廣藿香PCR鑒定試(shi)劑(ji)盒(he)說(shuo)明(ming)書

儲(chu)存條(tiao)件：
14℃或(huo)－20℃樣(yang)品(pin)收(shou)集(ji)、處(chu)理(li)及保存方(fang)法
1. 血(xue)清：使(shi)用(yong)不(bu)含(han)熱(re)原和(he)內(nei)毒(du)素的試(shi)管(guan)，操作過程中避(bi)免任何(he)細胞(bao)刺(ci)激，收(shou)集(ji)血(xue)液(ye)後，3000 轉(zhuan)離(li)心10 分(fen)鐘(zhong)將血(xue)清和紅(hong)細胞(bao)迅(xun)速(su)小(xiao)心地分離。
2. 血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬(meng)酸(suan)鹽(yan)或(huo)肝素抗凝。3000 轉(zhuan)離(li)心30 分(fen)鐘(zhong)取(qu)上(shang)清。
3. 細(xi)胞(bao)上(shang)清液(ye)：3000 轉(zhuan)離(li)心10 分(fen)鐘(zhong)去除顆粒(li)和聚(ju)合(he)物。
4. 組織(zhi)勻(yun)漿：將組織(zhi)加(jia)入適量生理(li)鹽(yan)水搗(dao)碎。3000 轉(zhuan)離(li)心10 分(fen)鐘(zhong)取(qu)上(shang)清。
5. 保(bao)存：如果樣(yang)本收集(ji)後不(bu)及時檢測(ce)，請按壹次(ci)用(yong)量分裝，凍存於-20℃，避(bi)免(mian)反(fan)復凍融(rong)，在室溫(wen)下(xia)解(jie)凍並(bing)確(que)保(bao)樣(yang)品均勻(yun)地充分解(jie)凍。

特點：
1. 即(ji)開即(ji)用(yong)，用(yong)戶(hu)只需要(yao)提供病毒樣品(pin)。
2. 根據(ju)地黃(huang)保守(shou)序(xu)列設計(ji)的專(zhuan)壹性引(yin)物，與(yu)相關(guan)病毒(du)無交叉反應(ying)。
3. 靈敏(min)度(du)可以(yi)達到幾(ji)百(bai)拷貝/反(fan)應(ying)。
4. 壹管(guan)式熒(ying)光定量 PCR 檢測(ce)，避免(mian)後續(xu)汙(wu)染。
5. 本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)足(zu)夠(gou) 50 次(ci) 20μL 反(fan)應(ying)體(ti)系的熒光定量 PCR。
6. 本(ben)產(chan)品(pin)只適用(yong)於科研(yan)，不(bu)能(neng)用(yong)於臨床診斷。

使(shi)用(yong)方(fang)法：
壹、樣(yang)品采集(ji)：
1、食品樣(yang)品(pin)：樣品的(de)采集(ji)與(yu)預培養按照樣品的(de)采集(ji)與(yu)預培養按照《食品衛(wei)生微(wei)生物(wu)學(xue)檢驗(yan)阪崎(qi)腸桿(gan)菌檢驗(yan)要求(qiu)進行。
2、血(xue)液(ye)樣(yang)品(pin)：用(yong)無菌(jun)註(zhu)射器抽(chou)取(qu)受(shou)檢者(zhe)靜(jing)脈(mai)血(xue)2mL，註(zhu)入無菌(jun)EDTA2Na(或(huo)檸(ning)檬(meng)酸(suan)鈉)抗(kang)凝管(guan)，立即(ji)混勻(yun)。
3、糞便樣品：取糞便置於滅菌(jun)的(de)收(shou)集(ji)管(guan)中送(song)檢。
4、病(bing)竈部位(wei)樣(yang)品(pin)：取發病(bing)部位新鮮(xian)滲(shen)出物(wu)、粘液(ye)膿血(xue)送(song)檢。
壹、稀(xi)釋 PCR 陽(yang)性對(dui)照（以 10E2-10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍(bei)稀(xi)釋度(du)為(wei)例(li)）
1. 註(zhu)意：由(you)於(yu)標(biao)準(zhun)品濃(nong)度(du)非(fei)常(chang)高，因(yin)此下(xia)列(lie)稀釋操作壹定(ding)要在獨立的(de)區域進行，千萬(wan)不(bu)能(neng)汙(wu)染樣(yang)品(pin)或本(ben)試(shi)劑盒(he)的(de)其(qi)他成分(fen)）。為(wei)增(zeng)加(jia)產品穩(wen)定性和(he)避免擴(kuo)散(san)傳染性病(bing)原，本產(chan)品(pin)不(bu)提供活體樣品(pin)做陽性對(dui)照，只提供可以直接(jie)使(shi)用(yong)的 DNA段(duan)作為(wei)陽(yang)性對(dui)照。
2. 標(biao)記(ji) 6 個(ge)離心管(guan)，分別(bie)為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶芯槍(qiang)頭(tou)分(fen)別(bie)加(jia)入 45 μL 熒(ying)光 PCR 模(mo)板(ban)稀(xi)釋液(ye)（用(yong)帶芯槍(qiang)頭(tou)，下(xia)同）。
4. 在 7 號(hao)管(guan)中加(jia)入 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照，充分震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de)1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照。放冰上(shang)待(dai)用(yong)。
5. 換(huan)槍(qiang)頭(tou)，在 6 號(hao)管(guan)中加(jia)入 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照(上(shang)步(bu)稀釋所得)，充分震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照。放冰上(shang)待(dai)用(yong)。
6. 換(huan)槍(qiang)頭(tou)，在 5 號(hao)管(guan)中加(jia)入 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照到 5 號(hao)管(guan)中，充分震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E5 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照。放冰上(shang)待(dai)用(yong)。
7. 重(zhong)復(fu)上(shang)面的操作直到(dao)得(de)到 6 個(ge)稀釋度(du)的陽(yang)性對(dui)照。放冰上(shang)待(dai)用(yong)。
註(zhu)：上(shang)述樣(yang)品建(jian)議(yi)經過增菌後，收(shou)集(ji)培養物(wu)用(yong)於檢測(ce)。 
二(er)、DNA提取：
可(ke)采(cai)用(yong)PCR試(shi)劑(ji)盒(he)配(pei)備的(de)DNA抽(chou)提液(ye)，按以下(xia)說(shuo)明(ming)進行DNA核(he)酸(suan)的粗(cu)提。也(ye)可采(cai)購上(shang)海澤(ze)葉生物(wu)科(ke)技(ji)有限(xian)公(gong)司生產(chan)的(de)DNA提取試劑盒(he)(過柱法-熒(ying)光配(pei)套)或(huo)其(qi)他合(he)適的商業(ye)化(hua)產品(pin)，並(bing)按照相應試(shi)劑盒(he)說(shuo)明(ming)進行操作。
1、液(ye)體(ti)培養物(wu)：取(qu)液(ye)體(ti)培養物(wu)100μL加(jia)到1.5mL無菌(jun)離心管(guan)中，8000rpm離(li)心3min，盡(jin)量(liang)吸(xi)棄(qi)上(shang)清，加(jia)入50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min，取(qu)上(shang)清5μL進行PCR反(fan)應(ying)。
2、固(gu)體(ti)培養物(wu)：挑取單(dan)克(ke)隆菌(jun)落(luo)與(yu)50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min，取(qu)上(shang)清5μL進行PCR反(fan)應(ying)。
3、糞便樣品：挑取米粒(li)大小(xiao)糞便於滅菌離(li)心管(guan)中，加(jia)入0.5mL生理(li)鹽(yan)水，振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)，13000rpm離(li)心3分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)上(shang)清，沈澱中(zhong)加(jia)入50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min取(qu)上(shang)清5μL進行PCR反(fan)應(ying)。
4、其(qi)他液(ye)體(ti)標(biao)本(ben)：取標(biao)本(ben)2-3mL，13000rpm離(li)心3min，棄(qi)上(shang)清，沈澱中(zhong)加(jia)入50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min取(qu)上(shang)清5μL進行PCR反(fan)應(ying)。
註(zhu)：陽性對(dui)照和陰(yin)性對(dui)照為(wei)已(yi)經抽(chou)提好(hao)的(de)核酸(suan)(無需(xu)提取)，直接(jie)取(qu)5μL加(jia)入到反應體(ti)系中即(ji)可。由(you)於(yu)陽(yang)性對(dui)照濃度(du)較高(gao)，建(jian)議(yi)在樣品制備(bei)區域加(jia)入陽性對(dui)照。 
IFI30 Others Human 人 IFI30 人細(xi)胞裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性對(dui)照) 外消(xiao)旋(xuan)西他列汀rac-Sitagliptin質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：美國(guo)進口(kou)

大(da)鼠(shu)腎(shen)動脈(mai)內(nei)皮細胞*培養基(ji) 100mL1酸(suan)西他列汀Sitagliptin Phosphate質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：美國(guo)進口(kou)

JeKo-1人套(tao)細胞(bao)瘤細胞 JeKo-1 human male cell lymphoma cells IMDM培養基(ji)(GIBCO)+20%FBS西他列汀N-硫(liu)酸(suan)鹽(yan)Sitagliptin N-Sulfate質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：美國(guo)進口(kou)

IGFBP1 Protein Cymolgus 重(zhong)組食蟹(xie)猴(hou) IGFBP1 蛋白 (His 標(biao)簽(qian))西他列汀氨(an)基(ji)甲(jia)酰(xian)β-D-葡(pu)萄糖苷酸(suan)Sitagliptin Carbamoyl β-D-Glucuronide質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：美國(guo)進口(kou)

H22(小(xiao)鼠(shu)肝癌細胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 小(xiao)鼠(shu)顆粒(li)細胞(bao)MGC鹽(yan)酸(suan)鹽(yan)Spectimycin 質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：美國(guo)進口(kou)
IL1R1 Others Cymolgus 食蟹(xie)猴(hou) IL1R1 人細(xi)胞裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性對(dui)照) 卡格(ge)列凈半水；坎(kan)格(ge)列凈半水Canagliflozin hemihydrate質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：>98%,高(gao)效的(de)選(xuan)擇性亞(ya)型(xing)2鈉(na)-葡(pu)萄糖轉運(yun)蛋白(SGLT2) 抑(yi)制劑(ji)

人皮膚成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao);HSAS4dT亞(ya)1酰(xian)胺(an)單(dan)體(ti)dT Phosphoramidite質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：>98%

SUNE-1亞(ya)株(zhu)-5-8F細(xi)胞(bao)，鼻(bi)咽癌細胞系 小(xiao)鼠(shu)色(se)素瘤高轉移(yi)細(xi)胞,B16F10細(xi)胞(bao) CM-H039人小(xiao)腸粘膜(mo)上(shang)皮細胞*培養基(ji)100mL5--5-脫氧(yang)環(huan)1腺(xian)苷5'-Iodo-5'-deoxy Adesine  質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：美國(guo)進口(kou)

NRK(大(da)鼠(shu)腎(shen)細胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×22-疊氮(dan)腺苷2-Azido Adesine 質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：美國(guo)進口(kou)

Promocell C-26501 Follicle Dermal Papilla CellGrowth Medium, 細(xi)胞(bao)生長(chang)培養基(ji)(即(ji)用(yong)型) 500ml2',3'-亞(ya)異(yi)丙基腺苷2',3'-Isopropylidene Adesine 質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：美國(guo)進口(kou)
RAMP3 Others Human 人 RAMP3 人細(xi)胞裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性對(dui)照) （標(biao)準(zhun)品）質(zhi)量規(gui)格(ge)：含量測(ce)定Vinpocetine

神(shen)經元(yuan)細(xi)胞(bao)Many types of cells包(bao)裝：5 × 105方(fang)(1ml)枸櫞酸(suan)鉍（標(biao)準(zhun)品）質(zhi)量規(gui)格(ge)：供檢查用(yong)Ranitidine bismuth

TF-1細(xi)胞(bao)，人血(xue)液(ye)白血病細胞 615小(xiao)鼠(shu)狀(zhuang)肺腺癌瘤株(zhu),P615細(xi)胞(bao) 人少(shao)突(tu)膠質前(qian)體(ti)細胞裂解物(wu)HOPCL丹曲林鈉（標(biao)準(zhun)品）質(zhi)量規(gui)格(ge)：含量測(ce)定Dantrolene  hemiheptahydrate

NCI-H838(人非(fei)小(xiao)細胞(bao)肺癌細胞) 5×106cells/瓶(ping)×2呱西替(ti)柳（標(biao)準(zhun)品）質(zhi)量規(gui)格(ge)：含量測(ce)定Guacetisal

Caco-2(人結(jie)直腸(chang)腺(xian)癌細胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 CL-0030Bcap-37(人癌細胞)5×106cells/瓶(ping)×2 小(xiao)鼠(shu)胚胎(tai)成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao);C3H 10T1/2 2A6無活(huo)菌素質量(liang)規(gui)格(ge)：>98%,美國(guo)進口(kou)nactin
廣藿香PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑盒(he)說(shuo)明(ming)書LX-2, 人肝星形(xing)細胞(bao)株(zhu)氮酮5克(ke)

人臍(qi)靜(jing)脈(mai)平(ping)滑肌細(xi)胞2,2-雙(shuang)(溴(xiu)基(ji))-1,3-炳二(er)醇(chun) 2,2-Bis(bromomqthyl)propcnq-1,3-diol 396-90-0

人臍(qi)靜(jing)脈(mai)內(nei)皮細胞;HUV-EC-C 人甲(jia)狀(zhuang)腺濾泡上(shang)皮細胞*培養基(ji) 100mL棕櫚(lv)油酸(suan)

人胚(pei)肺成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao);IMR-90HalfFraser添加(jia)劑1米

COLEC12 Others Rat 大(da)鼠(shu) CLP1 / COLEC12 桿(gan)狀(zhuang)病毒-昆蟲細(xi)胞裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性對(dui)照) 3,4-二(er)扶本(ben)胺3,4-Difluoroaniline
實驗流(liu)程(cheng)：
1. 整個(ge)檢測(ce)過程應嚴(yan)格(ge)按照本說(shuo)明(ming)書要求分(fen)別(bie)在試劑準備(bei)區、樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)區和(he)PCR擴(kuo)增(zeng)區進行操作，各區實驗服、儀器 、耗(hao)材(cai)應(ying)獨立使(shi)用(yong)，不(bu)能(neng)混(hun)用(yong)；實驗用(yong)吸(xi)頭(tou)采(cai)用(yong)帶濾芯(xin)吸(xi)頭(tou)；樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)區應(ying)配(pei)有生物(wu)安(an)全(quan)櫃，樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)在生物(wu)安(an)全(quan)櫃中(zhong)進行操作；三(san)個(ge)區應(ying)該(gai)配(pei)有紫(zi)外線殺菌裝置。
2. 為(wei)避(bi)免RNA降(jiang)解(jie)，樣(yang)本處(chu)理(li)過程應在0-4℃條(tiao)件下(xia)操作，且完(wan)成實驗後立(li)即(ji)上(shang)機(ji)檢測(ce)；樣本(ben)處(chu)理(li)過程中使(shi)用(yong)的器具耗材應經(jing)過無核(he)酶處(chu)理(li)。

3. 每次實驗應該(gai)設(she)置陰、陽性對(dui)照。
4. 試(shi)劑(ji)盒(he)所(suo)有試(shi)劑在使(shi)用(yong)前應該(gai)在常(chang)溫(wen)下(xia)充分融(rong)化(hua)混勻(yun)，並(bing)應(ying)瞬(shun)時離心。
5. 試(shi)劑(ji)盒(he)內(nei)所(suo)配(pei)陰性和(he)陽性對(dui)照在壹次(ci)使(shi)用(yong)前應全(quan)部(bu)轉(zhuan)移(yi)至(zhi)標(biao)本(ben)準備(bei)區，並(bing)單(dan)獨存放。
6. 為(wei)防(fang)止熒(ying)光幹擾(rao)，應避(bi)免(mian)裸(luo)手(shou)直接(jie)接(jie)觸PCR反(fan)應(ying)管(guan)，並(bing)應(ying)避(bi)免(mian)在PCR反(fan)應(ying)管(guan)上(shang)進行任何(he)標(biao)記(ji)。
7. 儀(yi)器 擴(kuo)增(zeng)相(xiang)關(guan)參(can)數應按照本說(shuo)明(ming)書相關(guan)要求(qiu)進行設置；不(bu)同批號試(shi)劑不(bu)能(neng)混(hun)用(yong)。
8. ABI系列熒光定量PCR儀(yi)參(can)數設置(zhi)中不(bu)選(xuan)ROX校(xiao)正(zheng)，淬(cui)滅(mie)基因選(xuan)擇None。
9. 實驗過程中產(chan)品的(de)廢棄(qi)物(wu)應(ying)該(gai)進行無害(hai)化(hua)處(chu)理(li)後方(fang)可丟(diu)棄(qi)。