元胡染(ran)料法PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑盒(he)說(shuo)明(ming)書(shu)

實(shi)時(shi)熒光定(ding)量(liang)PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是(shi)指(zhi)在(zai)PCR反應(ying)體(ti)系(xi)中(zhong)加(jia)入(ru)熒光基(ji)團(tuan)，利用熒光信號積(ji)累實(shi)時監(jian)測整個PCR進程(cheng)，通(tong)過標準曲(qu)線(xian)對未知模板進行(xing)定(ding)量(liang)分(fen)析的(de)方法。實時(shi)熒光定(ding)量(liang)PCR的(de)化學原(yuan)理(li)包括(kuo)探(tan)針(zhen)類(lei)和(he)非(fei)探(tan)針(zhen)類(lei)兩類(lei)，探(tan)針(zhen)類(lei)是(shi)利用與(yu)靶(ba)細(xi)胞序(xu)列特異(yi)性(xing)雜(za)交的探針(zhen)來(lai)指(zhi)示(shi)擴增(zeng)產(chan)物的(de)增(zeng)加(jia)，非探(tan)針(zhen)類(lei)是(shi)利用熒光染(ran)料(liao)或者(zhe)特異(yi)性(xing)設計(ji)的(de)引(yin)物來(lai)指示(shi)擴增(zeng)的增(zeng)加(jia)。運用該(gai)技術(shu)可(ke)以對DNA、RNA樣(yang)品(pin)進行(xing)定(ding)量(liang)（包括(kuo)定(ding)量(liang)和相對定(ding)量(liang)）和定(ding)性(xing)分(fen)析。
主(zhu)要服務(wu)：DNA或(huo)RNA的(de)定(ding)量(liang)分(fen)析、基(ji)因(yin)表(biao)達(da)差異(yi)分(fen)析、基(ji)因(yin)分(fen)型。
主(zhu)要技術(shu)：引(yin)物設計(ji)、RNA提取(qu)、cDNA合(he)成(cheng)、qPCR

產(chan)品(pin)及特點(dian)：
本(ben)產(chan)品(pin)包含(han)Taq DNA聚合(he)酶、dNTPs、MgCl2、反應(ying)緩(huan)沖液，濃度(du)為(wei)2×。具(ju)有(you)快(kuai)速(su)簡(jian)便(bian)、靈(ling)敏(min)度(du)高(gao)、特異(yi)性(xing)強、穩定(ding)性(xing)好(hao)等(deng)優點(dian)，可大(da)限(xian)度(du)的(de)減少人為誤(wu)差(cha)。使(shi)用時(shi)只需(xu)加(jia)入(ru)DNA模板和引(yin)物既(ji)可(ke)。使(shi)用方(fang)便(bian)快(kuai)捷(jie)，能(neng)避免(mian)PCR操(cao)作過程中的汙染(ran)，使(shi)用時(shi)只需(xu)取(qu)適量(liang)2×TaqPCR MasterMix溶液，加(jia)入(ru)模板和引(yin)物，並(bing)加(jia)入(ru)去離(li)子(zi)水補(bu)足(zu)體積，使(shi)MasterMix溶液濃度(du)為(wei)1×即(ji)可(ke)進行(xing)反應(ying)。使(shi)用前請(qing)保(bao)證充分(fen)溶解(jie)並(bing)混勻(yun)，操(cao)作需(xu)在(zai)冰(bing)上(shang)進行(xing)。本產(chan)品(pin)就(jiu)是(shi)為(wei)此(ci)目(mu)的(de)根據(ju) PCR 原(yuan)理(li)開發的試(shi)劑盒(he)。
具(ju)有(you)高(gao)靈(ling)敏(min)度(du)、高(gao)特異(yi)性(xing)、高穩定(ding)性(xing)
可(ke)在(zai)同(tong)壹(yi)個(ge)管(guan)子中高(gao)特異(yi)性(xing)的執(zhi)行(xing)cDNA合(he)成(cheng)與基(ji)於(yu)探針(zhen)的(de)qPCR反應(ying)。更(geng)多(duo)優(you)點(dian)如(ru)1.的(de)特異(yi)性(xing)；2.多(duo)重(zhong)反應(ying)（高(gao)通量(liang)）；3.反應(ying)體(ti)系(xi)配(pei)置(zhi)，無(wu)需(xu)冰塊；4.無(wu)懼(ju)高(gao)GC含(han)量(liang)PCR；5.預(yu)防交叉(cha)汙染；6.廣泛的(de)設備(bei)兼(jian)容性(xing)。
PCR反應(ying)的(de)特異(yi)性(xing)決定(ding)因(yin)素為：
①引(yin)物與(yu)模板DNA特異(yi)正(zheng)確(que)的結(jie)合(he)；
②堿(jian)基(ji)配(pei)對原(yuan)則(ze)；
③Taq DNA聚合(he)酶合(he)成(cheng)反應(ying)的(de)忠(zhong)實(shi)性(xing)；
④靶(ba)基(ji)因(yin)的特異(yi)性(xing)與保(bao)守性(xing)。
其(qi)中(zhong)引(yin)物與(yu)模板的正(zheng)確(que)結(jie)合(he)是(shi)關鍵(jian)。引(yin)物與(yu)模板的結(jie)合(he)及引(yin)物鏈(lian)的延伸(shen)是(shi)遵(zun)循堿(jian)基(ji)配(pei)對原(yuan)則(ze)的(de)。聚合(he)酶合(he)成(cheng)反應(ying)的(de)忠(zhong)實(shi)性(xing)及Taq DNA聚合(he)酶耐(nai)高(gao)溫性(xing)，使(shi)反應(ying)中(zhong)模板與引(yin)物的(de)結(jie)合(he)(復(fu)性(xing))可(ke)以在(zai)較(jiao)高(gao)的(de)溫度(du)下(xia)進行(xing)，結(jie)合(he)的(de)特異(yi)性(xing)大大(da)增(zeng)加(jia)，被擴增(zeng)的靶基(ji)因(yin)片段也就(jiu)能(neng)保(bao)持很(hen)高的正(zheng)確(que)度(du)。再(zai)通過選(xuan)擇(ze)特異(yi)性(xing)和保(bao)守性(xing)高(gao)的(de)靶(ba)基(ji)因(yin)區，其(qi)特異(yi)性(xing)程度(du)就(jiu)更(geng)高(gao)。
(2) 靈(ling)敏(min)度(du)高(gao)
PCR產(chan)物的(de)生成(cheng)量(liang)是以指數(shu)方式增(zeng)加(jia)的，能(neng)將(jiang)皮克(ke)(pg=10-12g)量(liang)級的起始(shi)待測模板擴增(zeng)到(dao)微(wei)克(ke)(ug=10-6g)水(shui)平(ping)。能(neng)從(cong)100萬(wan)個細(xi)胞中(zhong)檢出(chu)壹個(ge)靶(ba)細(xi)胞；在(zai)病(bing)毒(du)的檢(jian)測中，PCR的(de)靈(ling)敏(min)度(du)可(ke)達3個(ge)RFU(空(kong)斑(ban)形(xing)成(cheng)單(dan)位)；在(zai)細(xi)菌學(xue)中(zhong)zui小(xiao)檢(jian)出(chu)率為3個(ge)細(xi)菌。
(3) 簡(jian)便(bian)、快(kuai)速(su)
PCR反應(ying)用耐(nai)高(gao)溫的(de)Taq DNA聚合(he)酶，壹(yi)次(ci)性地(di)將反應(ying)液加(jia)好後，即(ji)在(zai)DNA擴增(zeng)液和水(shui)浴(yu)鍋(guo)上(shang)進行(xing)變性-退(tui)火(huo)-延(yan)伸(shen)反應(ying)，壹(yi)般在(zai)2～4 小(xiao)時(shi)完(wan)成(cheng)擴增(zeng)反應(ying)。擴增(zeng)產(chan)物壹(yi)般用電泳(yong)分(fen)析，不(bu)壹定(ding)要用同(tong)位(wei)素，無放射(she)性汙(wu)染(ran)、易(yi)推廣。
(4) 對(dui)標(biao)本(ben)的純(chun)度(du)要求低
不(bu)需(xu)要分(fen)離病(bing)毒(du)或細(xi)菌及培(pei)養(yang)細胞，DNA 粗制品(pin)及總RNA均可(ke)作為擴增(zeng)模板。可直(zhi)接(jie)用臨床標本如(ru)血(xue)液、體腔(qiang)液、洗(xi)嗽液、毛發、細胞、活(huo)PCR技術(shu)概(gai)論。
實(shi)驗(yan)註意(yi)事(shi)項(xiang)：
1）RT-PCR可(ke)以檢測組織、細胞、血(xue)液、細菌等(deng)很(hen)多(duo)材(cai)料(liao)，不(bu)同的(de)樣本(ben)有(you)不(bu)同要求，實驗(yan)前請(qing)充分(fen)溝通確認實(shi)驗(yan)方案和(he)樣(yang)本情(qing)況；
2）客戶盡(jin)可(ke)能(neng)提供實驗(yan)的背(bei)景(jing)信息、物(wu)種、基(ji)因(yin)準確的(de)名稱(cheng)和ID號(hao)；
3）客戶盡(jin)量(liang)不(bu)要提供DNA或(huo)RNA樣(yang)品(pin)。
4）樣(yang)本(ben)保(bao)存於液氮或(huo)幹冰(bing)，也可以保存於Trizol液中。
CL-0125J82(人膀胱癌細(xi)胞)5×106cells/瓶×2酰(xian)基(ji)-β-D-葡萄糖(tang)苷(gan)酸(suan)Telmisartan Acyl-β-D-glucuronide質量(liang)規格(ge)：美國進口(kou)

P3X63-Ag8.653細(xi)胞，鼠(shu)骨(gu)髓瘤(liu)細胞 人Butt`s瘤(liu)細(xi)胞,NAMALWA細(xi)胞 小(xiao)鼠(shu)網織細胞肉瘤;M5076-d4Isoniazid-d4質量(liang)規格(ge)：美國進口(kou)

AsPC-1(人胰(yi)腺癌細(xi)胞) 5×106cells/瓶×2-d3Tiotropium-d3 Bromide質量(liang)規格(ge)：美國進口(kou)

CX3CL1 Others Human 人 CX3CL1 / N 人細胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對照) 去乙(yi)基(ji)鹽(yan)酸(suan)胺(an)酮(tong)-d4Desethyl Amiodarone-d4 質量(liang)規格(ge)：美國進口(kou)

兔(tu)腎細胞;RK-13去乙(yi)基(ji)鹽(yan)酸(suan)胺(an)酮(tong)Desethyl Amiodarone 質量(liang)規格(ge)：美國進口(kou)
人胚肺(fei)細(xi)胞系(xi);KuMA全(quan)反式甲酯(zhi)all-trans Retinoic Acid Methyl Ester質量(liang)規格(ge)：美國進口(kou)

EL4細(xi)胞，瘤(liu)細胞 人結(jie)腸(chang)癌細(xi)胞,SW480細(xi)胞 CM-H045人肝動(dong)脈平(ping)滑(hua)肌(ji)細(xi)胞*培(pei)養(yang)基(ji)100mL13-順(shun)式-甲(jia)酯(zhi)13-cis Retinoic Acid Methyl Ester質量(liang)規格(ge)：美國進口(kou)

Walker氏(shi)癌肉瘤256瘤(liu)株;W2566-FAM ；6-羧基(ji)熒光素6-Carboxyfluorescein質量(liang)規格(ge)：0.95

VLDLR Others Human 人 VLDLR / VLDL Receptor 人細胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對照) 5-FAM ；5-羧基(ji)熒光素5-Carboxyfluorescein質量(liang)規格(ge)：>95%

孔(kong)雀(que)綠(lv)1酸(suan)鹽(yan)檢測試劑盒(he)MGmP色素(水(shui)溶)Nigrosine water soluble質量(liang)規格(ge)：BS
rRTEC, 大(da)鼠(shu)腎小管上(shang)皮(pi)細(xi)胞醋(cu)酸(suan)Gonadorelin Acetate質量(liang)規格(ge)：>98%,單(dan)醋酸(suan)鹽(yan)

人幹細(xi)胞因(yin)子單(dan)克(ke)隆(long)抗(kang)體細胞株;AMS2(SCF3) 人頸上(shang)皮(pi)細(xi)胞*培(pei)養(yang)基(ji) 100mLGranisetron HCl質量(liang)規格(ge)：>99.0%,BR

人結(jie)腸(chang)微(wei)血(xue)管內(nei)皮(pi)細(xi)胞HCoMEC（標(biao)準品(pin)）Granisetron HCl質量(liang)規格(ge)：HPLC>98%,標(biao)準品(pin)

HA Others H1N1 甲(jia)型(xing)流感 H1N1 (A/England/195/2009) 血(xue)凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對照) Hydrochlorothiazide質量(liang)規格(ge)：度(du)>99%,AR

KMB 人胚肺(fei)成(cheng)纖維樣(yang)細(xi)胞（標(biao)準品(pin)）Hydrochlorothiazide質量(liang)規格(ge)：HPLC>98%,標(biao)準品(pin)
元(yuan)胡染(ran)料法PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑盒(he)說(shuo)明(ming)書(shu)人APP-PS1雙基(ji)因(yin)轉染細(xi)胞株(HEK293);APP-PS1酸(suan)鈣(gai)，英文(wen)名或英文(wen)縮寫：Calcium iodate，級別(bie)：AR，99%，規格(ge)：5克(ke)

SUNE-1細(xi)胞，低(di)分(fen)化鼻咽癌細(xi)胞系(xi) 鼠(shu)色素瘤細胞系(xi),B16-Fo細(xi)胞 CM-H031人食管(guan)上(shang)皮(pi)細(xi)胞*培(pei)養(yang)基(ji)100mLε-己(ji)內(nei)酯(zhi) 6-Hqxcnolcctonq 20-44-3

NR8383(大(da)鼠(shu)肺(fei)泡(pao)巨(ju)噬細胞) 5×106cells/瓶×2，英文(wen)名或英文(wen)縮寫：Puerarin，級別(bie)：BR，粘度(du)50 mpe.s，規格(ge)：10克(ke)

Promocell C-2