香薷探(tan)針(zhen)法(fa)PCR鑒(jian)定試劑盒說明(ming)書(shu)

特點(dian)：
1. 即(ji)開即(ji)用(yong)，用(yong)戶只需要(yao)提供病(bing)毒樣(yang)品(pin)。
2. 根(gen)據地黃(huang)保(bao)守序(xu)列(lie)設(she)計(ji)的專(zhuan)壹(yi)性(xing)引(yin)物，與(yu)相(xiang)關(guan)病(bing)毒無交叉反(fan)應。
3. 靈(ling)敏(min)度(du)可以達(da)到(dao)幾百(bai)拷(kao)貝/反(fan)應(ying)。
4. 壹(yi)管式熒光(guang)定量 PCR 檢(jian)測，避免(mian)後(hou)續(xu)汙(wu)染(ran)。
5. 本(ben)試(shi)劑(ji)盒足夠 50 次(ci) 20μL 反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)的熒光(guang)定量 PCR。
6. 本(ben)產品(pin)只適用(yong)於(yu)科(ke)研(yan)，不(bu)能(neng)用(yong)於(yu)臨(lin)床診(zhen)斷。

使(shi)用(yong)方法(fa)：
壹(yi)、樣(yang)品(pin)采(cai)集(ji)：
1、食(shi)品(pin)樣(yang)品(pin)：樣(yang)品(pin)的采(cai)集(ji)與(yu)預培養(yang)按(an)照樣(yang)品(pin)的采(cai)集(ji)與(yu)預培養(yang)按(an)照《食品(pin)衛(wei)生微生物學(xue)檢(jian)驗(yan)阪(ban)崎(qi)腸桿(gan)菌檢(jian)驗(yan)要(yao)求進(jin)行(xing)。
2、血液(ye)樣(yang)品(pin)：用(yong)無菌註(zhu)射器(qi)抽取(qu)受檢(jian)者靜脈血2mL，註(zhu)入無菌EDTA2Na(或(huo)檸(ning)檬酸(suan)鈉)抗(kang)凝管(guan)，立(li)即(ji)混勻。
3、糞(fen)便樣(yang)品(pin)：取(qu)糞(fen)便置於(yu)滅菌的收集管中(zhong)送檢(jian)。
4、病(bing)竈(zao)部(bu)位樣(yang)品(pin)：取(qu)發(fa)病部(bu)位(wei)新鮮(xian)滲出物、粘液(ye)膿血送檢(jian)。
壹(yi)、稀釋 PCR 陽(yang)性(xing)對(dui)照（以 10E2-10E7 拷(kao)貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度(du)為例(li)）
1. 註(zhu)意：由於(yu)標(biao)準品(pin)濃(nong)度(du)非常(chang)高(gao)，因(yin)此下列(lie)稀釋操作壹(yi)定要(yao)在(zai)獨立(li)的區(qu)域(yu)進行(xing)，千萬不能(neng)汙(wu)染樣(yang)品(pin)或(huo)本試劑(ji)盒的其他成分）。為增(zeng)加(jia)產品(pin)穩定性(xing)和(he)避免(mian)擴散(san)傳染性(xing)病原(yuan)，本(ben)產品(pin)不(bu)提(ti)供活(huo)體(ti)樣(yang)品(pin)做(zuo)陽(yang)性(xing)對(dui)照，只提供可以直(zhi)接使(shi)用(yong)的 DNA段作(zuo)為陽(yang)性(xing)對(dui)照。
2. 標(biao)記 6 個離心管(guan)，分(fen)別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶芯(xin)槍(qiang)頭分(fen)別(bie)加(jia)入(ru) 45 μL 熒光(guang) PCR 模(mo)板(ban)稀釋液(ye)（用(yong)帶芯(xin)槍(qiang)頭，下同(tong)）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝/μL 的陽性(xing)對(dui)照，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得1×10E7 拷(kao)貝/μL 的陽性(xing)對(dui)照。放(fang)冰上(shang)待用(yong)。
5. 換(huan)槍(qiang)頭，在(zai) 6 號(hao)管中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝/μL 的陽性(xing)對(dui)照(上(shang)步(bu)稀釋所得)，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的陽性(xing)對(dui)照。放(fang)冰上(shang)待用(yong)。
6. 換(huan)槍(qiang)頭，在(zai) 5 號(hao)管中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的陽性(xing)對(dui)照到 5 號(hao)管中(zhong)，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得 1×10E5 拷(kao)貝/μL 的陽性(xing)對(dui)照。放(fang)冰上(shang)待用(yong)。
7. 重復上(shang)面(mian)的操作直到得到(dao) 6 個稀釋度(du)的陽性(xing)對(dui)照。放(fang)冰上(shang)待用(yong)。
註(zhu)：上(shang)述樣(yang)品(pin)建(jian)議(yi)經(jing)過(guo)增菌後(hou)，收(shou)集(ji)培養(yang)物用(yong)於(yu)檢(jian)測。 
二(er)、DNA提(ti)取(qu)：
可采(cai)用(yong)PCR試(shi)劑(ji)盒(he)配備(bei)的DNA抽(chou)提(ti)液(ye)，按(an)以(yi)下說明(ming)進行(xing)DNA核(he)酸(suan)的粗提(ti)。也(ye)可采(cai)購(gou)上(shang)海澤葉(ye)生物科技(ji)有限公(gong)司生產的DNA提(ti)取(qu)試(shi)劑盒(過(guo)柱法(fa)-熒光(guang)配套(tao))或(huo)其他合(he)適的商業(ye)化(hua)產品(pin)，並(bing)按(an)照相(xiang)應(ying)試(shi)劑盒說明(ming)進行(xing)操作。
1、液(ye)體(ti)培養(yang)物：取液(ye)體(ti)培養(yang)物100μL加(jia)到(dao)1.5mL無菌離心管(guan)中(zhong)，8000rpm離心3min，盡量吸(xi)棄(qi)上(shang)清(qing)，加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心3min，取(qu)上(shang)清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
2、固(gu)體(ti)培養(yang)物：挑取(qu)單(dan)克隆(long)菌落(luo)與(yu)50μL DNA抽(chou)提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心3min，取(qu)上(shang)清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
3、糞(fen)便樣(yang)品(pin)：挑(tiao)取(qu)米(mi)粒(li)大(da)小糞(fen)便於(yu)滅菌離心管(guan)中(zhong)，加(jia)入(ru)0.5mL生理鹽水，振蕩(dang)混勻，13000rpm離心3分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)上(shang)清(qing)，沈澱(dian)中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心3min取(qu)上(shang)清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
4、其他液體(ti)標(biao)本：取(qu)標(biao)本2-3mL，13000rpm離心3min，棄(qi)上(shang)清(qing)，沈澱(dian)中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心3min取(qu)上(shang)清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
註(zhu)：陽性(xing)對(dui)照和(he)陰(yin)性(xing)對(dui)照為已(yi)經(jing)抽(chou)提好的核酸(suan)(無需提取(qu))，直(zhi)接(jie)取(qu)5μL加(jia)入(ru)到反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)中(zhong)即(ji)可。由於(yu)陽(yang)性(xing)對(dui)照濃(nong)度(du)較(jiao)高，建(jian)議(yi)在(zai)樣(yang)品(pin)制(zhi)備(bei)區(qu)域(yu)加(jia)入(ru)陽性(xing)對(dui)照。 
實(shi)驗(yan)流程：
1. 整個檢(jian)測過(guo)程應(ying)嚴格(ge)按(an)照本說明(ming)書(shu)要(yao)求分(fen)別(bie)在(zai)試(shi)劑準備(bei)區(qu)、樣(yang)本處(chu)理區(qu)和(he)PCR擴增(zeng)區(qu)進行(xing)操作，各區(qu)實(shi)驗(yan)服(fu)、儀器 、耗材(cai)應(ying)獨立(li)使(shi)用(yong)，不(bu)能(neng)混用(yong)；實(shi)驗(yan)用(yong)吸(xi)頭采(cai)用(yong)帶濾(lv)芯(xin)吸(xi)頭；樣(yang)本處(chu)理區(qu)應配有生物安全(quan)櫃，樣(yang)本處(chu)理在(zai)生物安全(quan)櫃中(zhong)進(jin)行(xing)操作；三個區(qu)應該配(pei)有紫外線殺(sha)菌裝(zhuang)置(zhi)。
2. 為避免(mian)RNA降(jiang)解，樣(yang)本處(chu)理過(guo)程應(ying)在(zai)0-4℃條件下操作，且(qie)完成實(shi)驗(yan)後(hou)立(li)即(ji)上(shang)機(ji)檢(jian)測；樣(yang)本處(chu)理過(guo)程中(zhong)使(shi)用(yong)的器具耗材(cai)應(ying)經(jing)過(guo)無核(he)酶處(chu)理。
3. 每(mei)次(ci)實(shi)驗(yan)應(ying)該設(she)置陰(yin)、陽性(xing)對(dui)照。
4. 試(shi)劑(ji)盒(he)所有試劑(ji)在(zai)使(shi)用(yong)前(qian)應(ying)該(gai)在(zai)常(chang)溫下充(chong)分(fen)融化混勻，並(bing)應(ying)瞬(shun)時(shi)離心。
5. 試(shi)劑(ji)盒(he)內所配陰(yin)性(xing)和(he)陽性(xing)對(dui)照在(zai)壹(yi)次使(shi)用(yong)前(qian)應(ying)全(quan)部轉移(yi)至標(biao)本準(zhun)備(bei)區(qu)，並(bing)單(dan)獨存(cun)放(fang)。
6. 為防(fang)止熒光(guang)幹擾，應(ying)避免(mian)裸手(shou)直(zhi)接接(jie)觸PCR反(fan)應(ying)管(guan)，並(bing)應(ying)避免(mian)在(zai)PCR反(fan)應(ying)管(guan)上(shang)進(jin)行(xing)任何標(biao)記。
7. 儀(yi)器(qi) 擴增(zeng)相(xiang)關(guan)參數(shu)應(ying)按(an)照本說明(ming)書(shu)相(xiang)關(guan)要(yao)求進(jin)行(xing)設(she)置；不同批(pi)號(hao)試劑(ji)不能(neng)混用(yong)。
8. ABI系(xi)列(lie)熒光(guang)定量PCR儀(yi)參數(shu)設(she)置中(zhong)不(bu)選(xuan)ROX校(xiao)正，淬(cui)滅基(ji)因(yin)選(xuan)擇(ze)None。
9. 實(shi)驗(yan)過(guo)程中(zhong)產品(pin)的廢(fei)棄(qi)物應該(gai)進行(xing)無害(hai)化(hua)處(chu)理後(hou)方可丟(diu)棄(qi)。
儲存條件：
14℃或(huo)－20℃樣(yang)品(pin)收(shou)集(ji)、處(chu)理及(ji)保(bao)存(cun)方法(fa)
1. 血清(qing)：使(shi)用(yong)不(bu)含(han)熱原(yuan)和(he)內毒素(su)的試管，操作過程中(zhong)避免(mian)任何細(xi)胞刺(ci)激，收(shou)集(ji)血液(ye)後(hou)，3000 轉離心10 分(fen)鐘(zhong)將血清(qing)和(he)紅(hong)細(xi)胞迅(xun)速小心地分離。
2. 血漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬酸(suan)鹽或(huo)肝(gan)素(su)抗(kang)凝。3000 轉離心30 分(fen)鐘(zhong)取上(shang)清(qing)。
3. 細(xi)胞上(shang)清(qing)液：3000 轉離心10 分(fen)鐘(zhong)去除顆(ke)粒(li)和(he)聚合(he)物。
4. 組(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)：將組(zu)織加(jia)入(ru)適量生理鹽水搗碎(sui)。3000 轉離心10 分(fen)鐘(zhong)取上(shang)清(qing)。
5. 保(bao)存(cun)：如(ru)果(guo)樣(yang)本收(shou)集後(hou)不(bu)及(ji)時(shi)檢(jian)測，請(qing)按(an)壹(yi)次用(yong)量分裝(zhuang)，凍存於(yu)-20℃，避免(mian)反復凍融，在(zai)室(shi)溫下解凍並(bing)確保(bao)樣(yang)品(pin)均(jun)勻(yun)地(di)充(chong)分(fen)解凍。
HMGB1 Others Human 人(ren) HMGB1 / HMG1 人(ren)細胞裂(lie)解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 外消(xiao)旋(xuan)-d5 馬來酸(suan)鹽rac Timolol-d5 Maleate質(zhi)量規格(ge)：美(mei)國(guo)進(jin)口(kou)

體(ti)外管腔(qiang)形成(cheng)分析試(shi)劑(ji)盒(he)IVTFA外消(xiao)旋(xuan)rac Timolol Maleate質(zhi)量規格(ge)：美(mei)國(guo)進(jin)口(kou)

STAT1 Others Human 人(ren) STAT1 / p91 桿(gan)狀(zhuang)病(bing)毒-昆蟲細胞裂(lie)解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照) (R)-(+)-(R)-(+)-Timolol Maleate質(zhi)量規格(ge)：美(mei)國(guo)進(jin)口(kou)

人(ren)非小細胞肺(fei)腺癌細胞;NCI-H157(S)-(-)-(S)-(-)-Timolol Maleate質(zhi)量規格(ge)：美(mei)國(guo)進(jin)口(kou)

RH-35細(xi)胞，肝(gan)癌細胞 人(ren)胃腺癌細胞,AGS細(xi)胞 黃(huang)牛(niu)皮(pi)膚細(xi)胞;BTA-S2標(biao)記d4Tinidazole Labeled d4質(zhi)量規格(ge)：美(mei)國(guo)進(jin)口(kou)
M14(人(ren)色素(su)瘤(liu)細胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 顱(lu)蓋(gai)造骨細胞Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105方(1ml)6-(γ,γ-二(er)甲(jia)基(ji)1丙(bing)基(ji)氨(an)基(ji))嘌(piao)呤(ling)核苷(植(zhi)物激素(su)級(ji))6-Dimethylallylami purine riboside質(zhi)量規格(ge)：>98%,植(zhi)物激素(su)級(ji)

角(jiao)質(zhi)細(xi)胞生長添加(jia)物(不(bu)含(han)動(dong)物成分(fen))KGS-acf6-甲(jia)基(ji)(>98%，BR)6-Methylcoumarin質(zhi)量規格(ge)：>98%，BR

IFNA5 Others Mouse 小鼠 IFNA5 / IFNaG 人(ren)細胞裂(lie)解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 5-甲(jia)基(ji)胞嘧(mi)啶 5-methylcytosine質(zhi)量規格(ge)：>98%,BR

EB病(bing)毒轉化的人(ren)B細(xi)胞;KMY10027-乙(yi)基(ji)(標(biao)準品(pin))7-Ethylcamptothecin質(zhi)量規格(ge)：HPLC>98%,標(biao)準品(pin)

大(da)鼠腦(nao)膠(jiao)質瘤(liu)細胞;C6 腎癌細胞，OS-RC-2細(xi)胞 OK細(xi)胞，負(fu)鼠腎細胞7-乙(yi)基(ji)7-Ethylcamptothecin質(zhi)量規格(ge)：>98%,BR
REG4 Others Human 人(ren) REG4 / RELP / GISP CHO細(xi)胞裂(lie)解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 水(shui)(HPLC grade)質(zhi)量規格(ge)：HPLC gradeWater

人(ren)血管(guan)平滑肌細胞cDNAHDLEC cDNA馬來酸(suan),順(shun)丁1二(er)酸(suan)質量規格(ge)：AR,HPLC>99%Maleic acid

豬(zhu)腎細胞;PK-15 內膜(mo)腺癌細胞，HEC-1-B細(xi)胞 Fc細(xi)胞，615小鼠前(qian)胃(wei)癌瘤(liu)株硫(liu)酸(suan)銨質量規格(ge)：>99%,分(fen)子生物學(xue)級(ji)Ammonium sulfate

人(ren)胚腎細胞;293FT氯(lv)化銫(se)質量規格(ge)：>99%,分(fen)子生物學(xue)級(ji)Cesium chloride

HA Others H1N1 甲(jia)型(xing)流感(gan) H1N1 (A/WSN/1933) 血凝素(su) (Hemagglutinin / HA) 人(ren)細胞裂(lie)解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 5-溴(xiu)-4-氯(lv)-3-吲(yin)哚基(ji)-N-乙(yi)酰-beta-D-氨(an)基(ji)半乳糖苷質量規格(ge)：分(fen)子生物學(xue)級(ji)X-Galactosamidide
香薷探(tan)針(zhen)法(fa)PCR鑒(jian)定試劑盒說明(ming)書(shu)中(zhong)國(guo)倉(cang)鼠卵巢(chao)細(xi)胞(亞(ya)系(xi)克隆(long));CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ1 cDNATTE-20XLIQ.CONC.TTE濃(nong)縮液1L#N/A

小鼠樹(shu)突(tu)狀(zhuang)細(xi)胞肉瘤(liu)低轉移(yi)細(xi)胞(VAP33-GFP融合(he)蛋白(bai)穩定過表(biao)達(da));DG6-VAP33-GFP 小鼠表(biao)皮(pi)色(se)素(su)細(xi)胞*培養(yang)基(ji) 100mL炳(bing)醋倍錄米(mi) BqcloMqthcsonq Dipropionctq 2234-9-8

RGC-5, 小鼠視(shi)網(wang)膜(mo)神(shen)經(jing)節(jie)細(xi)胞 MouseCOMT兒(er)氧(yang)位(wei)甲(jia)基(ji)轉移(yi)酶250克BR，200u/g

LRPAP1 Others Mouse 小鼠