山(shan)慈菇(gu)探(tan)針(zhen)法PCR鑒(jian)定試劑(ji)盒(he)說(shuo)明書(shu)

特(te)點(dian)：
1. 即(ji)開即(ji)用，用戶(hu)只需(xu)要提供(gong)病(bing)毒(du)樣(yang)品(pin)。
2. 根(gen)據(ju)地黃(huang)保(bao)守序列設(she)計的專(zhuan)壹(yi)性(xing)引物，與相關(guan)病(bing)毒(du)無(wu)交叉(cha)反應(ying)。
3. 靈(ling)敏度可(ke)以(yi)達到幾(ji)百(bai)拷貝/反(fan)應(ying)。
4. 壹(yi)管(guan)式(shi)熒(ying)光(guang)定(ding)量 PCR 檢(jian)測，避免(mian)後(hou)續汙染(ran)。
5. 本(ben)試劑(ji)盒(he)足夠(gou) 50 次(ci) 20μL 反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)的熒(ying)光定(ding)量 PCR。
6. 本(ben)產品(pin)只適用於(yu)科(ke)研(yan)，不(bu)能用於(yu)臨床診(zhen)斷。

使(shi)用方(fang)法：
壹(yi)、樣(yang)品(pin)采(cai)集(ji)：
1、食(shi)品(pin)樣(yang)品(pin)：樣(yang)品(pin)的采(cai)集與預培(pei)養(yang)按照樣(yang)品(pin)的采(cai)集與預培(pei)養(yang)按照《食品(pin)衛生(sheng)微(wei)生(sheng)物學(xue)檢(jian)驗阪(ban)崎(qi)腸桿(gan)菌(jun)檢(jian)驗要求進(jin)行(xing)。
2、血(xue)液樣(yang)品(pin)：用無(wu)菌(jun)註(zhu)射器(qi)抽取(qu)受(shou)檢(jian)者靜脈血(xue)2mL，註(zhu)入無(wu)菌(jun)EDTA2Na(或檸(ning)檬酸鈉)抗(kang)凝管(guan)，立(li)即(ji)混(hun)勻。
3、糞便樣(yang)品(pin)：取(qu)糞便置(zhi)於(yu)滅(mie)菌(jun)的收(shou)集管(guan)中(zhong)送(song)檢(jian)。
4、病(bing)竈部(bu)位樣(yang)品(pin)：取(qu)發(fa)病(bing)部位(wei)新(xin)鮮(xian)滲出(chu)物、粘液膿血(xue)送(song)檢(jian)。
壹(yi)、稀(xi)釋 PCR 陽(yang)性(xing)對(dui)照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(ge) 10 倍(bei)稀(xi)釋度為例(li)）
1. 註(zhu)意(yi)：由(you)於(yu)標(biao)準(zhun)品(pin)濃(nong)度非(fei)常(chang)高，因(yin)此下(xia)列稀(xi)釋操(cao)作壹定要在獨立(li)的區域進行(xing)，千萬(wan)不(bu)能汙染(ran)樣(yang)品(pin)或本試劑(ji)盒(he)的其(qi)他成(cheng)分(fen)）。為增(zeng)加產品(pin)穩(wen)定性(xing)和(he)避(bi)免(mian)擴散(san)傳染性病(bing)原，本(ben)產品(pin)不(bu)提(ti)供(gong)活體(ti)樣(yang)品(pin)做(zuo)陽(yang)性(xing)對(dui)照，只提供可以(yi)直(zhi)接(jie)使用的 DNA段(duan)作為陽(yang)性對(dui)照。
2. 標(biao)記 6 個(ge)離(li)心(xin)管(guan)，分(fen)別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭(tou)分(fen)別(bie)加入 45 μL 熒(ying)光(guang) PCR 模(mo)板(ban)稀(xi)釋液（用帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭(tou)，下同(tong)）。
4. 在 7 號(hao)管(guan)中(zhong)加(jia)入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照，充分(fen)震(zhen)蕩 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de)1×10E7 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照。放冰(bing)上(shang)待(dai)用。
5. 換槍(qiang)頭(tou)，在 6 號(hao)管(guan)中(zhong)加(jia)入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照(上(shang)步(bu)稀(xi)釋所(suo)得)，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照。放冰(bing)上(shang)待(dai)用。
6. 換槍(qiang)頭(tou)，在 5 號(hao)管(guan)中(zhong)加(jia)入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照到 5 號(hao)管(guan)中(zhong)，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照。放冰(bing)上(shang)待(dai)用。
7. 重(zhong)復(fu)上面(mian)的操(cao)作直到得(de)到 6 個(ge)稀(xi)釋度的陽(yang)性對(dui)照。放冰(bing)上(shang)待(dai)用。
註(zhu)：上(shang)述樣(yang)品(pin)建(jian)議(yi)經(jing)過(guo)增菌(jun)後(hou)，收(shou)集(ji)培養(yang)物用於(yu)檢(jian)測。 
二、DNA提(ti)取(qu)：
可(ke)采(cai)用PCR試劑(ji)盒(he)配備的DNA抽(chou)提(ti)液，按以下說(shuo)明進(jin)行(xing)DNA核(he)酸的粗(cu)提。也(ye)可采購上(shang)海(hai)澤(ze)葉生(sheng)物科(ke)技有(you)限(xian)公(gong)司生(sheng)產的DNA提(ti)取(qu)試劑(ji)盒(he)(過(guo)柱法-熒(ying)光(guang)配套)或其(qi)他合適的商(shang)業(ye)化產品(pin)，並(bing)按(an)照相應(ying)試劑(ji)盒(he)說(shuo)明進(jin)行(xing)操(cao)作。
1、液體(ti)培(pei)養(yang)物：取(qu)液體(ti)培(pei)養(yang)物100μL加(jia)到1.5mL無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，8000rpm離(li)心(xin)3min，盡(jin)量吸(xi)棄上(shang)清(qing)，加入50μL DNA抽(chou)提(ti)液充分(fen)混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
2、固(gu)體(ti)培(pei)養(yang)物：挑(tiao)取(qu)單克(ke)隆(long)菌(jun)落與50μL DNA抽(chou)提(ti)液充分(fen)混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
3、糞便樣(yang)品(pin)：挑(tiao)取(qu)米粒(li)大(da)小(xiao)糞便於(yu)滅(mie)菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，加(jia)入0.5mL生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)，振蕩混(hun)勻，13000rpm離(li)心(xin)3分(fen)鐘(zhong)，棄上(shang)清(qing)，沈澱(dian)中(zhong)加(jia)入50μL DNA抽(chou)提(ti)液充分(fen)混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
4、其(qi)他液體(ti)標(biao)本：取(qu)標(biao)本2-3mL，13000rpm離(li)心(xin)3min，棄上(shang)清(qing)，沈澱(dian)中(zhong)加(jia)入50μL DNA抽(chou)提(ti)液充分(fen)混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
註(zhu)：陽(yang)性(xing)對(dui)照和(he)陰性對(dui)照為已(yi)經(jing)抽提(ti)好(hao)的核(he)酸(無(wu)需(xu)提(ti)取(qu))，直(zhi)接(jie)取(qu)5μL加(jia)入到反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)中(zhong)即(ji)可(ke)。由於(yu)陽性(xing)對(dui)照濃度較(jiao)高(gao)，建議(yi)在樣(yang)品(pin)制(zhi)備區域加入陽(yang)性(xing)對照。 
實(shi)驗流程(cheng)：
1. 整(zheng)個(ge)檢(jian)測過(guo)程(cheng)應嚴格(ge)按(an)照本說(shuo)明書(shu)要求分(fen)別(bie)在試劑(ji)準(zhun)備(bei)區、樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)區和(he)PCR擴增(zeng)區進行(xing)操(cao)作，各(ge)區實驗服(fu)、儀器(qi) 、耗(hao)材(cai)應(ying)獨立(li)使用，不(bu)能混(hun)用；實(shi)驗用吸(xi)頭(tou)采用帶(dai)濾(lv)芯(xin)吸(xi)頭(tou)；樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)區應配有(you)生(sheng)物安全櫃(gui)，樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)在生(sheng)物安全櫃(gui)中(zhong)進(jin)行(xing)操(cao)作；三個(ge)區應該(gai)配有(you)紫外線(xian)殺(sha)菌(jun)裝(zhuang)置(zhi)。
2. 為避(bi)免(mian)RNA降(jiang)解，樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)過(guo)程(cheng)應在0-4℃條(tiao)件(jian)下(xia)操(cao)作，且(qie)完(wan)成(cheng)實(shi)驗後(hou)立(li)即(ji)上(shang)機檢(jian)測；樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)過(guo)程(cheng)中(zhong)使(shi)用的器(qi)具耗(hao)材(cai)應(ying)經(jing)過(guo)無(wu)核(he)酶(mei)處(chu)理(li)。
3. 每(mei)次(ci)實(shi)驗應該(gai)設(she)置(zhi)陰、陽性(xing)對(dui)照。
4. 試劑(ji)盒(he)所(suo)有(you)試劑(ji)在使用前應該(gai)在常溫(wen)下(xia)充(chong)分(fen)融(rong)化混(hun)勻，並(bing)應瞬時(shi)離(li)心(xin)。
5. 試劑(ji)盒(he)內(nei)所配陰性和(he)陽(yang)性對(dui)照在壹次(ci)使(shi)用前應全(quan)部轉(zhuan)移(yi)至(zhi)標(biao)本準(zhun)備(bei)區，並單獨存(cun)放。
6. 為防(fang)止(zhi)熒(ying)光(guang)幹(gan)擾(rao)，應(ying)避(bi)免(mian)裸(luo)手(shou)直(zhi)接接(jie)觸PCR反(fan)應(ying)管(guan)，並(bing)應避免(mian)在PCR反(fan)應(ying)管(guan)上(shang)進行(xing)任何(he)標(biao)記。
7. 儀(yi)器(qi) 擴增(zeng)相(xiang)關(guan)參(can)數(shu)應(ying)按(an)照本說(shuo)明書(shu)相(xiang)關(guan)要求進(jin)行(xing)設(she)置(zhi)；不(bu)同(tong)批號(hao)試劑(ji)不能混(hun)用。
8. ABI系(xi)列熒(ying)光定量PCR儀(yi)參(can)數(shu)設(she)置(zhi)中(zhong)不(bu)選(xuan)ROX校(xiao)正(zheng)，淬(cui)滅(mie)基因選擇None。
9. 實(shi)驗過(guo)程(cheng)中(zhong)產品(pin)的廢(fei)棄物(wu)應(ying)該(gai)進(jin)行(xing)無(wu)害化處(chu)理(li)後(hou)方(fang)可丟(diu)棄。
儲存(cun)條(tiao)件(jian)：
14℃或－20℃樣(yang)品(pin)收(shou)集(ji)、處(chu)理(li)及保(bao)存方(fang)法
1. 血(xue)清(qing)：使用不(bu)含熱(re)原和(he)內(nei)毒(du)素的試管(guan)，操(cao)作過(guo)程(cheng)中(zhong)避(bi)免(mian)任何(he)細胞刺激(ji)，收集血(xue)液後(hou)，3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)將血(xue)清(qing)和(he)紅(hong)細胞迅(xun)速(su)小(xiao)心地分(fen)離(li)。
2. 血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬酸鹽(yan)或肝素抗(kang)凝。3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)30 分(fen)鐘(zhong)取(qu)上清(qing)。
3. 細胞上(shang)清(qing)液：3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆(ke)粒(li)和(he)聚(ju)合物。
4. 組(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)：將組(zu)織(zhi)加(jia)入適量生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)搗(dao)碎。3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)取(qu)上清(qing)。
5. 保(bao)存：如(ru)果樣(yang)本(ben)收集後(hou)不(bu)及時(shi)檢(jian)測，請按壹(yi)次(ci)用量分(fen)裝(zhuang)，凍(dong)存於(yu)-20℃，避(bi)免(mian)反復(fu)凍(dong)融(rong)，在室(shi)溫(wen)下(xia)解凍(dong)並確(que)保(bao)樣(yang)品(pin)均(jun)勻(yun)地充(chong)分(fen)解凍(dong)。
CD19 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) CD19 / Leu-12 人細胞裂解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 匹(pi)格(ge)列酮(tong)鹽(yan)酸鹽(yan)（標(biao)準(zhun)品(pin)）Pioglitazone HCl質量規(gui)格(ge)：HPLC>98%,標(biao)準(zhun)品(pin)

人滋養(yang)層(ceng)絨毛細胞裂解物HVTL苯噻啶蘋果酸鹽(yan)Pizotifen Malate質量規(gui)格(ge)：>98.5%,BR

IFNA8 Others Human 人 Ierferon alpha-B / IFNA8 人細胞裂解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 硫(liu)酸多粘菌(jun)素BPolymyxin B Sulfate質量規(gui)格(ge)：>6500 IU/mg,USP30

BALB/C小(xiao)鼠(shu)肝(gan)上皮(pi)細胞;BNL 1ME A.7R.1硫(liu)酸多粘菌(jun)素B(標(biao)準(zhun)品(pin))Polymyxin B Sulfate質量規(gui)格(ge)：含量測定

QSG-7701細胞，人胚(pei)肝細胞正(zheng)常(chang) 人APP-PS1雙(shuang)基(ji)因轉染CHO細胞株,7WPS1細胞 中(zhong)國(guo)倉(cang)鼠(shu)卵(luan)巢細胞(亞(ya)系(xi)克(ke)隆(long)); EPO-CHO-T醋(cu)酸普(pu)蘭(lan)林(lin)肽(tai)Pramlintide Acetate質量規(gui)格(ge)：度≥98.0%
Promocell C-26011 Renal Epithelial Cell GrowthMedium KIT, 腎(shen)上(shang)皮(pi)細胞生(sheng)長培(pei)養(yang)基套(tao)裝(zhuang) 500mlN4-苯甲酰(xian)基(ji)-5'-O-(4,4'-二甲氧(yang)基(ji)三苯基)-2'-脫(tuo)氧胞甘(gan)(DMT- Bz- dC）Bz-DMT-dC質量規(gui)格(ge)：>98%,BR

肝(gan)細胞培(pei)養(yang)基HMN6-苯甲酰(xian)基(ji)-5'-O-(4,4'-二甲氧(yang)基(ji)三苯甲基(ji))-2'-脫(tuo)氧腺苷(DMT-dA-Bz)Bz-DMT-dA質量規(gui)格(ge)：>98%,BR

LAMP2 Others Cymolgus 食(shi)蟹(xie)猴 LAMP2 人細胞裂解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 2,2'-聯(lian)-4-勒(le)皮(pi)啶2,2'-Bi-4-lepidine質量規(gui)格(ge)：

人胚(pei)肺成(cheng)纖維(wei)細胞;WI-38 [WI38]2,2'-聯(lian)嘧(mi)啶(ding)(>95.0%(GC))2,2'-Bipyrimidyl質量規(gui)格(ge)：>95.0%(GC)

SUNE-1亞(ya)株13-9B細胞，人鼻(bi)咽癌(ai)細胞系(xi) 小(xiao)鼠(shu)胚(pei)胎(tai)成(cheng)纖維(wei)細胞,BALB/3T3 clone A31細胞 CM-H063人腎(shen)皮(pi)層(ceng)上皮(pi)細胞*培(pei)養(yang)基100mL2,2'-二辛可寧酸(>98.0%(HPLC))2,2'-Bicinchoninic Acid質量規(gui)格(ge)：>98.0%(HPLC)
MDA-MB-157(人癌(ai)細胞) 5×106cells/瓶(ping)×2醋(cu)酸德(de)舍瑞(rui)林(lin)質量規(gui)格(ge)：>99%,BRDeslorelin Acetate

Anglne(人卵(luan)巢癌(ai)細胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 CM-R067大(da)鼠(shu)腎(shen)足突(tu)細胞*培(pei)養(yang)基100mL 人胚(pei)腎(shen)細胞-F克(ke)隆(long);293F;去(qu)氨(an)壓素質量規(gui)格(ge)：>98%,BR,醋(cu)酸鹽(yan)形(xing)式(shi) Acetate

CM-H071人腎(shen)動(dong)脈(mai)平(ping)滑肌(ji)細胞*培(pei)養(yang)基100mL地塞米,氟(fu)美（標(biao)準(zhun)品(pin)）質量規(gui)格(ge)：HPLC>98%,標(biao)準(zhun)品(pin)Dexamethasone

SPHK1 Others Human 人 SPHK1 / Sphingosine Kinase 1 桿(gan)狀病(bing)毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細胞裂解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 卓(zhuo)質量規(gui)格(ge)：>98%,BRDiltiazem HCL

人表皮(pi)色素細胞-胎(tai)兒HEM-f卓(zhuo)(標(biao)準(zhun)品(pin))質量規(gui)格(ge)：含量測定，標(biao)準(zhun)品(pin)Diltiazem HCL
山(shan)慈(ci)菇(gu)探(tan)針(zhen)法PCR鑒(jian)定試劑(ji)盒(he)說(shuo)明書(shu)SLAMF6 Others Human 人 Ly108 / SLAMF6 人細胞裂解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照) LY2940680質量規(gui)格(ge)：>98%LY2940680

人滋養(yang)層(ceng)絨毛細胞總(zong)RNAHVT NALY2886721 質量規(gui)格(ge)：>98，BACE1 inhibitorLY-2886721

小(xiao)鼠(shu)神經(jing)皮(pi)質細胞(MN-c)(1×106)利尼(ni)伐(fa)尼(ni)；ABT869質量規(gui)格(ge)：>98%，VEGFR/PDGFR抑制(zhi)劑 Linifanib (ABT-869)

家(jia)貓(mao)皮(pi)膚(fu)細胞;FCA-S1頭(tou)孢匹林鈉(標(biao)準(zhun)品(pin))質量規(gui)格(ge)：含量測定Cefa