茯苓(ling)探針(zhen)法(fa)PCR鑒定(ding)試(shi)劑(ji)盒(he)*

儲存條件(jian)：
14℃或－20℃樣品(pin)收集(ji)、處理(li)及保(bao)存(cun)方(fang)法(fa)
1. 血清：使(shi)用不含熱原(yuan)和(he)內毒(du)素(su)的試(shi)管(guan)，操(cao)作過(guo)程中避(bi)免(mian)任何(he)細胞刺(ci)激(ji)，收集(ji)血液後，3000 轉離(li)心(xin)10 分鐘將血清和(he)紅細(xi)胞迅(xun)速(su)小(xiao)心(xin)地(di)分離。
2. 血漿：EDTA、檸(ning)檬酸(suan)鹽(yan)或肝素(su)抗凝(ning)。3000 轉離(li)心(xin)30 分鐘取上(shang)清。
3. 細胞上(shang)清液：3000 轉離(li)心(xin)10 分鐘去除顆(ke)粒和(he)聚合物。
4. 組織勻漿：將組(zu)織加入(ru)適量(liang)生理(li)鹽水搗碎。3000 轉離(li)心(xin)10 分鐘取上(shang)清。
5. 保(bao)存(cun)：如(ru)果(guo)樣本收集(ji)後不及時檢測，請(qing)按壹(yi)次(ci)用量(liang)分裝(zhuang)，凍(dong)存於(yu)-20℃，避(bi)免(mian)反復凍(dong)融，在室(shi)溫(wen)下(xia)解(jie)凍(dong)並(bing)確(que)保(bao)樣品(pin)均(jun)勻(yun)地(di)充(chong)分解(jie)凍(dong)。

特點(dian)：
1. 即(ji)開(kai)即(ji)用，用戶只需(xu)要提(ti)供病(bing)毒(du)樣品(pin)。
2. 根(gen)據(ju)地(di)黃(huang)保(bao)守(shou)序列設計(ji)的(de)專(zhuan)壹(yi)性引(yin)物(wu)，與相關病(bing)毒(du)無交叉(cha)反應(ying)。
3. 靈敏度(du)可以達(da)到(dao)幾百(bai)拷貝/反應。
4. 壹(yi)管(guan)式熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang) PCR 檢測，避(bi)免(mian)後續(xu)汙(wu)染(ran)。
5. 本試劑(ji)盒(he)足夠(gou) 50 次(ci) 20μL 反應體(ti)系的熒光(guang)定(ding)量(liang) PCR。
6. 本產品(pin)只適用於(yu)科研(yan)，不能(neng)用於(yu)臨(lin)床診(zhen)斷(duan)。

使(shi)用方(fang)法(fa)：
壹(yi)、樣品(pin)采(cai)集(ji)：
1、食品(pin)樣品(pin)：樣品(pin)的采(cai)集(ji)與預培養(yang)按照樣品(pin)的采(cai)集(ji)與預培養(yang)按照《食(shi)品(pin)衛(wei)生微(wei)生物學檢驗(yan)阪崎(qi)腸(chang)桿菌檢驗(yan)要求(qiu)進(jin)行(xing)。
2、血液樣品(pin)：用無菌註(zhu)射(she)器抽取受(shou)檢者靜(jing)脈血2mL，註(zhu)入(ru)無菌EDTA2Na(或檸(ning)檬酸(suan)鈉)抗凝管(guan)，立(li)即(ji)混(hun)勻(yun)。
3、糞便(bian)樣品(pin)：取糞便(bian)置於(yu)滅(mie)菌(jun)的(de)收集(ji)管(guan)中(zhong)送檢。
4、病(bing)竈部位樣品(pin)：取發病(bing)部位新鮮(xian)滲(shen)出(chu)物、粘液膿(nong)血送檢。
壹(yi)、稀(xi)釋(shi) PCR 陽性對照(zhao)（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍(bei)稀(xi)釋(shi)度(du)為例(li)）
1. 註(zhu)意：由於(yu)標(biao)準(zhun)品(pin)濃(nong)度(du)非常(chang)高(gao)，因(yin)此下列(lie)稀(xi)釋(shi)操作(zuo)壹(yi)定(ding)要在(zai)獨(du)立(li)的(de)區域進(jin)行(xing)，千(qian)萬不能(neng)汙(wu)染(ran)樣品(pin)或本試劑(ji)盒(he)的其他成(cheng)分）。為增(zeng)加(jia)產品(pin)穩(wen)定(ding)性(xing)和(he)避(bi)免(mian)擴散傳染(ran)性(xing)病(bing)原(yuan)，本產品(pin)不提(ti)供活(huo)體(ti)樣品(pin)做陽性(xing)對照(zhao)，只提(ti)供可以直接(jie)使(shi)用的 DNA段作為陽(yang)性對照(zhao)。
2. 標(biao)記(ji) 6 個離(li)心(xin)管(guan)，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯(xin)槍(qiang)頭分別加(jia)入(ru) 45 μL 熒光(guang) PCR 模板稀(xi)釋(shi)液（用帶芯(xin)槍(qiang)頭，下(xia)同(tong)）。
4. 在 7 號管(guan)中(zhong)加入(ru) 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(zhao)，充(chong)分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(zhao)。放冰(bing)上(shang)待(dai)用。
5. 換(huan)槍頭，在(zai) 6 號管(guan)中(zhong)加入(ru) 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(zhao)(上步稀(xi)釋(shi)所得)，充(chong)分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(zhao)。放冰(bing)上(shang)待(dai)用。
6. 換(huan)槍頭，在(zai) 5 號管(guan)中(zhong)加入(ru) 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(zhao)到 5 號管(guan)中(zhong)，充(chong)分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照(zhao)。放冰(bing)上(shang)待(dai)用。
7. 重(zhong)復(fu)上(shang)面(mian)的操(cao)作直到得到 6 個稀(xi)釋(shi)度(du)的陽(yang)性對照(zhao)。放冰(bing)上(shang)待(dai)用。
註(zhu)：上(shang)述樣品(pin)建議(yi)經(jing)過增(zeng)菌(jun)後，收集(ji)培養(yang)物用於(yu)檢測。 
二、DNA提取：
可采(cai)用PCR試劑(ji)盒(he)配(pei)備(bei)的(de)DNA抽提液，按(an)以下(xia)說明(ming)進(jin)行(xing)DNA核酸(suan)的(de)粗提(ti)。也(ye)可(ke)采(cai)購上海(hai)澤葉生物科技有(you)限(xian)公(gong)司生產的(de)DNA提取試(shi)劑(ji)盒(he)(過柱(zhu)法(fa)-熒光(guang)配(pei)套)或其他合適的商(shang)業化(hua)產品(pin)，並(bing)按照相應(ying)試(shi)劑(ji)盒(he)說明(ming)進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo)。
1、液體(ti)培養(yang)物：取液體(ti)培養(yang)物100μL加到1.5mL無菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，8000rpm離心(xin)3min，盡量(liang)吸棄上(shang)清，加(jia)入(ru)50μL DNA抽提液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取上(shang)清5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
2、固體(ti)培養(yang)物：挑取單(dan)克隆(long)菌落與50μL DNA抽提液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取上(shang)清5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
3、糞便(bian)樣品(pin)：挑取米(mi)粒大(da)小(xiao)糞便(bian)於(yu)滅(mie)菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，加入(ru)0.5mL生理(li)鹽水，振蕩混(hun)勻(yun)，13000rpm離心(xin)3分鐘，棄(qi)上清，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加入(ru)50μL DNA抽提液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取上(shang)清5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
4、其他液體(ti)標(biao)本：取標(biao)本2-3mL，13000rpm離心(xin)3min，棄上清，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加入(ru)50μL DNA抽提液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取上(shang)清5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
註(zhu)：陽(yang)性對照(zhao)和(he)陰性(xing)對照(zhao)為已(yi)經(jing)抽(chou)提(ti)好的核(he)酸(suan)(無需(xu)提(ti)取)，直接(jie)取5μL加入(ru)到反(fan)應體(ti)系中即(ji)可(ke)。由(you)於(yu)陽(yang)性(xing)對照(zhao)濃(nong)度(du)較高(gao)，建(jian)議(yi)在(zai)樣品(pin)制備(bei)區域加入(ru)陽性(xing)對照(zhao)。 
MOLT-4 人急性母(mu)細胞白(bai)血病(bing)細胞蘋(ping)果(guo)酸(suan)舒尼替(ti)尼Sunitinib Malate質量(liang)規(gui)格(ge)：>99.0%,BR

NCI-H1975人肺腺(xian)癌(ai)細胞 Human lung adecarcima cell line NCI-H1975 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS蘋果酸(suan)舒尼替(ti)尼(標(biao)準(zhun)品(pin))Sunitinib Malate質量(liang)規(gui)格(ge)：HPLC>98%,標(biao)準(zhun)品(pin)

ADIPOQ Protein Mouse 重(zhong)組(zu)小(xiao)鼠(shu) Adiponectin / Acrp30 / ADIPOQ 蛋(dan)白(bai) (His 標(biao)簽)舒洛(luo)芬Suprofen質量(liang)規(gui)格(ge)：>98%

SV-40轉化(hua)肺成(cheng)纖維(wei)細胞;WI38/VA13 人胰(yi)島β細胞*培養(yang)基(ji) 100mLTacrolimus /FK506 mohydrate質量(liang)規(gui)格(ge)：≥98%,細胞培養(yang)級

人內膜腺(xian)癌(ai)細胞;HEC-1-B(標(biao)準(zhun)品(pin))Tacrolimus /FK506 mohydrate質量(liang)規(gui)格(ge)：≥98%,標(biao)準(zhun)品(pin)
人細胞;Hela P10s-11F1,3-二溴(xiu)-7-叔丁(ding)基(ji)芘(>97.0%(GC))1,3-Dibromo-7-tert-butylpyrene質量(liang)規(gui)格(ge)：>97.0%(GC)

豚鼠源細胞 貓(mao)腎細胞，F81細胞 FDC-P1細胞，小(xiao)鼠(shu)骨髓(sui)細胞6,12-二溴(xiu)屈(>98.0%(HPLC))6,12-Dibromochrysene質量(liang)規(gui)格(ge)：>98.0%(HPLC)

人肝細胞;HL-7702[L-02]2,5-二苯(ben)基(ji)惡唑(>98%,BC)PPO質量(liang)規(gui)格(ge)：>98%,BC

PRSS2 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) PRSS2 / y2 人細胞裂(lie)解(jie)液 (陽性對照(zhao)) 乙醇酸(suan)鈉(>98%,BR) glycolate質量(liang)規(gui)格(ge)：>98%,BR

肝星(xing)形(xing)細胞Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105方(fang)(1ml)司班60Span* 60質量(liang)規(gui)格(ge)：BR
MDA-MB-415 人腺(xian)癌(ai)細胞(標(biao)準(zhun)品(pin))質量(liang)規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)Palmatine

HFL1人胚(pei)肺成(cheng)纖維(wei)細胞 HFL1 in human embryo lung fibroblasts F12K培養(yang)基(ji)+10%FBS鹽酸(suan)西(xi)那卡(ka)塞；鹽(yan)酸(suan)甲狀(zhuang)旁腺(xian)激(ji)素(su)質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：>99%,BRCinacalcet HCl,AMG073

SCGB1A1 Protein Mouse 重(zhong)組(zu)小(xiao)鼠(shu) Uteroglobin / SCGB1A1 蛋(dan)白(bai) (His 標(biao)簽)質量(liang)規(gui)格(ge)：≥97%,BRPalmatine

人胚(pei)腎二倍(bei)體(ti)細胞;CCC-HEK-1 人氣管(guan)上(shang)皮細(xi)胞*培養(yang)基(ji) 100mL/鏈絲(si)菌蛋(dan)白(bai)酶/鏈黴菌蛋(dan)白(bai)酶質量(liang)規(gui)格(ge)：BR，4000u/mg,進(jin)分Pronase E

小(xiao)鼠(shu)骨髓(sui)瘤細(xi)胞;Sp2/0-Ag14粉防己堿;(標(biao)準(zhun)品(pin))質量(liang)規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)Tetrandrine
茯苓(ling)探針(zhen)法(fa)PCR鑒定(ding)試(shi)劑(ji)盒(he)*RN-c, 大(da)鼠皮質(zhi)神(shen)經(jing)元(yuan)堿性(xing)氧化(hua)鋁1公(gong)斤

人胚(pei)胎(tai)心(xin)臟(zang)成(cheng)纖維(wei)樣細胞;HEH2 人成(cheng)纖維(wei)細胞*培養(yang)基(ji) 100mL膽減(jian)氧化(hua)酶(-20℃) CHOLINq OXIDcSq 908-67-2

人表皮角(jiao)質(zhi)細(xi)胞-新生HEK-nN,N'-羰基(ji)二咪(mi)唑 1,1'-Carbonyldiimidazole (CDI) 530-62-1 10G 通(tong)用試劑(ji)

RK2 Others Rat 大(da)鼠 kB / RK2 人細胞裂(lie)解(jie)液 (陽性對照(zhao)) 鈉測試(shi)盒(帶標(biao)準(zhun))10個RT

大(da)鼠直腸平(ping)滑(hua)肌(ji)細(xi)胞*培養(yang)基(ji) 100mL(dNTP混(hun)合物)
實驗(yan)流程：
1. 整個檢測過(guo)程應嚴(yan)格(ge)按(an)照(zhao)本說明(ming)書要求(qiu)分別在(zai)試劑(ji)準(zhun)備(bei)區、樣本處理(li)區和(he)PCR擴增(zeng)區進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo)，各(ge)區實驗(yan)服(fu)、儀(yi)器(qi) 、耗(hao)材(cai)應(ying)獨(du)立(li)使(shi)用，不能(neng)混(hun)用；實驗(yan)用吸頭采(cai)用帶濾(lv)芯(xin)吸頭；樣本處理(li)區應配(pei)有(you)生物安全(quan)櫃(gui)，樣本處理(li)在生物安全(quan)櫃(gui)中進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo)；三(san)個區應該配(pei)有(you)紫外(wai)線(xian)殺菌(jun)裝(zhuang)置。
2. 為避(bi)免(mian)RNA降解(jie)，樣本處理(li)過程應在(zai)0-4℃條件下操(cao)作(zuo)，且完(wan)成(cheng)實驗(yan)後立(li)即(ji)上(shang)機檢測；樣本處理(li)過程中使(shi)用的器具(ju)耗(hao)材(cai)應(ying)經(jing)過(guo)無核酶(mei)處理(li)。

3. 每次(ci)實驗(yan)應(ying)該(gai)設置陰、陽(yang)性對照(zhao)。
4. 試劑(ji)盒(he)所有(you)試劑(ji)在(zai)使(shi)用前應該(gai)在(zai)常(chang)溫(wen)下(xia)充(chong)分融化(hua)混(hun)勻(yun)，並(bing)應瞬時離心(xin)。
5. 試劑(ji)盒(he)內所(suo)配(pei)陰(yin)性(xing)和(he)陽性(xing)對照(zhao)在壹(yi)次(ci)使(shi)用前應全(quan)部(bu)轉移至標(biao)本準(zhun)備(bei)區，並(bing)單獨(du)存(cun)放。
6. 為防止熒(ying)光(guang)幹擾，應(ying)避(bi)免(mian)裸手直接(jie)接(jie)觸(chu)PCR反應管(guan)，並(bing)應避(bi)免(mian)在PCR反應管(guan)上(shang)進(jin)行(xing)任何(he)標(biao)記(ji)。
7. 儀器 擴增(zeng)相關參(can)數(shu)應按照本說明(ming)書相關要求(qiu)進(jin)行(xing)設置；不同(tong)批號(hao)試(shi)劑(ji)不能(neng)混(hun)用。
8. ABI系列熒光(guang)定(ding)量(liang)PCR儀參(can)數(shu)設置中不選(xuan)ROX校正，淬滅(mie)基(ji)因(yin)選(xuan)擇(ze)None。
9. 實驗(yan)過(guo)程中產品(pin)的廢棄(qi)物(wu)應該(gai)進(jin)行(xing)無害化(hua)處理(li)後方(fang)可丟棄。