仙茅(mao)探(tan)針(zhen)法PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑盒說(shuo)明(ming)書

實(shi)驗流程(cheng)：
1. 整個(ge)檢測(ce)過程(cheng)應嚴格按照本說(shuo)明(ming)書要求(qiu)分別(bie)在(zai)試(shi)劑準備(bei)區、樣(yang)本(ben)處(chu)理區和(he)PCR擴(kuo)增(zeng)區(qu)進(jin)行(xing)操作，各區實驗服(fu)、儀(yi)器 、耗(hao)材(cai)應獨立使用，不(bu)能混用(yong)；實驗(yan)用吸頭(tou)采(cai)用帶濾芯(xin)吸頭(tou)；樣(yang)本處理區(qu)應配有生物(wu)安全(quan)櫃，樣(yang)本處(chu)理在(zai)生(sheng)物(wu)安全(quan)櫃中(zhong)進(jin)行(xing)操作；三個(ge)區(qu)應該配有紫(zi)外(wai)線殺(sha)菌(jun)裝(zhuang)置(zhi)。
2. 為(wei)避(bi)免(mian)RNA降解，樣本(ben)處(chu)理過程(cheng)應在(zai)0-4℃條(tiao)件(jian)下操(cao)作，且完成(cheng)實驗後立即上機檢測(ce)；樣本(ben)處(chu)理過程(cheng)中(zhong)使用的(de)器具(ju)耗(hao)材(cai)應經過(guo)無核酶(mei)處(chu)理。
3. 每次(ci)實(shi)驗(yan)應該設(she)置(zhi)陰(yin)、陽(yang)性對(dui)照。
4. 試(shi)劑盒所(suo)有(you)試(shi)劑在(zai)使用前(qian)應該在(zai)常(chang)溫(wen)下充(chong)分(fen)融(rong)化混勻，並應瞬時(shi)離心(xin)。
5. 試劑盒內(nei)所配(pei)陰(yin)性和(he)陽(yang)性對(dui)照在(zai)壹(yi)次(ci)使用前(qian)應全部轉移(yi)至(zhi)標本(ben)準備(bei)區，並單(dan)獨(du)存(cun)放(fang)。
6. 為(wei)防(fang)止(zhi)熒(ying)光幹擾，應避免裸手(shou)直接(jie)接(jie)觸PCR反(fan)應管(guan)，並應避免在(zai)PCR反(fan)應管(guan)上進(jin)行(xing)任何標記。
7. 儀器 擴(kuo)增(zeng)相(xiang)關參數應按照本說(shuo)明(ming)書相(xiang)關要求(qiu)進(jin)行(xing)設(she)置(zhi)；不(bu)同批號(hao)試劑不(bu)能混用(yong)。
8. ABI系列熒光定(ding)量(liang)PCR儀(yi)參(can)數(shu)設(she)置(zhi)中(zhong)不(bu)選ROX校正，淬(cui)滅(mie)基因選擇(ze)None。
9. 實(shi)驗過(guo)程(cheng)中(zhong)產(chan)品(pin)的(de)廢(fei)棄物(wu)應該進(jin)行(xing)無害(hai)化處理(li)後(hou)方可(ke)丟棄。

特點：
1. 即開(kai)即(ji)用，用戶只需(xu)要提(ti)供(gong)病(bing)毒樣品。
2. 根(gen)據地(di)黃(huang)保(bao)守序(xu)列(lie)設(she)計的專(zhuan)壹(yi)性引(yin)物(wu)，與相關病(bing)毒無交叉反(fan)應。
3. 靈敏(min)度(du)可以(yi)達(da)到(dao)幾(ji)百拷貝(bei)/反(fan)應。
4. 壹管(guan)式熒光定(ding)量(liang) PCR 檢測(ce)，避免(mian)後(hou)續汙染。
5. 本試(shi)劑盒足(zu)夠(gou) 50 次(ci) 20μL 反(fan)應體系的熒(ying)光定(ding)量(liang) PCR。
6. 本(ben)產(chan)品(pin)只(zhi)適用於(yu)科(ke)研(yan)，不(bu)能用於(yu)臨床診(zhen)斷。
使用方(fang)法：
壹(yi)、樣品(pin)采集：
1、食(shi)品樣品：樣(yang)品(pin)的(de)采集與預培養按(an)照樣(yang)品的(de)采集與預培養按(an)照《食(shi)品衛(wei)生微(wei)生(sheng)物(wu)學(xue)檢驗(yan)阪崎(qi)腸(chang)桿(gan)菌(jun)檢驗(yan)要求(qiu)進(jin)行(xing)。
2、血液(ye)樣品(pin)：用(yong)無菌(jun)註射器抽(chou)取受檢者靜脈血2mL，註入無菌(jun)EDTA2Na(或(huo)檸檬(meng)酸(suan)鈉)抗凝管(guan)，立即混勻。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品：取(qu)糞(fen)便(bian)置(zhi)於(yu)滅菌(jun)的(de)收(shou)集管(guan)中送檢。
4、病(bing)竈部位樣(yang)品：取(qu)發病(bing)部位新(xin)鮮滲出(chu)物(wu)、粘液膿血送檢。
壹(yi)、稀(xi)釋 PCR 陽(yang)性對(dui)照（以(yi) 10E2-10E7 拷貝/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍稀(xi)釋度(du)為(wei)例(li)）
1. 註意：由(you)於標準(zhun)品濃(nong)度(du)非常(chang)高，因此下列(lie)稀(xi)釋操作壹(yi)定(ding)要在(zai)獨(du)立的區域(yu)進(jin)行(xing)，千(qian)萬(wan)不(bu)能汙染(ran)樣品(pin)或本試劑盒的(de)其他(ta)成(cheng)分）。為(wei)增(zeng)加(jia)產(chan)品(pin)穩定(ding)性和(he)避免(mian)擴(kuo)散傳染(ran)性病(bing)原(yuan)，本(ben)產(chan)品(pin)不(bu)提供(gong)活(huo)體樣(yang)品(pin)做(zuo)陽(yang)性對(dui)照，只(zhi)提(ti)供(gong)可(ke)以直接(jie)使用的(de) DNA段作為(wei)陽(yang)性對(dui)照。
2. 標(biao)記 6 個(ge)離(li)心(xin)管(guan)，分別(bie)為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯(xin)槍頭(tou)分(fen)別(bie)加(jia)入 45 μL 熒光 PCR 模板(ban)稀(xi)釋液（用(yong)帶(dai)芯(xin)槍頭(tou)，下同(tong)）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管(guan)中加(jia)入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de)1×10E7 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上待(dai)用(yong)。
5. 換槍頭(tou)，在(zai) 6 號(hao)管(guan)中加(jia)入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照(上步(bu)稀(xi)釋所得(de))，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E6 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上待(dai)用(yong)。
6. 換槍頭(tou)，在(zai) 5 號(hao)管(guan)中加(jia)入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照到(dao) 5 號管(guan)中，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E5 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上待(dai)用(yong)。
7. 重復上面(mian)的(de)操(cao)作直到(dao)得(de)到 6 個(ge)稀(xi)釋度(du)的陽(yang)性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上待(dai)用(yong)。
註：上述樣品(pin)建議(yi)經過(guo)增(zeng)菌(jun)後(hou)，收(shou)集培養(yang)物(wu)用(yong)於檢測(ce)。 
二(er)、DNA提(ti)取：
可采(cai)用(yong)PCR試劑盒配(pei)備(bei)的DNA抽(chou)提液(ye)，按(an)以下說(shuo)明(ming)進(jin)行(xing)DNA核(he)酸(suan)的粗提(ti)。也可采(cai)購上海(hai)澤葉生(sheng)物(wu)科(ke)技(ji)有限公司(si)生(sheng)產(chan)的(de)DNA提(ti)取(qu)試劑盒(過(guo)柱(zhu)法-熒(ying)光配套)或其他(ta)合適的商(shang)業化產(chan)品(pin)，並按(an)照(zhao)相應試劑盒說(shuo)明(ming)進(jin)行(xing)操作。
1、液體(ti)培養物(wu)：取(qu)液體培(pei)養(yang)物(wu)100μL加(jia)到1.5mL無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中，8000rpm離心(xin)3min，盡(jin)量吸棄上清，加(jia)入50μL DNA抽(chou)提液(ye)充(chong)分(fen)混(hun)勻，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取上清5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應。
2、固體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)：挑(tiao)取單克(ke)隆(long)菌(jun)落(luo)與50μL DNA抽(chou)提液(ye)充(chong)分(fen)混(hun)勻，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取上清5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品：挑(tiao)取(qu)米粒大(da)小(xiao)糞(fen)便(bian)於(yu)滅菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中，加(jia)入0.5mL生理鹽水，振蕩混(hun)勻，13000rpm離心(xin)3分鐘(zhong)，棄上清，沈澱(dian)中加(jia)入50μL DNA抽(chou)提液(ye)充(chong)分(fen)混(hun)勻，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取上清5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應。
4、其他(ta)液體(ti)標(biao)本：取(qu)標(biao)本2-3mL，13000rpm離(li)心(xin)3min，棄上清，沈澱(dian)中加(jia)入50μL DNA抽(chou)提液(ye)充(chong)分(fen)混(hun)勻，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取上清5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應。
註：陽(yang)性對(dui)照和(he)陰(yin)性對(dui)照為(wei)已(yi)經抽(chou)提好(hao)的(de)核酸(suan)(無需提(ti)取)，直接(jie)取(qu)5μL加(jia)入到(dao)反(fan)應體系中即(ji)可(ke)。由(you)於陽(yang)性對(dui)照濃(nong)度(du)較高，建議在(zai)樣(yang)品(pin)制(zhi)備(bei)區域(yu)加(jia)入陽(yang)性對(dui)照。 
CL-0270CRT(人(ren)神(shen)經膠(jiao)質(zhi)瘤細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×2溴(xiu)莫(mo)尼(ni)定(ding) Brimonidine質(zhi)量(liang)規(gui)格：>99%,BR

KB-C1.5細胞(bao)，細(xi)胞(bao) 人T瘤轉(zhuan)基(ji)因細胞(bao),Jurkat D,E細(xi)胞(bao) 人(ren)喉癌上皮細胞(bao);Hep-2磺草(cao)靈(ling)Asulam質量規(gui)格：>95%

769-P(人腎(shen)細(xi)胞腺(xian)癌細(xi)胞) 5×106cells/瓶(ping)×2磺草(cao)靈(ling)(標準品(pin))Asulam質(zhi)量規(gui)格：HPLC>98%,標準(zhun)品(pin)

ACVRL1 Others Rat 大(da)鼠(shu) ALK-1 / ACVRL1 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解液 (陽(yang)性對(dui)照) 苯(ben)磺酸(suan)貝托司(si)汀(ting)Bepotastine besilate質量(liang)規(gui)格：>98.5%

星形(xing)細(xi)胞(bao)生(sheng)長添加(jia)物(wu)SteCGS鹽 copper chlorophyllin質量(liang)規(gui)格：>95%,BR
HUVEC, 人臍(qi)靜(jing)脈內(nei)皮細(xi)胞(bao)DAPT (GSI-IX)DAPT (GSI-IX)質量(liang)規(gui)格：>98%,γ-secretase抑(yi)制(zhi)劑

MN-s, 小(xiao)鼠(shu)紋狀(zhuang)體(ti)神(shen)經元 MSU-1細胞 Ha Fe(羊膜細(xi)胞(bao))XAV-939;NVP-XAV 939XAV939質量規(gui)格：>98%

急性T細胞(bao)白(bai)血病(bing)細胞;TALL-104胡黃(huang)連(lian)苷(gan)I（標準(zhun)品(pin)）Picroside I質(zhi)量規(gui)格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品

F3 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) F3 / Tissue factor / CD142 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解液 (陽(yang)性對(dui)照) 胡(hu)黃(huang)連(lian)苷(gan) II(標準(zhun)品(pin))Picroside II質(zhi)量規(gui)格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品

人(ren)低(di)侵(qin)襲性脈絡(luo)膜色(se)素(su)素瘤細(xi)胞(bao);OCM-1A胡黃(huang)連(lian)苷(gan) III（標準(zhun)品(pin)）Picroside III質(zhi)量規(gui)格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品
人(ren)慢性髓系白(bai)血病(bing)細胞;K562 大(da)鼠(shu)肺大(da)靜(jing)脈平(ping)滑肌細胞*培(pei)養基(ji) 100mL5-鳥苷(gan)壹1酸(suan)二(er)鈉(na)鹽(GMP)質量(liang)規(gui)格：>98%,BRGMP

原(yuan)代(dai)表(biao)皮(pi)角(jiao)化(hua)細(xi)胞(bao)培(pei)養特制(zhi)添加(jia)劑Many types of cells包(bao)裝：5/2.5/1ml腺(xian)苷(gan)-5單1酸(suan)(進(jin)口(kou)原(yuan)裝(zhuang)) 質(zhi)量(liang)規(gui)格：>99,ALFA原(yuan)裝(zhuang)AMP

SERPINE1 Others Rat 大(da)鼠(shu) SerpinE1 / PAI-1 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解液 (陽(yang)性對(dui)照) 腺(xian)苷(gan)-5單1酸(suan)(AMP) 質(zhi)量規(gui)格：>98,BRAdenosine-5-monophosphoric acid

中國(guo)倉鼠(shu)卵巢細(xi)胞(bao);CHO5'-溴(xiu) 質量(liang)規(gui)格：>98%,BR5-Bromouracil

中國(guo)倉鼠(shu)卵巢細(xi)胞(bao);CTLA4 Ig-24 涎(xian)腺(xian)腺(xian)樣囊(nang)性癌(ai)細(xi)胞，Acc-2細胞 104C1細胞(bao)，轉化的(de)豚(tun)鼠(shu)胎(tai)體細(xi)胞(bao)擬(ni)人(ren)參皂苷(gan)F11(標準(zhun)品(pin))質(zhi)量規(gui)格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品Pseudoginsenoside F11
仙茅(mao)探(tan)針(zhen)法PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑盒說(shuo)明(ming)書FAP Others Human 人 FAP / Seprase 人細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽(yang)性對(dui)照) EC肉(rou)湯(tang)100克

HEPG2.2.15 肝癌細(xi)胞(bao)HBV病(bing)毒株α-酮基(ji)纈酸(suan)鈣鹽 Calcium alpha-ketovaline,≥97.0% 51828-94-5 1G 通(tong)用(yong)試(shi)劑

CL-0290MDA-MB-468(人(ren)癌細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶×2異(yi)環(huan)鱗酰(xian)安 IfosfcMidq 3778-73-

RLF, 大(da)鼠(shu)成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)胺藍O1克(ke)2～8°C

雙位點HC-kit受體(ti)細(xi)胞(bao)株(zhu);DMF7 人內(nei)膜上皮細胞(bao)*培
儲存(cun)條(tiao)件(jian)：
14℃或(huo)－20℃樣品(pin)收(shou)集、處理(li)及保存(cun)方(fang)法
1. 血清：使用不(bu)含(han)熱(re)原(yuan)和(he)內(nei)毒素(su)的(de)試(shi)管(guan)，操作過(guo)程(cheng)中(zhong)避免(mian)任(ren)何細胞刺(ci)激，收(shou)集血液(ye)後，3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分鐘(zhong)將(jiang)血清和(he)紅(hong)細(xi)胞迅(xun)速(su)小(xiao)心(xin)地(di)分離(li)。
2. 血漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬(meng)酸(suan)鹽或肝(gan)素抗凝。3000 轉(zhuan)離心(xin)30 分鐘(zhong)取(qu)上清。
3. 細胞(bao)上清液：3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆(ke)粒和(he)聚合(he)物(wu)。
4. 組織(zhi)勻漿(jiang)：將(jiang)組織(zhi)加(jia)入適量生(sheng)理(li)鹽水搗(dao)碎(sui)。3000 轉離心(xin)10 分鐘(zhong)取(qu)上清。
5. 保存(cun)：如(ru)果樣本(ben)收(shou)集後不(bu)及時(shi)檢測(ce)，請按(an)壹(yi)次(ci)用(yong)量(liang)分裝(zhuang)，凍(dong)存(cun)於(yu)-20℃，避(bi)免(mian)反(fan)復凍融(rong)，在(zai)室溫(wen)下解凍並確保(bao)樣品(pin)均勻地(di)充(chong)分(fen)解凍。