白(bai)前探(tan)針法PCR鑒定試劑盒*

儲(chu)存條件：
14℃或－20℃樣(yang)品(pin)收(shou)集(ji)、處(chu)理(li)及保(bao)存方法
1. 血(xue)清(qing)：使(shi)用不(bu)含(han)熱(re)原(yuan)和內毒素的試管，操作(zuo)過(guo)程(cheng)中避(bi)免任何細胞(bao)刺激(ji)，收(shou)集(ji)血(xue)液(ye)後(hou)，3000 轉離(li)心10 分(fen)鐘將血(xue)清(qing)和紅(hong)細胞(bao)迅(xun)速(su)小心(xin)地(di)分(fen)離(li)。
2. 血(xue)漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝(gan)素抗凝。3000 轉離(li)心30 分(fen)鐘取上清(qing)。
3. 細胞(bao)上清(qing)液(ye)：3000 轉離(li)心10 分(fen)鐘去除顆(ke)粒(li)和(he)聚(ju)合物(wu)。
4. 組織勻漿：將組織加(jia)入(ru)適(shi)量生(sheng)理(li)鹽水(shui)搗碎。3000 轉離(li)心10 分(fen)鐘取上清(qing)。
5. 保(bao)存：如果樣(yang)本(ben)收(shou)集(ji)後(hou)不(bu)及時(shi)檢(jian)測(ce)，請按壹次用量分(fen)裝，凍存於(yu)-20℃，避(bi)免(mian)反復凍融(rong)，在室(shi)溫下解(jie)凍並(bing)確(que)保(bao)樣(yang)品(pin)均勻地(di)充分(fen)解(jie)凍。

特(te)點(dian)：
1. 即(ji)開(kai)即用(yong)，用(yong)戶(hu)只需要提供(gong)病毒(du)樣(yang)品(pin)。
2. 根(gen)據地(di)黃(huang)保(bao)守序(xu)列設(she)計的專(zhuan)壹性引物，與(yu)相(xiang)關病毒(du)無交叉反應(ying)。
3. 靈(ling)敏度(du)可(ke)以達到(dao)幾(ji)百拷貝/反應(ying)。
4. 壹管式(shi)熒光(guang)定量 PCR 檢(jian)測(ce)，避免(mian)後(hou)續(xu)汙(wu)染(ran)。
5. 本(ben)試劑盒足(zu)夠(gou) 50 次(ci) 20μL 反應(ying)體(ti)系(xi)的熒(ying)光(guang)定量 PCR。
6. 本(ben)產(chan)品(pin)只適(shi)用於(yu)科研(yan)，不(bu)能用於(yu)臨(lin)床診斷(duan)。

使(shi)用方法：
壹、樣(yang)品(pin)采集(ji)：
1、食(shi)品(pin)樣(yang)品(pin)：樣(yang)品(pin)的采(cai)集與(yu)預(yu)培養(yang)按照樣(yang)品(pin)的采(cai)集與(yu)預(yu)培養(yang)按照《食品(pin)衛(wei)生(sheng)微(wei)生(sheng)物學檢(jian)驗(yan)阪崎腸桿菌(jun)檢驗(yan)要求進行。
2、血(xue)液(ye)樣(yang)品(pin)：用無菌(jun)註射(she)器抽(chou)取受檢者靜脈血(xue)2mL，註(zhu)入(ru)無菌(jun)EDTA2Na(或檸檬酸鈉(na))抗(kang)凝(ning)管，立(li)即混(hun)勻。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品(pin)：取糞(fen)便(bian)置於(yu)滅(mie)菌(jun)的收(shou)集(ji)管中送(song)檢。
4、病(bing)竈(zao)部位樣(yang)品(pin)：取發病(bing)部位新(xin)鮮(xian)滲出物(wu)、粘液(ye)膿(nong)血(xue)送(song)檢(jian)。
壹、稀釋(shi) PCR 陽(yang)性(xing)對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍(bei)稀釋(shi)度(du)為例）
1. 註(zhu)意(yi)：由於(yu)標(biao)準(zhun)品(pin)濃(nong)度(du)非常高，因此下列稀釋(shi)操(cao)作(zuo)壹定要在獨(du)立(li)的區(qu)域(yu)進(jin)行(xing)，千萬(wan)不(bu)能汙(wu)染(ran)樣(yang)品(pin)或本(ben)試劑盒的其(qi)他成(cheng)分(fen)）。為增(zeng)加(jia)產(chan)品(pin)穩定(ding)性(xing)和(he)避免擴散傳(chuan)染(ran)性病(bing)原(yuan)，本(ben)產(chan)品(pin)不(bu)提供(gong)活體(ti)樣(yang)品(pin)做陽(yang)性(xing)對(dui)照，只提供(gong)可以直接(jie)使(shi)用的 DNA段作(zuo)為陽(yang)性(xing)對照。
2. 標(biao)記(ji) 6 個(ge)離(li)心管，分(fen)別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶(dai)芯槍(qiang)頭(tou)分(fen)別加入(ru) 45 μL 熒(ying)光(guang) PCR 模板(ban)稀釋(shi)液(ye)（用(yong)帶(dai)芯槍(qiang)頭(tou)，下同）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照，充分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上待(dai)用(yong)。
5. 換(huan)槍(qiang)頭(tou)，在 6 號(hao)管中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照(上步稀釋(shi)所(suo)得)，充分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上待(dai)用(yong)。
6. 換(huan)槍(qiang)頭(tou)，在 5 號(hao)管中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照到(dao) 5 號(hao)管中，充分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上待(dai)用(yong)。
7. 重復上面的操(cao)作(zuo)直(zhi)到(dao)得(de)到(dao) 6 個(ge)稀釋(shi)度(du)的陽(yang)性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上待(dai)用(yong)。
註(zhu)：上述(shu)樣(yang)品(pin)建(jian)議(yi)經(jing)過(guo)增(zeng)菌(jun)後(hou)，收(shou)集(ji)培養(yang)物(wu)用於(yu)檢(jian)測(ce)。 
二(er)、DNA提取：
可(ke)采(cai)用PCR試劑盒配備的DNA抽(chou)提液(ye)，按以下說明進行DNA核酸的粗(cu)提。也可(ke)采(cai)購上海澤葉生(sheng)物科技(ji)有限公司(si)生(sheng)產(chan)的DNA提取試劑盒(過(guo)柱(zhu)法-熒(ying)光(guang)配套)或其他合適(shi)的商(shang)業化產(chan)品(pin)，並按照相(xiang)應試劑盒說(shuo)明進行操作(zuo)。
1、液(ye)體(ti)培養(yang)物(wu)：取液(ye)體(ti)培養(yang)物(wu)100μL加(jia)到(dao)1.5mL無菌(jun)離(li)心管中，8000rpm離(li)心3min，盡(jin)量(liang)吸(xi)棄(qi)上清(qing)，加入(ru)50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分(fen)混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min，取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
2、固(gu)體(ti)培養(yang)物(wu)：挑(tiao)取(qu)單克隆菌(jun)落與(yu)50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分(fen)混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min，取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品(pin)：挑(tiao)取(qu)米粒(li)大小糞(fen)便(bian)於(yu)滅(mie)菌(jun)離(li)心管中，加(jia)入(ru)0.5mL生(sheng)理(li)鹽水(shui)，振蕩(dang)混(hun)勻，13000rpm離(li)心3分(fen)鐘，棄(qi)上清(qing)，沈澱(dian)中加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分(fen)混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
4、其(qi)他(ta)液(ye)體(ti)標(biao)本(ben)：取(qu)標本(ben)2-3mL，13000rpm離(li)心3min，棄(qi)上清(qing)，沈澱(dian)中加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分(fen)混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
註(zhu)：陽(yang)性對照和陰(yin)性(xing)對照為已(yi)經(jing)抽提好的核酸(無需提取)，直(zhi)接(jie)取5μL加(jia)入(ru)到(dao)反應(ying)體(ti)系(xi)中即(ji)可。由於(yu)陽(yang)性(xing)對照濃(nong)度(du)較(jiao)高，建(jian)議(yi)在(zai)樣(yang)品(pin)制(zhi)備區(qu)域(yu)加(jia)入(ru)陽(yang)性(xing)對(dui)照。 
CNE-1 高分(fen)化鼻(bi)咽癌細胞(bao)人參(can)皂(zao)苷(gan)Rb1(標(biao)準(zhun)品(pin))Ginsenoside Rb1質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%,標(biao)準(zhun)品(pin)

P9-EGFP-puro小鼠(shu)骨髓基質(zhi)細胞(bao) P9-EGFP-puro mouse bone marrow somal cells 1640+10%FBS+1%P/S人參(can)皂(zao)苷(gan)Rb2（標(biao)準(zhun)品(pin)）Ginsenoside Rb2質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

CD40LG Protein Canine 重組狗 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋(dan)白(bai) (Fc 標(biao)簽(qian))人參(can)皂(zao)苷(gan)Rb3(標(biao)準(zhun)品(pin))Ginsenoside Rb3質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

人心(xin)肌(ji)細胞(bao) (HCMa) (1×106 ) RGC-5, 小鼠(shu)視網膜神(shen)經(jing)節細胞(bao) Mouse人參(can)皂(zao)苷(gan)Rc(標(biao)準(zhun)品(pin))Ginsenoside Rc質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

小鼠(shu)T細胞(bao)瘤(liu)細胞(bao);Cyc-Tag(S49)人參(can)皂(zao)苷(gan)Rd(標(biao)準(zhun)品(pin))Ginsenoside Rd質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)
人胚(pei)肺(fei)二倍體細胞(bao);HEL-2萊(lai)苞迪(di)甙(dai)C（標(biao)準(zhun)品(pin)）Rebaudioside C質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

大鼠(shu)骨髓瘤(liu)細胞(bao);IR983F 結腸腺癌細胞(bao)，Caco-2細胞(bao) WEHI 164細胞(bao)，鼠(shu)纖(xian)維肉(rou)瘤(liu)細胞(bao)系(xi)D-(-)-扁桃(tao)酸;R-扁桃(tao)酸(R)-(−)-Mandelic acid質(zhi)量規(gui)格(ge)：>99%,BR

GBC-SD, 人膽(dan)囊癌細胞(bao) Human1-氨基海(hai)因鹽酸鹽;AHD，1-氨基乙(yi)內酰(xian)脲鹽酸鹽1-Aminohydantoin 質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%,BR

CD99L2 Others Mouse 小鼠(shu) CD99L2 / MIC2L1 人細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照) 1-氨基海(hai)因鹽酸鹽（標(biao)準(zhun)品(pin)）1-Aminohydantoin 質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC>98%,標(biao)準(zhun)品(pin)

尿(niao)道(dao)上皮(pi)細胞(bao)Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)人促(cu)腎(shen)上腺皮(pi)質(zhi)激(ji)素(1-24),替(ti)可(ke)克肽ACTH (1-24), human質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%,BR
TNFRSF21 Others Mouse 小鼠(shu) DR6 / TNFRSF21 人細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照) 毒(du)死蜱(標(biao)準(zhun)品(pin))質(zhi)量規(gui)格(ge)：分(fen)析標準(zhun)品(pin),99%Chlorpyrifos

CM-H093人顱蓋(gai)造(zao)骨細胞(bao)*培養(yang)基100mL滅(mie)蠅(ying)胺標準溶液(ye)(10μg/ml,u=2%)質(zhi)量規(gui)格(ge)：10μg/ml,u=2%Cyromazin solution

LILRB1 Others Human 人 LILRB1 / CD85 / ILT2 / ILR1 人細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照) 多(duo)菌(jun)靈(ling)(分(fen)析標準(zhun)品(pin),99%)質(zhi)量規(gui)格(ge)：分(fen)析標準(zhun)品(pin),99%Carbendazim

人直(zhi)腸平(ping)滑肌(ji)細胞(bao)HRSMC(分(fen)析標準(zhun)品(pin),98%)質(zhi)量規(gui)格(ge)：分(fen)析標準(zhun)品(pin),98%Carbaryl

Ca Ski細胞(bao)，人小腸頸部表(biao)皮(pi)樣(yang)癌細胞(bao) 人癌細胞(bao),ZR75-1細胞(bao) 狗間充質(zhi)幹細胞(bao)-脂(zhi)肪DMSC-ad鹽酸水(shui)蘇(su)堿(標(biao)準(zhun)品(pin))質(zhi)量規(gui)格(ge)：分(fen)析標準(zhun)品(pin)Stachydrine
白(bai)前探(tan)針法PCR鑒(jian)定(ding)試劑盒*山(shan)羊腎(shen)上皮(pi)樣(yang)細胞(bao);DG-K1N,N-二(er)去甲基鹽酸曲美(mei)布汀-d5質(zhi)量規(gui)格(ge)：美(mei)國(guo)進(jin)口(kou)N,N-Didesmethyl Trimebutine-d5

CDC37 Others Mouse 小鼠(shu) CDC37 / CDC37A 桿狀病毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照) N,N-二(er)去甲基鹽酸曲美(mei)布汀質(zhi)量規(gui)格(ge)：美(mei)國(guo)進(jin)口(kou)N,N-Didesmethyl Trimebutine

腮(sai)腺(xian)細胞(bao)Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)N-去甲基鹽酸曲美(mei)布汀質(zhi)量規(gui)格(ge)：美(mei)國(guo)進(jin)口(kou)N-Demethyl Trim
實(shi)驗(yan)流程(cheng)：
1. 整(zheng)個(ge)檢(jian)測(ce)過(guo)程(cheng)應(ying)嚴(yan)格(ge)按照本(ben)說(shuo)明書要求分(fen)別在試劑準備區(qu)、樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)區(qu)和PCR擴增(zeng)區進行操作(zuo)，各區實(shi)驗(yan)服(fu)、儀器 、耗材應獨(du)立(li)使(shi)用，不(bu)能混(hun)用(yong)；實(shi)驗(yan)用吸(xi)頭(tou)采用帶(dai)濾芯吸(xi)頭(tou)；樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)區(qu)應配有生(sheng)物安(an)全櫃(gui)，樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)在(zai)生(sheng)物安(an)全櫃(gui)中進(jin)行操作(zuo)；三個(ge)區(qu)應該配有紫外線(xian)殺(sha)菌(jun)裝置(zhi)。
2. 為避(bi)免(mian)RNA降(jiang)解(jie)，樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)過(guo)程(cheng)應(ying)在(zai)0-4℃條(tiao)件(jian)下操作(zuo)，且(qie)完(wan)成實(shi)驗(yan)後(hou)立(li)即上機(ji)檢(jian)測(ce)；樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)過(guo)程(cheng)中使(shi)用的器具(ju)耗材應經過(guo)無核酶處(chu)理(li)。

3. 每(mei)次實驗(yan)應該設(she)置陰(yin)、陽(yang)性對照。
4. 試劑盒所(suo)有試劑在使(shi)用前應該在常溫下充分(fen)融(rong)化混(hun)勻，並(bing)應(ying)瞬時(shi)離(li)心。
5. 試劑盒內所(suo)配陰(yin)性(xing)和陽性(xing)對照在壹次使(shi)用前應全部轉移(yi)至(zhi)標本(ben)準(zhun)備區(qu)，並單獨(du)存放(fang)。
6. 為防止熒(ying)光(guang)幹擾，應避免裸(luo)手(shou)直接(jie)接(jie)觸(chu)PCR反應(ying)管，並應避(bi)免(mian)在(zai)PCR反應(ying)管上進行任何標(biao)記。
7. 儀器 擴增(zeng)相(xiang)關參(can)數(shu)應(ying)按照本(ben)說(shuo)明書相(xiang)關要求進行設(she)置；不(bu)同批(pi)號(hao)試劑不(bu)能混(hun)用(yong)。
8. ABI系(xi)列熒(ying)光(guang)定量PCR儀參(can)數(shu)設(she)置中不(bu)選ROX校正(zheng)，淬滅(mie)基因(yin)選擇(ze)None。
9. 實(shi)驗(yan)過(guo)程(cheng)中產(chan)品(pin)的廢棄(qi)物應(ying)該進行(xing)無害化處理(li)後(hou)方可丟棄(qi)。