西(xi)洋(yang)參PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑盒(he)說(shuo)明(ming)書(shu) 分(fen)子(zi)生物試(shi)劑(ji)

儲存條件(jian)：
14℃或－20℃樣品收(shou)集(ji)、處理及保存方(fang)法
1. 血清：使用不(bu)含(han)熱(re)原和(he)內毒素的(de)試管(guan)，操(cao)作過(guo)程中避(bi)免任何細胞刺激(ji)，收(shou)集(ji)血液(ye)後(hou)，3000 轉離(li)心(xin)10 分(fen)鐘將(jiang)血(xue)清和(he)紅(hong)細胞迅速小心(xin)地分(fen)離(li)。
2. 血漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬(meng)酸鹽(yan)或肝(gan)素抗凝。3000 轉離(li)心(xin)30 分(fen)鐘取(qu)上清(qing)。
3. 細胞上清(qing)液：3000 轉離(li)心(xin)10 分(fen)鐘去除(chu)顆(ke)粒和(he)聚合物。
4. 組織勻(yun)漿(jiang)：將組織加(jia)入適量(liang)生理鹽(yan)水搗(dao)碎。3000 轉離(li)心(xin)10 分(fen)鐘取(qu)上清(qing)。
5. 保存：如果樣本收集(ji)後(hou)不(bu)及時檢測(ce)，請(qing)按(an)壹(yi)次用量分(fen)裝(zhuang)，凍存於(yu)-20℃，避免反(fan)復(fu)凍融(rong)，在室(shi)溫(wen)下(xia)解(jie)凍並確(que)保樣品均勻(yun)地充分(fen)解(jie)凍。

特點：
1. 即開即用，用(yong)戶只需要提供(gong)病(bing)毒樣品。
2. 根據(ju)地黃(huang)保守序列(lie)設(she)計的(de)專壹(yi)性引(yin)物，與(yu)相(xiang)關(guan)病(bing)毒無交叉(cha)反(fan)應。
3. 靈(ling)敏度可以達到幾(ji)百(bai)拷貝/反(fan)應。
4. 壹管(guan)式熒(ying)光定(ding)量(liang) PCR 檢測(ce)，避免(mian)後(hou)續(xu)汙(wu)染(ran)。
5. 本試劑盒(he)足(zu)夠 50 次 20μL 反(fan)應體系的(de)熒(ying)光定(ding)量(liang) PCR。
6. 本產品只(zhi)適用(yong)於(yu)科(ke)研，不能用(yong)於(yu)臨(lin)床診(zhen)斷。

使用方(fang)法：
壹、樣品采集(ji)：
1、食品樣品：樣品的(de)采集(ji)與(yu)預(yu)培養(yang)按(an)照樣品的(de)采集(ji)與(yu)預(yu)培養(yang)按(an)照《食(shi)品(pin)衛生微(wei)生物學(xue)檢(jian)驗阪(ban)崎腸(chang)桿(gan)菌(jun)檢(jian)驗要求進(jin)行。
2、血液樣品：用(yong)無菌(jun)註(zhu)射器(qi)抽取(qu)受(shou)檢者(zhe)靜脈血(xue)2mL，註(zhu)入無菌(jun)EDTA2Na(或檸(ning)檬(meng)酸鈉(na))抗凝管(guan)，立即混(hun)勻(yun)。
3、糞便(bian)樣品：取(qu)糞便(bian)置於(yu)滅(mie)菌(jun)的(de)收集(ji)管(guan)中送(song)檢(jian)。
4、病(bing)竈部(bu)位樣品：取(qu)發(fa)病(bing)部位(wei)新(xin)鮮(xian)滲出(chu)物、粘(zhan)液(ye)膿(nong)血(xue)送(song)檢(jian)。
壹、稀釋 PCR 陽性對照（以(yi) 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(ge) 10 倍稀釋度為例(li)）
1. 註(zhu)意(yi)：由於(yu)標準(zhun)品濃(nong)度非(fei)常(chang)高(gao)，因此(ci)下(xia)列(lie)稀(xi)釋操(cao)作壹(yi)定(ding)要在獨(du)立(li)的(de)區域進(jin)行，千(qian)萬(wan)不(bu)能汙(wu)染(ran)樣品或(huo)本試劑盒(he)的(de)其他(ta)成分(fen)）。為增(zeng)加(jia)產品穩定性和(he)避免擴(kuo)散傳染(ran)性病(bing)原，本產品不(bu)提(ti)供(gong)活(huo)體樣品做(zuo)陽性對照，只(zhi)提(ti)供(gong)可以直接(jie)使(shi)用(yong)的(de) DNA段作為陽性對照。
2. 標記(ji) 6 個(ge)離心(xin)管(guan)，分(fen)別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍(qiang)頭分(fen)別(bie)加入 45 μL 熒(ying)光 PCR 模板稀釋液(ye)（用(yong)帶(dai)芯槍(qiang)頭，下(xia)同）。
4. 在 7 號(hao)管(guan)中加(jia)入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的(de)陽性對照，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得(de)1×10E7 拷貝/μL 的(de)陽性對照。放(fang)冰(bing)上待用。
5. 換槍頭，在 6 號(hao)管(guan)中加(jia)入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的(de)陽性對照(上步稀(xi)釋(shi)所得(de))，充分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得(de) 1×10E6 拷貝/μL 的(de)陽性對照。放(fang)冰(bing)上待用。
6. 換槍頭，在 5 號(hao)管(guan)中加(jia)入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的(de)陽性對照到 5 號(hao)管(guan)中，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得(de) 1×10E5 拷貝/μL 的(de)陽性對照。放(fang)冰(bing)上待用。
7. 重復(fu)上面(mian)的(de)操(cao)作直到得到 6 個(ge)稀釋(shi)度的(de)陽性對照。放(fang)冰(bing)上待用。
註(zhu)：上述(shu)樣品建(jian)議經(jing)過(guo)增(zeng)菌(jun)後(hou)，收(shou)集(ji)培養(yang)物用(yong)於(yu)檢(jian)測(ce)。 
二(er)、DNA提取(qu)：
可采用PCR試劑盒配(pei)備(bei)的(de)DNA抽提(ti)液(ye)，按以下(xia)說(shuo)明(ming)進(jin)行DNA核酸的(de)粗提(ti)。也可采購上海(hai)澤葉(ye)生物科(ke)技(ji)有限公(gong)司生產(chan)的(de)DNA提取(qu)試(shi)劑盒(過(guo)柱法(fa)-熒(ying)光配(pei)套)或其他(ta)合適的(de)商(shang)業(ye)化(hua)產(chan)品，並(bing)按(an)照相(xiang)應(ying)試(shi)劑(ji)盒說(shuo)明(ming)進(jin)行操(cao)作。
1、液體培養(yang)物：取(qu)液(ye)體培養(yang)物100μL加到1.5mL無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中，8000rpm離心(xin)3min，盡(jin)量吸(xi)棄(qi)上清(qing)，加入50μL DNA抽提(ti)液(ye)充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
2、固(gu)體培養(yang)物：挑(tiao)取(qu)單克隆菌(jun)落(luo)與(yu)50μL DNA抽提(ti)液(ye)充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
3、糞便(bian)樣品：挑(tiao)取(qu)米(mi)粒大小糞便(bian)於(yu)滅(mie)菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中，加(jia)入0.5mL生理鹽(yan)水，振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，13000rpm離心(xin)3分(fen)鐘，棄(qi)上清(qing)，沈澱中加(jia)入50μL DNA抽提(ti)液(ye)充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
4、其他(ta)液體標本：取(qu)標本2-3mL，13000rpm離心(xin)3min，棄上清(qing)，沈澱中加(jia)入50μL DNA抽提(ti)液(ye)充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
註(zhu)：陽性對照和(he)陰性對照為已(yi)經(jing)抽提(ti)好(hao)的(de)核酸(無需提取(qu))，直接(jie)取(qu)5μL加入到反(fan)應體系中即可。由於(yu)陽性對照濃(nong)度較(jiao)高(gao)，建議在(zai)樣品制(zhi)備(bei)區域加(jia)入陽性對照。 
CD276 Others Human 人 CD276 / B7-H3 人細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對照) 硫(liu)鋅酸Alphalipoic acid質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%

L929 小鼠成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞（標準(zhun)品）Alphalipoic acid質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標準(zhun)品

CM-H043人肝(gan)實質(zhi)細胞*培養(yang)基(ji)100mLAmbroxol HCl質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%,BR

SK-MEL-1, 人皮膚色(se)素瘤細胞(標準(zhun)品)Ambroxol HCl質(zhi)量規(gui)格(ge)：含(han)量(liang)測(ce)定

人神(shen)經(jing)母(mu)細胞瘤細胞;SH-SY5Y 人牙(ya)周(zhou)膜成纖維(wei)細(xi)胞*培養(yang)基(ji) 100mL氨(an)1汀（三水(shui)）Amifostine質(zhi)量規(gui)格(ge)：幹(gan)品Purity≥98.0%
MICA Others Human 人 MICA 人細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對照) 鐠標準(zhun)溶液(1000µg/mL,基(ji)體：10%HCl)質(zhi)量規(gui)格(ge)：1000µg/mL,基(ji)體：10%HClPraseodymium standard

HES 人胚皮膚成(cheng)纖維(wei)樣細胞鎢標準(zhun)溶液(1000μg/ml,基(ji)體：0.1mol/LNaOH)質(zhi)量規(gui)格(ge)：1000μg/ml,基(ji)體：0.1mol/LNaOHTungsten solution

AGS人胃腺癌細胞N-乙酰神(shen)經(jing)氨(an)酸/唾液(ye)酸質(zhi)量規(gui)格(ge)：度(du)≥98.0%N-Acetyl Neuraminic Acid/NANA/Neu5Ac/SA

EB病(bing)毒轉化(hua)的(de)人B細胞;HH-16 人腦(nao)靜(jing)脈血(xue)管(guan)平滑肌(ji)細(xi)胞*培養(yang)基(ji) 100mL質(zhi)量規(gui)格(ge)：≥850 μg/mg,BRErythromycin
HEPG2.2.15 肝(gan)癌細胞HBV病(bing)毒株草(cao)酰(xian)乙酸Oxaloacetic acid質(zhi)量規(gui)格(ge)：>97%,BR

CL-0290MDA-MB-468(人癌細胞)5×106cells/瓶(ping)×2硫(liu)酸鋅七(qi)水(shui)(AR)Zinc sulfate, heptahydrate質(zhi)量規(gui)格(ge)：>99.5%,AR

RLF, 大鼠成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞1酸鉀鈉(na)四水(shui)Potassium  tatrate, tetrahydrate質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%,BR

雙位點HC-kit受(shou)體細胞株;DMF7 人內膜上皮細(xi)胞*培養(yang)基(ji) 100mL縮二(er)脲Biuret質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%,BR

人脊(ji)髓星(xing)形(xing)膠質(zhi)細胞總RNAHA-sp NA無水(分(fen)子(zi)生物學(xue)級(ji))Magnesium sulfate anhydrous質(zhi)量規(gui)格(ge)：>99%,分(fen)子(zi)生物學(xue)級(ji)
西(xi)洋(yang)參PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑盒(he)說(shuo)明(ming)書(shu)綿(mian)羊(yang)肺細(xi)胞;OAR-L1甘油激(ji)酶(mei)，英(ying)文名或(huo)英(ying)文縮(suo)寫(xie)：Glycerokinase，級別(bie)：BR，5′d(NNN NNN NNN N)3′，規格(ge)：100克

IL12A & IL12B Others Mouse 小鼠 IL12A & IL12B Heterodimer 人細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對照) Matrine (HPLC,≥98%) 16837-52-8 5G 標準(zhun)品

IMR-32 人神(shen)經(jing)母(mu)細胞瘤細胞拂化本 Fluorobqnzqnq 1946/6/6

CEM/C1人急性細(xi)胞白血病(bing)細胞 CEM/C1 h
實驗流程：
1. 整(zheng)個(ge)檢測(ce)過(guo)程應(ying)嚴格(ge)按(an)照本說(shuo)明(ming)書(shu)要求分(fen)別(bie)在試(shi)劑(ji)準(zhun)備(bei)區、樣本處理區和(he)PCR擴增區進(jin)行操(cao)作，各(ge)區(qu)實驗(yan)服(fu)、儀器 、耗材應獨立(li)使(shi)用(yong)，不(bu)能(neng)混(hun)用(yong)；實(shi)驗用吸頭(tou)采用帶(dai)濾(lv)芯吸(xi)頭；樣本處理區應(ying)配(pei)有生物安(an)全櫃，樣本處理在生物安(an)全櫃中進(jin)行操(cao)作；三個(ge)區應(ying)該(gai)配(pei)有紫外(wai)線殺菌(jun)裝(zhuang)置。
2. 為避(bi)免(mian)RNA降解(jie)，樣本處理過(guo)程應(ying)在0-4℃條件(jian)下(xia)操(cao)作，且(qie)完(wan)成(cheng)實(shi)驗(yan)後(hou)立(li)即上機檢測(ce)；樣本處理過(guo)程中使(shi)用的(de)器具(ju)耗(hao)材(cai)應經(jing)過(guo)無核酶(mei)處(chu)理。

3. 每(mei)次實驗應該(gai)設(she)置陰(yin)、陽性對照。
4. 試劑盒所有(you)試(shi)劑(ji)在(zai)使(shi)用(yong)前應(ying)該(gai)在(zai)常(chang)溫(wen)下(xia)充(chong)分(fen)融(rong)化混(hun)勻(yun)，並應瞬(shun)時(shi)離心(xin)。
5. 試劑盒內所配(pei)陰性和(he)陽性對照在(zai)壹(yi)次使用前應(ying)全部轉移至(zhi)標本準(zhun)備(bei)區，並(bing)單獨存放(fang)。
6. 為防(fang)止熒(ying)光幹(gan)擾(rao)，應(ying)避(bi)免裸(luo)手(shou)直接(jie)接(jie)觸(chu)PCR反(fan)應管(guan)，並應(ying)避免(mian)在PCR反(fan)應管(guan)上進(jin)行任何標記(ji)。
7. 儀器 擴增相(xiang)關(guan)參數(shu)應(ying)按(an)照本說(shuo)明(ming)書(shu)相(xiang)關(guan)要求進(jin)行設(she)置；不(bu)同批號(hao)試(shi)劑(ji)不(bu)能混(hun)用(yong)。
8. ABI系列(lie)熒(ying)光定(ding)量(liang)PCR儀參數(shu)設(she)置中不(bu)選ROX校(xiao)正(zheng)，淬(cui)滅(mie)基(ji)因選(xuan)擇(ze)None。
9. 實驗過(guo)程中產(chan)品的(de)廢棄(qi)物應(ying)該(gai)進(jin)行無害化(hua)處(chu)理後(hou)方(fang)可丟棄(qi)。