馬(ma)齒(chi)莧染(ran)料(liao)法(fa)PCR鑒(jian)定試劑(ji)盒(he)保存

儲(chu)存(cun)條(tiao)件(jian)：
14℃或(huo)－20℃樣品(pin)收集(ji)、處(chu)理(li)及(ji)保存(cun)方法(fa)
1. 血清：使用不(bu)含(han)熱(re)原和(he)內毒(du)素(su)的(de)試管(guan)，操作(zuo)過(guo)程(cheng)中(zhong)避免任何細(xi)胞刺(ci)激(ji)，收集(ji)血液(ye)後，3000 轉離心10 分鐘將(jiang)血清和(he)紅細(xi)胞迅速(su)小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬(meng)酸(suan)鹽(yan)或(huo)肝(gan)素(su)抗(kang)凝(ning)。3000 轉離心30 分鐘取上(shang)清(qing)。
3. 細(xi)胞上(shang)清(qing)液(ye)：3000 轉離心10 分鐘去除(chu)顆(ke)粒(li)和(he)聚(ju)合(he)物。
4. 組(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)：將(jiang)組(zu)織(zhi)加(jia)入(ru)適量生(sheng)理鹽(yan)水搗(dao)碎(sui)。3000 轉離心10 分鐘取上(shang)清(qing)。
5. 保存(cun)：如果(guo)樣本收集(ji)後(hou)不(bu)及(ji)時(shi)檢測(ce)，請(qing)按(an)壹(yi)次(ci)用量分裝，凍(dong)存(cun)於(yu)-20℃，避免反(fan)復凍(dong)融(rong)，在(zai)室(shi)溫下解(jie)凍(dong)並(bing)確保樣品(pin)均勻(yun)地充分(fen)解(jie)凍(dong)。

特(te)點(dian)：
1. 即開(kai)即用，用戶(hu)只(zhi)需要提供(gong)病毒樣品(pin)。
2. 根據地黃保(bao)守序(xu)列設(she)計(ji)的(de)專壹(yi)性引(yin)物，與相(xiang)關(guan)病毒無(wu)交(jiao)叉(cha)反(fan)應(ying)。
3. 靈(ling)敏度可(ke)以達到(dao)幾百拷(kao)貝/反(fan)應(ying)。
4. 壹管(guan)式(shi)熒(ying)光定量 PCR 檢測(ce)，避免後續汙(wu)染(ran)。
5. 本試(shi)劑(ji)盒(he)足夠(gou) 50 次(ci) 20μL 反(fan)應(ying)體(ti)系的熒(ying)光定量 PCR。
6. 本產(chan)品(pin)只(zhi)適用於科研，不(bu)能(neng)用於臨床診斷(duan)。

使用方法(fa)：
壹、樣品(pin)采集：
1、食品(pin)樣品(pin)：樣品(pin)的采集(ji)與預(yu)培養按(an)照(zhao)樣品(pin)的采集(ji)與預(yu)培養按(an)照(zhao)《食品(pin)衛生(sheng)微生(sheng)物學檢驗阪崎(qi)腸桿(gan)菌檢驗要(yao)求(qiu)進行(xing)。
2、血液(ye)樣品(pin)：用無菌註射器抽(chou)取(qu)受(shou)檢者靜脈(mai)血2mL，註入(ru)無菌EDTA2Na(或(huo)檸(ning)檬(meng)酸(suan)鈉(na))抗(kang)凝(ning)管(guan)，立(li)即(ji)混(hun)勻(yun)。
3、糞(fen)便(bian)樣品(pin)：取糞(fen)便(bian)置(zhi)於(yu)滅(mie)菌的收集(ji)管(guan)中(zhong)送(song)檢。
4、病竈部位(wei)樣品(pin)：取發病部位(wei)新鮮(xian)滲出(chu)物、粘(zhan)液(ye)膿血送(song)檢。
壹、稀(xi)釋(shi) PCR 陽性對照（以(yi) 10E2-10E7 拷貝(bei)/μL 這 6 個 10 倍稀(xi)釋(shi)度為(wei)例）
1. 註意(yi)：由(you)於標(biao)準品(pin)濃度非(fei)常高(gao)，因此(ci)下列稀(xi)釋(shi)操作(zuo)壹(yi)定要在(zai)獨(du)立的(de)區(qu)域(yu)進行(xing)，千萬(wan)不(bu)能(neng)汙(wu)染(ran)樣品(pin)或(huo)本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)的其他(ta)成分）。為增加產(chan)品(pin)穩定性和(he)避免擴散(san)傳(chuan)染(ran)性病原，本(ben)產(chan)品(pin)不(bu)提供(gong)活體(ti)樣品(pin)做陽性對照，只(zhi)提供(gong)可(ke)以直接使用的 DNA段作(zuo)為(wei)陽性對照。
2. 標(biao)記(ji) 6 個離心管(guan)，分(fen)別(bie)為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯(xin)槍(qiang)頭分(fen)別(bie)加(jia)入(ru) 45 μL 熒(ying)光 PCR 模(mo)板(ban)稀(xi)釋(shi)液(ye)（用帶芯(xin)槍(qiang)頭，下(xia)同(tong)）。
4. 在(zai) 7 號管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E8 拷貝(bei)/μL 的陽性對照，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝(bei)/μL 的陽性對照。放(fang)冰(bing)上(shang)待(dai)用。
5. 換槍頭，在(zai) 6 號管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E7 拷貝(bei)/μL 的陽性對照(上(shang)步稀(xi)釋(shi)所(suo)得)，充分(fen)震(zhen)蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的陽性對照。放(fang)冰(bing)上(shang)待(dai)用。
6. 換槍頭，在(zai) 5 號管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的陽性對照到(dao) 5 號管(guan)中(zhong)，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝(bei)/μL 的陽性對照。放(fang)冰(bing)上(shang)待(dai)用。
7. 重復上(shang)面(mian)的操作(zuo)直到(dao)得(de)到(dao) 6 個稀(xi)釋(shi)度的(de)陽性對照。放(fang)冰(bing)上(shang)待(dai)用。
註：上(shang)述(shu)樣品(pin)建(jian)議(yi)經過(guo)增菌後，收集(ji)培(pei)養物用於檢測(ce)。 
二(er)、DNA提取(qu)：
可(ke)采用PCR試劑(ji)盒(he)配(pei)備(bei)的DNA抽(chou)提液(ye)，按以(yi)下(xia)說明(ming)進行(xing)DNA核酸(suan)的粗(cu)提。也(ye)可(ke)采購(gou)上(shang)海(hai)澤葉生(sheng)物科技(ji)有限公(gong)司(si)生(sheng)產(chan)的DNA提取(qu)試劑(ji)盒(he)(過(guo)柱法-熒(ying)光配(pei)套)或(huo)其(qi)他(ta)合(he)適(shi)的商業(ye)化產(chan)品(pin)，並按照(zhao)相應(ying)試(shi)劑(ji)盒(he)說明(ming)進行(xing)操作(zuo)。
1、液(ye)體(ti)培養物：取液(ye)體(ti)培養物100μL加到(dao)1.5mL無菌離心管(guan)中(zhong)，8000rpm離心3min，盡量(liang)吸棄上(shang)清(qing)，加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上(shang)清(qing)5μL進行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
2、固(gu)體(ti)培養物：挑取(qu)單(dan)克隆(long)菌落與(yu)50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上(shang)清(qing)5μL進行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
3、糞(fen)便(bian)樣品(pin)：挑取(qu)米粒(li)大小糞(fen)便(bian)於(yu)滅(mie)菌離心管(guan)中(zhong)，加(jia)入(ru)0.5mL生(sheng)理鹽(yan)水，振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，13000rpm離心3分鐘，棄上(shang)清(qing)，沈澱中(zhong)加入(ru)50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上(shang)清(qing)5μL進行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
4、其他(ta)液(ye)體(ti)標(biao)本(ben)：取(qu)標(biao)本(ben)2-3mL，13000rpm離心3min，棄上(shang)清(qing)，沈澱中(zhong)加入(ru)50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上(shang)清(qing)5μL進行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
註：陽性對照和(he)陰性對照為(wei)已經抽(chou)提好(hao)的(de)核酸(無需(xu)提取(qu))，直接取5μL加入(ru)到(dao)反(fan)應(ying)體(ti)系中即(ji)可(ke)。由於(yu)陽性對照濃度較高(gao)，建(jian)議(yi)在(zai)樣品(pin)制備(bei)區(qu)域(yu)加(jia)入(ru)陽性對照。 
髓(sui)核細(xi)胞培(pei)養基(ji)NPCM酸性藍(lan)40(>50%,BS)Acid blue 40質(zhi)量(liang)規格：>50%,BS

CST1 Others Human 人 CST1 / Cystatin-1 / Cystatin-SN 人細(xi)胞裂解液(ye) (陽性對照) 酸性品(pin)紅6B(>50%,BS)Acid Red 6B質(zhi)量(liang)規格：>50%,BS

GPH4 豚鼠(shu)心肌來源細(xi)胞B1(>98%,BR)Aflatoxin B1 from Aspergillus flavus質(zhi)量(liang)規格：>98%,BR

CM-M014小鼠氣管(guan)和(he)支氣管(guan)上(shang)皮(pi)細(xi)胞*培(pei)養基(ji)100mLB2(>98%,BR)Aflatoxin B2質(zhi)量(liang)規格：>98%,BR

3T3-L1, 小鼠前脂肪(fang)細(xi)胞G1(>98%,BR)Aflatoxin G1質(zhi)量(liang)規格：>98%,BR
膠原I-3D凝膠(jiao)試劑(ji)盒(he)C3DGK胞嘧(mi)啶核(he)苷(gan),胞苷(gan)(標(biao)準品(pin))Cytidine質(zhi)量(liang)規格：HPLC>98%,標(biao)準品(pin)

F11R Others Rat 大鼠(shu) JAM-A / F11R 人細(xi)胞裂解液(ye) (陽性對照) dATP,三1酸脫(tuo)氧腺苷(gan)鈉(na)鹽(yan)2'-Deoxyadesine 5'-triphosphate di salt質(zhi)量(liang)規格：>98%,BR

人視網(wang)膜微(wei)血管(guan)內(nei)皮(pi)細(xi)胞*培(pei)養基(ji) 100mL5,6-二(er)甲(jia)基(ji)-1-茚酮(tong)5,6-Dimethoxy-1-indane質(zhi)量(liang)規格：>99%

FAT細(xi)胞，大(da)鼠(shu)鼻(bi)咽(yan)癌(ai)細(xi)胞 SHZ-88(大鼠(shu)癌細(xi)胞) 大額(e)牛(niu)肺細(xi)胞;BFR-L1芍(shao)藥(yao)苷(gan)（標(biao)準品(pin)）Paeoniflorin質(zhi)量(liang)規格：>98%,分析(xi)標(biao)準品(pin)

EFNA1 Protein Human 重組(zu)人 Ephrin-A1 / EFNA1 蛋白 (His 標(biao)簽(qian))芍(shao)藥(yao)苷(gan)(40%)Paeoniflorin質(zhi)量(liang)規格：≥40%
QGY-7701, 人肝(gan)癌細(xi)胞 Human*Bisoprolol質(zhi)量(liang)規格：美(mei)國(guo)進口

IFNAR2 Others Human 人 IFNAR2 / IFNABR 人細(xi)胞裂解液(ye) (陽性對照) 去異(yi)丙氧(yang)基(ji)*Des(isopropoxyethyl) Bisoprolol質(zhi)量(liang)規格：美(mei)國(guo)進口

人骨(gu)髓(sui)間充質(zhi)幹細(xi)胞HMSC-bm4-(2-Hydroxy-3-isopropylamipropoxy)benzoic Acid (Bisoprolol Metabolite)4-(2-Hydroxy-3-isopropylamipropoxy)benzoic Acid (Bisoprolol Metabolite)質(zhi)量(liang)規格：美(mei)國(guo)進口

IL12B Others Marmoset 狨猴 IL12B / IL-12B 人細(xi)胞裂解液(ye) (陽性對照) N-去丁(ding)基(ji)*N-Desbutyl Bupivacaine質(zhi)量(liang)規格：美(mei)國(guo)進口

非(fei)洲綠猴腎(shen)細(xi)胞系/IgRCD4-;VERO/IgRCD4-布替萘芬Butenafine質(zhi)量(liang)規格：美(mei)國(guo)進口
馬齒(chi)莧染(ran)料(liao)法(fa)PCR鑒(jian)定試劑(ji)盒(he)保存成纖(xian)維細(xi)胞Many types of cells包(bao)裝：5 × 105方(1ml)吲哚(duo)-3-乙酸(suan)，英文(wen)名(ming)或(huo)英(ying)文(wen)縮(suo)寫：IUPAC，級別(bie)：USP級，95%，規格：1克

FCGR3 Others Cymolgus 食蟹猴 CD16 / FCGR3 人細(xi)胞裂解液(ye) (陽性對照) 1-(2-羌(qiang)基(ji))咪坐 1-(2-xy7xyqthyl)imidczolq 1612-14-1

LX-2 人肝(gan)星形(xing)細(xi)胞三(san)拂(fu)磺(huang)醋 McGNqSIUM TRIFLUOROMqTHcNqSULFONcTq 60871-83-

中國(guo)倉鼠(shu)卵巢(chao)細(xi)胞(亞系克
實(shi)驗流程(cheng)：
1. 整個(ge)檢測(ce)過(guo)程(cheng)應(ying)嚴格按照(zhao)本(ben)說明(ming)書(shu)要求(qiu)分(fen)別(bie)在(zai)試(shi)劑(ji)準備(bei)區(qu)、樣本處(chu)理(li)區(qu)和(he)PCR擴增區(qu)進行(xing)操作(zuo)，各(ge)區(qu)實(shi)驗服、儀器 、耗材應(ying)獨(du)立使用，不(bu)能(neng)混(hun)用；實(shi)驗用吸頭采(cai)用帶濾芯吸頭；樣本處(chu)理(li)區(qu)應(ying)配(pei)有生(sheng)物安全(quan)櫃，樣本處(chu)理(li)在(zai)生(sheng)物安全(quan)櫃中(zhong)進行(xing)操作(zuo)；三(san)個(ge)區(qu)應(ying)該(gai)配(pei)有紫外線殺菌裝置(zhi)。
2. 為避免RNA降解(jie)，樣本處(chu)理(li)過(guo)程(cheng)應(ying)在(zai)0-4℃條(tiao)件(jian)下(xia)操作(zuo)，且(qie)完(wan)成(cheng)實(shi)驗後(hou)立即上(shang)機(ji)檢測(ce)；樣本處(chu)理(li)過(guo)程(cheng)中(zhong)使用的器具耗(hao)材應(ying)經(jing)過(guo)無核(he)酶(mei)處(chu)理(li)。

3. 每次(ci)實(shi)驗應(ying)該(gai)設置(zhi)陰、陽性對照。
4. 試劑(ji)盒(he)所(suo)有試劑(ji)在(zai)使用前應(ying)該(gai)在(zai)常溫下充(chong)分融(rong)化混(hun)勻(yun)，並(bing)應(ying)瞬(shun)時(shi)離心。
5. 試劑(ji)盒(he)內所(suo)配(pei)陰性和(he)陽性對照在(zai)壹(yi)次(ci)使用前應(ying)全(quan)部轉(zhuan)移至標(biao)本(ben)準備(bei)區(qu)，並(bing)單(dan)獨(du)存放(fang)。
6. 為防(fang)止熒(ying)光幹擾，應(ying)避免裸手直接接觸(chu)PCR反(fan)應(ying)管(guan)，並(bing)應(ying)避免在(zai)PCR反(fan)應(ying)管(guan)上(shang)進行(xing)任何標(biao)記(ji)。
7. 儀器 擴增相關(guan)參(can)數應(ying)按(an)照(zhao)本說明(ming)書(shu)相關(guan)要(yao)求(qiu)進行(xing)設置(zhi)；不(bu)同(tong)批(pi)號試(shi)劑(ji)不(bu)能(neng)混(hun)用。
8. ABI系列熒(ying)光定量PCR儀參(can)數設(she)置(zhi)中(zhong)不(bu)選(xuan)ROX校(xiao)正，淬滅(mie)基(ji)因選(xuan)擇(ze)None。
9. 實(shi)驗過(guo)程(cheng)中(zhong)產(chan)品(pin)的廢棄物應(ying)該(gai)進行(xing)無害(hai)化處(chu)理(li)後方可(ke)丟(diu)棄。