骨(gu)碎(sui)補(bu)探針(zhen)法PCR鑒定試劑盒(he)*

儲(chu)存條(tiao)件：
14℃或－20℃樣(yang)品收集(ji)、處(chu)理(li)及保(bao)存方(fang)法(fa)
1. 血(xue)清(qing)：使(shi)用不含熱原和內(nei)毒(du)素(su)的(de)試管，操作過程(cheng)中避(bi)免任(ren)何細(xi)胞(bao)刺(ci)激，收集(ji)血(xue)液(ye)後(hou)，3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)將(jiang)血(xue)清(qing)和(he)紅細胞(bao)迅(xun)速小心(xin)地(di)分(fen)離(li)。
2. 血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸檬酸鹽或(huo)肝素(su)抗凝(ning)。3000 轉(zhuan)離心(xin)30 分(fen)鐘(zhong)取(qu)上(shang)清。
3. 細胞(bao)上(shang)清液(ye)：3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆粒(li)和(he)聚(ju)合物。
4. 組織(zhi)勻漿：將(jiang)組織(zhi)加入適量(liang)生理(li)鹽(yan)水(shui)搗碎(sui)。3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)取(qu)上(shang)清。
5. 保(bao)存：如果樣(yang)本收集(ji)後不及時(shi)檢(jian)測(ce)，請(qing)按壹次用量分(fen)裝，凍(dong)存於-20℃，避(bi)免反復(fu)凍(dong)融(rong)，在(zai)室溫下解凍(dong)並(bing)確保(bao)樣(yang)品均勻(yun)地(di)充分(fen)解(jie)凍(dong)。

特點：
1. 即開(kai)即(ji)用，用戶只需(xu)要提供(gong)病(bing)毒(du)樣(yang)品。
2. 根據(ju)地(di)黃保(bao)守序(xu)列設計(ji)的專(zhuan)壹性引(yin)物(wu)，與相(xiang)關(guan)病(bing)毒(du)無交叉反應(ying)。
3. 靈敏(min)度(du)可(ke)以(yi)達(da)到幾(ji)百拷(kao)貝/反應(ying)。
4. 壹管式(shi)熒光定量 PCR 檢測(ce)，避(bi)免後續(xu)汙(wu)染。
5. 本試(shi)劑盒(he)足(zu)夠(gou) 50 次 20μL 反應(ying)體系的(de)熒光定量 PCR。
6. 本產品(pin)只適用於科研，不能(neng)用於臨床(chuang)診(zhen)斷。

使用方(fang)法(fa)：
壹、樣(yang)品采(cai)集(ji)：
1、食品(pin)樣(yang)品：樣(yang)品的(de)采(cai)集(ji)與預(yu)培養(yang)按照樣(yang)品的(de)采(cai)集(ji)與預(yu)培養(yang)按照《食品衛(wei)生微生(sheng)物(wu)學檢(jian)驗(yan)阪(ban)崎(qi)腸(chang)桿(gan)菌檢(jian)驗(yan)要求進(jin)行(xing)。
2、血(xue)液(ye)樣(yang)品：用無菌註射(she)器抽取(qu)受檢者靜脈血(xue)2mL，註入(ru)無菌EDTA2Na(或檸(ning)檬酸鈉(na))抗凝(ning)管，立(li)即(ji)混(hun)勻。
3、糞便(bian)樣(yang)品：取(qu)糞便(bian)置於滅(mie)菌的(de)收集(ji)管中送(song)檢(jian)。
4、病竈(zao)部位樣(yang)品：取(qu)發病部位新(xin)鮮滲出(chu)物、粘液膿(nong)血(xue)送(song)檢(jian)。
壹、稀(xi)釋(shi) PCR 陽性對(dui)照(zhao)（以 10E2-10E7 拷(kao)貝/μL 這 6 個 10 倍稀(xi)釋(shi)度(du)為(wei)例）
1. 註意(yi)：由於標準品濃度(du)非(fei)常(chang)高，因(yin)此(ci)下列(lie)稀釋操作壹定(ding)要在(zai)獨立的區域(yu)進(jin)行(xing)，千萬不能(neng)汙染樣(yang)品或(huo)本試劑盒(he)的(de)其(qi)他(ta)成(cheng)分(fen)）。為(wei)增加(jia)產品(pin)穩(wen)定性和(he)避(bi)免擴散傳染性病(bing)原，本產品(pin)不提(ti)供(gong)活體樣(yang)品做(zuo)陽性對(dui)照(zhao)，只提(ti)供(gong)可(ke)以(yi)直(zhi)接(jie)使(shi)用的 DNA段作(zuo)為(wei)陽性對(dui)照(zhao)。
2. 標記 6 個離(li)心(xin)管，分(fen)別(bie)為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯(xin)槍(qiang)頭(tou)分(fen)別(bie)加(jia)入 45 μL 熒光 PCR 模(mo)板稀(xi)釋(shi)液(ye)（用帶芯(xin)槍(qiang)頭(tou)，下(xia)同(tong)）。
4. 在(zai) 7 號管中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)，充分(fen)震蕩 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de)1×10E7 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待(dai)用。
5. 換槍頭(tou)，在(zai) 6 號管中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)(上(shang)步(bu)稀(xi)釋所(suo)得)，充分(fen)震蕩 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待(dai)用。
6. 換槍頭(tou)，在(zai) 5 號管中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)到 5 號管中，充分(fen)震蕩 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E5 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待(dai)用。
7. 重復(fu)上(shang)面(mian)的操作直到(dao)得到(dao) 6 個稀(xi)釋(shi)度(du)的(de)陽(yang)性對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待(dai)用。
註：上(shang)述(shu)樣(yang)品建(jian)議(yi)經過(guo)增菌(jun)後(hou)，收集(ji)培養(yang)物(wu)用於檢測。 
二、DNA提取(qu)：
可采(cai)用PCR試劑盒(he)配備的(de)DNA抽提(ti)液(ye)，按以下說(shuo)明進(jin)行(xing)DNA核(he)酸的粗(cu)提(ti)。也(ye)可(ke)采(cai)購上(shang)海澤(ze)葉生(sheng)物(wu)科(ke)技有限(xian)公(gong)司生產的(de)DNA提取(qu)試(shi)劑盒(he)(過柱(zhu)法(fa)-熒光配套(tao))或其(qi)他(ta)合適的(de)商(shang)業化(hua)產品(pin)，並(bing)按照相應試(shi)劑盒(he)說(shuo)明進(jin)行(xing)操作。
1、液體培養(yang)物(wu)：取(qu)液(ye)體培養(yang)物(wu)100μL加到(dao)1.5mL無菌離心(xin)管中，8000rpm離心(xin)3min，盡(jin)量吸(xi)棄上(shang)清，加(jia)入50μL DNA抽提(ti)液(ye)充分(fen)混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min，取上(shang)清5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
2、固體培養(yang)物(wu)：挑(tiao)取單(dan)克隆(long)菌(jun)落與50μL DNA抽提(ti)液(ye)充分(fen)混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min，取上(shang)清5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
3、糞便(bian)樣(yang)品：挑(tiao)取米粒大小糞便(bian)於滅(mie)菌離(li)心(xin)管中，加(jia)入(ru)0.5mL生理(li)鹽(yan)水(shui)，振蕩混(hun)勻，13000rpm離心(xin)3分(fen)鐘(zhong)，棄上(shang)清，沈(chen)澱(dian)中加(jia)入(ru)50μL DNA抽提(ti)液(ye)充分(fen)混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min取上(shang)清5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
4、其(qi)他(ta)液體標本(ben)：取(qu)標本2-3mL，13000rpm離心(xin)3min，棄上(shang)清，沈(chen)澱(dian)中加(jia)入(ru)50μL DNA抽提(ti)液(ye)充分(fen)混(hun)勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min取上(shang)清5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
註：陽(yang)性對(dui)照(zhao)和陰(yin)性對(dui)照(zhao)為已(yi)經抽(chou)提(ti)好的核(he)酸(無需(xu)提取(qu))，直接(jie)取(qu)5μL加入(ru)到(dao)反應(ying)體系中即(ji)可(ke)。由於陽性對(dui)照(zhao)濃度(du)較高(gao)，建(jian)議(yi)在(zai)樣(yang)品制備(bei)區(qu)域加入(ru)陽性對(dui)照(zhao)。 
DCN Others Human 人 Decorin / DCN / SLRR1B 人細胞(bao)裂(lie)解液 (陽性對(dui)照(zhao)) 瑞替(ti)加(jia)濱Retigabine質量規格(ge)：HPLC>95%,

腎(shen)小管上(shang)皮細(xi)胞(bao)Many types of cells包裝：5 × 105方(fang)(1ml)Ribavirin質量規格(ge)：>99%,BR

IFNA8 Others Cynomolgus 食蟹(xie)猴(hou) Ierferon alpha-B / IFNA8 人細胞(bao)裂(lie)解液 (陽性對(dui)照(zhao)) （標準品）Ribavirin質量規格(ge)：HPLC>98%,標準品

小鼠(shu)誘(you)導(dao)性多潛能(neng)幹細胞(bao);PUMC-mips-D3Ribostamycin Sulfate質量規格(ge)：≥630µg/mg,BR,可用於細胞(bao)培養(yang)

GLC-82-TK細胞(bao)，人肺腺癌(ai)細胞(bao)(轉(zhuan)染TK基(ji)因(yin)的GLC-82細胞(bao)) 非洲(zhou)綠(lv)猴腎(shen)細胞(bao),COS-1細胞(bao) CL-0066COLO 205(人結腸(chang)癌(ai)細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×2利福布(bu)丁(ding)Rifabutin 質量規格(ge)：>97%,BR
Promocell C-23020 Fibroblast Growth Medium 2, 成(cheng)纖(xian)維細胞(bao)生(sheng)長(chang)培養(yang)基(ji)2型(即用型) 500ml分(fen)子(zi)篩(shai)4A( beads,8-12 mesh)Molecular sieves, 4 Å質量規格(ge)：beads,8-12 mesh

黃胸(xiong)鼠(shu)肺成(cheng)纖(xian)維細胞(bao);YCR分(fen)子(zi)篩(shai), 5 Å(20-40目,氣相(xiang)、液(ye)相色譜(pu)柱)Molecular sieves, 5 Å質量規格(ge)：20-40目,氣相(xiang)、液(ye)相色譜(pu)柱

CD83 Others Rat 大鼠(shu) CD83 人細胞(bao)裂(lie)解液 (陽性對(dui)照(zhao)) 4,7-二溴(xiu)-2,1,3-苯並噻二唑(zuo)(>98.0%(GC))4,7-Dibromo-2,1,3-benzothiadiazole質量規格(ge)：>98.0%(GC)

人外周血(xue)白(bai)細胞(bao)*培養(yang)基(ji) 100mL2,7-二溴(xiu)-9,9-二甲(jia)基(ji)芴(wu)(>98.0%(HPLC))2,7-Dibromo-9,9-dimethylfluorene質量規格(ge)：>98.0%(HPLC)

Tca-8113細胞(bao)，人舌(she)癌(ai)細胞(bao) 鼠(shu)傷寒(han)沙門氏(shi)菌(jun)Ta102 正常(chang)大鼠(shu)腎(shen)細胞(bao);NRK2,2'-二溴(xiu)-9,9,-螺二[9H-芴(wu)](>95.0%(GC))2,2'-Dibromo-9,9'-spirobi[9H-fluorene]質量規格(ge)：>95.0%(GC)
PBK Others Human 人 PDK / PDZ binding kinase / TOPK 桿(gan)狀病(bing)毒(du)-昆蟲細胞(bao)裂(lie)解液 (陽性對(dui)照(zhao)) 芍藥(yao)苷(gan)（標準品）質量規格(ge)：>98%,分(fen)析(xi)標(biao)準品Paeoniflorin

人少(shao)突(tu)膠(jiao)質前(qian)體細胞(bao)cDNAHOPC cDNA芍藥(yao)苷(gan)(40%)質量規格(ge)：≥40%Paeoniflorin

MCF-7細胞(bao)，人癌細(xi)胞(bao) 人肺鱗癌細(xi)胞(bao),LTEP-s細胞(bao) 滑膜細胞(bao)Many types of cells包裝：5 × 105方(fang)(1ml)芍藥(yao)苷(gan)(50%)質量規格(ge)：≥50%,BRPaeoniflorin

犬腎(shen)細胞(bao)系/野生(sheng)型(xing);MDCK/wild芍藥(yao)苷(gan)(90%)質量規格(ge)：≥90%Paeoniflorin

PLAT Others Human 人 tPAβ 人細胞(bao)裂(lie)解液 (陽性對(dui)照(zhao)) 5-(4-甲(jia)氧羰基(ji)苯基(ji))-10,15,2-三苯基(ji)卟(bu)吩(>90.0%(HPLC))質量規格(ge)：>90.0%(HPLC)5-(4-Methoxycarbonylphenyl)-10,15,20-triphenylporphyrin
骨(gu)碎(sui)補(bu)探針(zhen)法PCR鑒定(ding)試(shi)劑盒(he)*tTA基(ji)因(yin)修飾(shi)的小(xiao)鼠(shu)畸胎瘤細胞(bao)(B類);P19-CAG-tTA-1F33,3',4,4'-聯本(ben)四(si)，英(ying)文名(ming)或(huo)英(ying)文縮(suo)寫：DAB，級別：BR，85%，規格(ge)：100克

SGC-7901細胞(bao)，胃(wei)腺癌(ai)細胞(bao) 人食管癌(ai)細(xi)胞(bao),Eca-109細胞(bao) 大鼠(shu)腎(shen)上(shang)腺嗜(shi)鉻細胞(bao)瘤細胞(bao);PC-12 [PC12](R)-(+)-叔丁(ding)基(ji)亞磺酰(xian)安 (R)-(+)-2-Mqthyl-2-propcnqsulfincmidq 19699-78-9

小鼠(shu)誘(you)導(dao)性多潛能(neng)幹細胞(bao);PUMC-mips-A5L-西代(dai)胱安(an)基(ji)醋(cu) L-SqLqNOCYSTINq 96
實(shi)驗(yan)流程(cheng)：
1. 整個檢(jian)測(ce)過(guo)程(cheng)應嚴(yan)格(ge)按照本說(shuo)明書要求分(fen)別(bie)在(zai)試劑準備區(qu)、樣(yang)本處(chu)理(li)區(qu)和PCR擴增區(qu)進(jin)行(xing)操作，各區實(shi)驗(yan)服(fu)、儀器(qi) 、耗材應(ying)獨立使用，不能(neng)混(hun)用；實(shi)驗(yan)用吸(xi)頭(tou)采(cai)用帶濾芯(xin)吸(xi)頭(tou)；樣(yang)本處(chu)理(li)區(qu)應配有生(sheng)物安(an)全櫃，樣(yang)本處(chu)理(li)在(zai)生物(wu)安(an)全(quan)櫃中進(jin)行(xing)操作；三個(ge)區應(ying)該(gai)配有紫(zi)外線殺菌裝置。
2. 為避(bi)免RNA降(jiang)解，樣(yang)本處(chu)理(li)過(guo)程應(ying)在(zai)0-4℃條件下操作，且完成(cheng)實(shi)驗(yan)後立(li)即(ji)上(shang)機檢測(ce)；樣(yang)本處(chu)理(li)過(guo)程中使(shi)用的器(qi)具耗(hao)材應(ying)經過(guo)無核(he)酶(mei)處(chu)理(li)。

3. 每次實(shi)驗(yan)應該(gai)設置(zhi)陰、陽(yang)性對(dui)照(zhao)。
4. 試劑盒(he)所(suo)有試(shi)劑在(zai)使用前(qian)應該(gai)在(zai)常(chang)溫下充分(fen)融(rong)化混(hun)勻，並應(ying)瞬時(shi)離(li)心(xin)。
5. 試劑盒(he)內(nei)所(suo)配陰性和(he)陽(yang)性對(dui)照(zhao)在(zai)壹次使用前(qian)應全部轉(zhuan)移至(zhi)標本準備區(qu)，並(bing)單獨存放。
6. 為防(fang)止(zhi)熒光幹擾，應(ying)避(bi)免裸手直(zhi)接(jie)接(jie)觸(chu)PCR反應(ying)管，並(bing)應(ying)避(bi)免在(zai)PCR反應(ying)管上(shang)進(jin)行(xing)任(ren)何標(biao)記。
7. 儀器(qi) 擴增相(xiang)關(guan)參(can)數(shu)應(ying)按照本說(shuo)明書相關(guan)要求進(jin)行(xing)設置(zhi)；不同(tong)批(pi)號試劑不能(neng)混(hun)用。
8. ABI系列(lie)熒光定量PCR儀參(can)數(shu)設置(zhi)中不選ROX校(xiao)正(zheng)，淬滅(mie)基(ji)因(yin)選擇(ze)None。
9. 實(shi)驗(yan)過程(cheng)中產品(pin)的(de)廢棄物(wu)應(ying)該(gai)進(jin)行(xing)無害化處(chu)理(li)後(hou)方(fang)可(ke)丟(diu)棄。