(ci)實(shi)驗(yan)應(ying)該設(she)置(zhi)陰、陽性(xing)對照。
4. 試劑盒(he)所有(you)試劑在使用前應(ying)該在(zai)常溫下充分(fen)融(rong)化(hua)混勻，並(bing)應(ying)瞬時離(li)心。
5. 試劑盒(he)內所配(pei)陰性(xing)和(he)陽性(xing)對照在(zai)壹次(ci)使用前應(ying)全(quan)部轉(zhuan)移至(zhi)標本(ben)準(zhun)備(bei)區，並(bing)單獨存(cun)放(fang)。
6. 為防(fang)止(zhi)熒光幹(gan)擾(rao)，應(ying)避免(mian)裸(luo)手直接(jie)接(jie)觸(chu)PCR反應(ying)管，並(bing)應(ying)避免(mian)在PCR反應(ying)管上進(jin)行(xing)任何(he)標記(ji)。
7. 儀(yi)器 擴(kuo)增相關參數(shu)應(ying)按照本(ben)說(shuo)明書(shu)相關要求(qiu)進(jin)行(xing)設置(zhi)；不(bu)同(tong)批號試劑不(bu)能混用。
8. ABI系列(lie)熒光定(ding)量(liang)PCR儀(yi)參數(shu)設(she)置(zhi)中(zhong)不(bu)選ROX校(xiao)正，淬(cui)滅(mie)基(ji)因(yin)選擇(ze)None。
9. 實(shi)驗(yan)過程中(zhong)產品的(de)廢棄(qi)物(wu)應(ying)該進(jin)行(xing)無(wu)害(hai)化(hua)處(chu)理(li)後(hou)方可(ke)丟棄(qi)。
儲存(cun)條件(jian)：
14℃或(huo)－20℃樣品收(shou)集(ji)、處理及保存方法
1. 血清：使用不(bu)含熱原(yuan)和(he)內毒素的(de)試管，操作過(guo)程中(zhong)避免(mian)任何(he)細(xi)胞刺激，收(shou)集(ji)血液後(hou)，3000 轉(zhuan)離(li)心10 分鐘(zhong)將血清和(he)紅細(xi)胞迅速小(xiao)心(xin)地分離(li)。
2. 血漿(jiang)：EDTA、檸檬酸鹽(yan)或(huo)肝素抗凝(ning)。3000 轉(zhuan)離(li)心30 分鐘(zhong)取(qu)上清(qing)。
3. 細胞(bao)上清(qing)液(ye)：3000 轉(zhuan)離(li)心10 分鐘(zhong)去除顆粒和(he)聚合(he)物(wu)。
4. 組織勻漿(jiang)：將(jiang)組織加(jia)入適量(liang)生理(li)鹽(yan)水(shui)搗碎(sui)。3000 轉(zhuan)離(li)心10 分鐘(zhong)取(qu)上清(qing)。
5. 保存：如果樣(yang)本(ben)收(shou)集(ji)後不(bu)及(ji)時檢測，請按壹次(ci)用量(liang)分裝(zhuang)，凍(dong)存(cun)於-20℃，避免(mian)反復(fu)凍(dong)融(rong)，在(zai)室(shi)溫下解(jie)凍並(bing)確保樣品均勻(yun)地(di)充分解(jie)凍。
小(xiao)鼠(shu)腦脊(ji)神(shen)經元(yuan)MN-r鎢粉（200目(mu)）(>99.8%,BR)Tungsten powder質(zhi)量(liang)規格(ge)：>99.8%,BR

LGMN Others Sus scrofa (Pig) 野豬 (Pig) Legumain / LGMN / AEP 人細(xi)胞裂(lie)解(jie)液 (陽性(xing)對照) 鎢酸(>98%,BC)Tungstic (VI) acid質(zhi)量(liang)規格(ge)：>98%,BC

人胚(pei)腎細胞;293 [HEK-293]震顫真菌(jun)(>98%,BC)Verruculogen from Penicillium verruculosum質(zhi)量(liang)規格(ge)：>98%,BC

正常大鼠(shu)腎細胞;NRK-52E 胸(xiong)膜細胞瘤(liu)，SMC-1細胞(bao) RIN-m細胞(bao)，褐鼠(shu)胰島(dao)素瘤(liu)上皮(pi)細(xi)胞羊毛(mao)脂Wool fat質(zhi)量(liang)規格(ge)：BR

Hep-2, 人喉癌(ai)細胞(bao)系 Human5-溴-4-氯-3-吲哚基(ji)-Β-D-鹽(yan)X-GLUC,  salt質(zhi)量(liang)規格(ge)：>98%,分子生(sheng)物(wu)學(xue)級
前列(lie)腺上皮(pi)細(xi)胞生(sheng)長添加(jia)物(wu)PEpiCGSL-天冬(dong)氨酸-β-芐酯(zhi)/L-天冬(dong)氨酸-4-芐酯(zhi)L-Aspartic acid β-benzyl ester質(zhi)量(liang)規格(ge)：>98%,BR

FGFR2 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) FGFR2 / CD332 人細(xi)胞裂(lie)解(jie)液 (陽性(xing)對照) L-苯(ben)L-Phenylalanine質(zhi)量(liang)規格(ge)：>99%,BR

人神(shen)經母(mu)細(xi)胞(bao)瘤(liu)細胞;SH-SY5YL-天冬(dong)酰胺;L-天冬(dong)酰壹水(shui)  L-Asparagine Mohydrate質(zhi)量(liang)規格(ge)：>99%,BR,壹水(shui)

大鼠(shu)垂體(ti)瘤(liu)細胞;MMQ 腎上腺(xian)皮(pi)質(zhi)腺癌(ai)細胞(bao)，SW-13細胞(bao) Neuro-2a[N2a;Neuro-2a]細胞(bao)，小(xiao)鼠(shu)腦神(shen)經瘤(liu)細胞L-(標準(zhun)品)L-Mine質(zhi)量(liang)規格(ge)：>98%,標準(zhun)品

786-O [786-0], 人腎透(tou)明腺(xian)癌(ai)細胞(bao) HumanL-L-Mine質(zhi)量(liang)規格(ge)：>98%,BR
大鼠(shu)周神(shen)經成(cheng)纖(xian)維細胞(RPNF)(5×105)麻(ma)楓(feng)樹酚酮(tong)B（標準(zhun)品）質(zhi)量(liang)規格(ge)：HPLC≥98%，標準(zhun)品 Jatropholone B

非洲(zhou)綠猴腎細胞系/HCV-NS3;Vero-HCV-NS33β-乙酰氧基(ji)-7,25-甘(gan)遂(sui)二1-24(R)-醇(chun)（標準(zhun)品）質(zhi)量(liang)規格(ge)：HPLC≥98%，標準(zhun)品3β-acetoxy-eupha- 7,25-dien-24(R)-ol

615小(xiao)鼠(shu)前胃(wei)癌(ai)瘤(liu)株;Fc 小(xiao)鼠(shu)腎小(xiao)管(guan)上皮(pi)細(xi)胞*培養(yang)基(ji) 100mL11-羥基(ji)柳杉酚（標準(zhun)品）質(zhi)量(liang)規格(ge)：HPLC≥98%，標準(zhun)品11-hydroxy-sugiol

MEF, 小(xiao)鼠(shu)胚(pei)胎(tai)成(cheng)纖(xian)維細胞 MouseL-乳酸(標準(zhun)品)質(zhi)量(liang)規格(ge)：≥98%,標準(zhun)品L-(+)-Lactic acid

CDH16 Others Human 人 CDH16 / Cadherin-16 人細(xi)胞裂(lie)解(jie)液 (陽性(xing)對照) 二聚體(ti)雜質(zhi)質(zhi)量(liang)規格(ge)：美(mei)國(guo)進(jin)口(kou)Simvastatin Dimer Impurity
烏梅(mei)染料法PCR鑒(jian)定(ding)試劑盒(he)*615小(xiao)鼠(shu)癌(ai)瘤(liu)株;Ca763 小(xiao)鼠(shu)卵(luan)巢(chao)成(cheng)纖(xian)維細胞*培養(yang)基(ji) 100mL1-本(ben)基(ji)-3-吡唑(zuo)烷酮(tong)50U

MN-s, 小(xiao)鼠(shu)紋狀體(ti)神經元(yuan) Mouse2,4-二錄(lu)酚(fen) 2,4-Dichlorophql 10-83-

CES2 Others Human 人 CES2 / Carboxylesterase-2 人細(xi)胞裂(lie)解(jie)液 (陽性(xing)對照) DEAE葡聚糖5克

人胚(pei)肺(fei)細胞VA13細胞(bao);WI-38 VA13亞系2RA鉍(bi)粒5克

GFRA1 Others Rat 大鼠(shu) GFRA1 / GFR alpha-1 人細(xi)胞裂(lie)解(jie)液 (陽性(xing)對