大黃(huang)染料(liao)法PCR鑒定(ding)試劑(ji)盒*

儲存條件(jian)：
14℃或(huo)－20℃樣(yang)品收集(ji)、處理(li)及(ji)保存方法
1. 血(xue)清：使用(yong)不含(han)熱原(yuan)和(he)內(nei)毒(du)素(su)的試管，操(cao)作過(guo)程中(zhong)避(bi)免(mian)任何(he)細胞(bao)刺(ci)激，收集(ji)血(xue)液(ye)後，3000 轉離心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)將(jiang)血(xue)清和(he)紅細胞(bao)迅(xun)速(su)小心(xin)地分(fen)離。
2. 血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬(meng)酸(suan)鹽或(huo)肝素(su)抗(kang)凝(ning)。3000 轉離心(xin)30 分(fen)鐘(zhong)取(qu)上(shang)清(qing)。
3. 細胞(bao)上(shang)清(qing)液(ye)：3000 轉離心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆(ke)粒和(he)聚合(he)物(wu)。
4. 組織(zhi)勻漿(jiang)：將(jiang)組(zu)織(zhi)加(jia)入適(shi)量生理(li)鹽(yan)水搗碎(sui)。3000 轉離心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)取(qu)上(shang)清(qing)。
5. 保存：如(ru)果樣(yang)本收集(ji)後不及時(shi)檢(jian)測(ce)，請(qing)按壹(yi)次用(yong)量分(fen)裝(zhuang)，凍存(cun)於(yu)-20℃，避免反(fan)復(fu)凍融(rong)，在室溫下(xia)解凍並(bing)確(que)保樣(yang)品均(jun)勻地充分(fen)解凍。

特(te)點：
1. 即(ji)開即(ji)用，用戶只需要(yao)提(ti)供病(bing)毒(du)樣(yang)品。
2. 根(gen)據(ju)地黃(huang)保守序列(lie)設計(ji)的專壹(yi)性引物(wu)，與(yu)相關(guan)病毒(du)無(wu)交叉(cha)反(fan)應。
3. 靈敏(min)度(du)可(ke)以達到幾百拷貝/反應。
4. 壹管式(shi)熒光(guang)定(ding)量 PCR 檢測，避(bi)免(mian)後續汙(wu)染。
5. 本試劑(ji)盒足(zu)夠 50 次 20μL 反應體系的熒光定(ding)量 PCR。
6. 本產品只適(shi)用(yong)於(yu)科研，不能用於臨床(chuang)診斷。

使用方(fang)法：
壹、樣(yang)品采(cai)集(ji)：
1、食品樣(yang)品：樣(yang)品的采集(ji)與(yu)預培(pei)養按照樣(yang)品的采集(ji)與(yu)預培(pei)養按照《食品衛生微(wei)生物(wu)學(xue)檢(jian)驗(yan)阪崎腸桿菌(jun)檢驗(yan)要(yao)求進(jin)行(xing)。
2、血(xue)液(ye)樣(yang)品：用(yong)無(wu)菌註射器抽取受檢(jian)者靜(jing)脈(mai)血(xue)2mL，註入無(wu)菌EDTA2Na(或(huo)檸(ning)檬(meng)酸(suan)鈉)抗(kang)凝(ning)管，立即(ji)混勻。
3、糞便樣(yang)品：取(qu)糞便置(zhi)於(yu)滅菌(jun)的收集(ji)管中(zhong)送檢(jian)。
4、病竈(zao)部位(wei)樣(yang)品：取(qu)發病(bing)部(bu)位(wei)新(xin)鮮滲(shen)出物(wu)、粘(zhan)液(ye)膿血(xue)送檢(jian)。
壹、稀釋 PCR 陽(yang)性對(dui)照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度(du)為(wei)例(li)）
1. 註意：由於標準(zhun)品濃度(du)非(fei)常(chang)高，因此(ci)下(xia)列(lie)稀釋操(cao)作壹定(ding)要(yao)在(zai)獨立(li)的區域進(jin)行(xing)，千萬(wan)不能汙染樣(yang)品或(huo)本試劑(ji)盒的其(qi)他成分(fen)）。為(wei)增(zeng)加產品穩(wen)定性(xing)和(he)避免擴(kuo)散傳(chuan)染(ran)性(xing)病(bing)原(yuan)，本產品不提供活(huo)體樣(yang)品做(zuo)陽(yang)性對(dui)照，只提供可(ke)以直接(jie)使(shi)用(yong)的 DNA段作為(wei)陽(yang)性對(dui)照。
2. 標記(ji) 6 個離心管，分(fen)別(bie)為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶(dai)芯槍(qiang)頭分(fen)別(bie)加入 45 μL 熒光 PCR 模板(ban)稀釋液(ye)（用帶(dai)芯槍(qiang)頭，下(xia)同(tong)）。
4. 在 7 號管中(zhong)加(jia)入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de)1×10E7 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照。放冰上(shang)待(dai)用。
5. 換槍(qiang)頭，在(zai) 6 號管中(zhong)加(jia)入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照(上(shang)步(bu)稀釋所(suo)得(de))，充分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照。放冰上(shang)待(dai)用。
6. 換槍(qiang)頭，在(zai) 5 號管中(zhong)加(jia)入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照到(dao) 5 號管中(zhong)，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照。放冰上(shang)待(dai)用。
7. 重復(fu)上(shang)面(mian)的操(cao)作直到得(de)到 6 個稀釋度(du)的陽(yang)性對(dui)照。放冰上(shang)待(dai)用。
註：上(shang)述樣(yang)品建(jian)議經(jing)過(guo)增(zeng)菌後，收集(ji)培(pei)養物(wu)用(yong)於(yu)檢測(ce)。 
二(er)、DNA提取：
可采用(yong)PCR試劑(ji)盒配(pei)備(bei)的DNA抽提液(ye)，按以下說明進行DNA核酸(suan)的粗提。也(ye)可(ke)采購上(shang)海(hai)澤(ze)葉生物(wu)科技有(you)限(xian)公司生產(chan)的DNA提取試劑(ji)盒(過(guo)柱法-熒光配(pei)套)或(huo)其(qi)他合適(shi)的商業化產品，並(bing)按照相(xiang)應試劑(ji)盒說(shuo)明進行操(cao)作。
1、液(ye)體培(pei)養物(wu)：取(qu)液(ye)體培(pei)養物(wu)100μL加到1.5mL無(wu)菌離(li)心(xin)管中(zhong)，8000rpm離心3min，盡(jin)量吸棄(qi)上(shang)清(qing)，加(jia)入50μL DNA抽提液(ye)充分(fen)混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上(shang)清(qing)5μL進行PCR反應。
2、固體培(pei)養物(wu)：挑(tiao)取單(dan)克隆菌落(luo)與(yu)50μL DNA抽提液(ye)充分(fen)混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上(shang)清(qing)5μL進行PCR反應。
3、糞便樣(yang)品：挑(tiao)取米(mi)粒大小糞(fen)便於(yu)滅(mie)菌離(li)心管中(zhong)，加(jia)入0.5mL生理(li)鹽(yan)水，振蕩(dang)混勻，13000rpm離心3分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加(jia)入50μL DNA抽提液(ye)充分(fen)混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上(shang)清(qing)5μL進行PCR反應。
4、其(qi)他液(ye)體標本：取(qu)標本2-3mL，13000rpm離心3min，棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加(jia)入50μL DNA抽提液(ye)充分(fen)混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上(shang)清(qing)5μL進行PCR反應。
註：陽(yang)性對(dui)照和(he)陰(yin)性(xing)對照為(wei)已(yi)經(jing)抽(chou)提(ti)好(hao)的核酸(suan)(無(wu)需提(ti)取(qu))，直接(jie)取(qu)5μL加入到反(fan)應體系中(zhong)即(ji)可。由於陽(yang)性對(dui)照濃度(du)較(jiao)高，建(jian)議(yi)在(zai)樣(yang)品制備(bei)區(qu)域(yu)加(jia)入陽(yang)性對(dui)照。 
人牙齦(yin)成纖(xian)維(wei)細胞(bao)裂(lie)解物(wu)HGFL馬(ma)西替(ti)坦(tan);ACT064992Macitentan質(zhi)量規格(ge)：>99%,內(nei)皮(pi)素(su)(ET)受體拮抗(kang)劑(ji)

CD59 Others Cymolgus 食蟹猴(hou) CD59 / CD59A / MAC-IP 人細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性對(dui)照) 組蛋白(bai)去(qu)乙(yi)酰(xian)化(hua)酶抑制劑(ji)(M 344)M344質(zhi)量規格(ge)：>98%,HDAC抑制劑(ji)

人非小(xiao)細(xi)胞(bao)肺(fei)腺癌(ai)細(xi)胞(bao);NCI-H19752-硝基(ji)咪唑(zuo) 2-Nitroimidazole質(zhi)量規格(ge)：>98%,*

MHCC97-L細胞(bao)，人(ren)低轉移肝癌(ai)細(xi)胞(bao) 小鼠白(bai)血(xue)病細胞(bao),P388細胞(bao) 兔腎(shen)細胞(bao);RK-134-(三氟甲(jia)基(ji))-1H-咪唑(zuo) 4-(Trifluoromethyl)-1H-imidazole質(zhi)量規格(ge)：>98%

MADB106(大鼠癌(ai)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×22-甲(jia)基(ji)-4-三氟甲(jia)基(ji)咪唑(zuo) 2-Methyl-4-trifluoromethylimidazole質(zhi)量規格(ge)：>97%
大鼠胰(yi)腺(xian)外分(fen)泌腺(xian)細胞(bao);AR42J中(zhong)性(xing)紅(hong)質(zhi)量規格(ge)：BSNeutral red

KIT Others Rat 大鼠 KIT / c-KIT 人細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性對(dui)照) 橙黃(huang)Ⅳ質(zhi)量規格(ge)：INDOrange Ⅳ

人上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)*培(pei)養基(ji) 100mL重水,氧化氘(dao)(50G)質(zhi)量規格(ge)：D,99.9%Deuterium Oxide

Tca8113-P160細胞(bao)，人(ren)舌(she)癌(ai)細(xi)胞(bao)系(xi) 大腸埃(ai)希(xi)氏菌O157：H7 大鼠腎(shen)上(shang)腺(xian)嗜(shi)鉻(ge)細胞(bao)瘤(liu)細胞(bao)(低分(fen)化);PC-12(低分(fen)化)重水,氧化氘(dao)(100G)質(zhi)量規格(ge)：D,99.9%Deuterium Oxide

CCL23 Protein Human 重組(zu)人 CCL23 / MIP 3 蛋白 (His 標簽(qian))氘(dao)代(dai)硫酸(suan)(0.55 ml x 10)質(zhi)量規格(ge)：D,99.5%, acidity 90% IN D2O Sulfuric Acid-D2
IFNAR1 Others Cymolgus 食蟹猴(hou) IFNAR1 / IFNAR 人細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性對(dui)照) 3A分(fen)子篩(20-40目,氣相、液(ye)相色譜(pu)柱)質(zhi)量規格(ge)：20-40目,氣相、液(ye)相色譜(pu)柱Molecular sieves, 3 Å

人腎(shen)小球(qiu)內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)裂(lie)解物(wu)HRGECL3A分(fen)子篩(40-60目,氣相、液(ye)相色譜(pu)柱)質(zhi)量規格(ge)：40-60目,氣相、液(ye)相色譜(pu)柱Molecular sieves, 3 Å

A2780細胞(bao)，人(ren)卵(luan)巢(chao)癌(ai)細(xi)胞(bao) 鮭(gui)魚(yu)胚(pei)胎細胞(bao),CHSE細胞(bao) 腦微(wei)血(xue)管內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105方(1ml)3A分(fen)子篩(60-80目,氣相、液(ye)相色譜(pu)柱)質(zhi)量規格(ge)：60-80目,氣相、液(ye)相色譜(pu)柱Molecular sieves, 3 Å

BNL 1ME A.7R.1(小鼠肝上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×23A分(fen)子篩(80-100目,氣相、液(ye)相色譜(pu)柱)質(zhi)量規格(ge)：80-100目,氣相、液(ye)相色譜(pu)柱Molecular sieves, 3 Å

HAoSMC Pellet 人主動脈平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞(bao)團(tuan)塊(kuai) > 1 mio.cells 人無(wu)色素(su)睫(jie)狀上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)裂(lie)解物(wu)HNPCEpiCL1,6-二(er)1酸(suan)果糖(tang)三鈉(na)鹽(98-101.0%，BR)質(zhi)量規格(ge)：98-101.0%，BRFructose 1,6-bisphosphate, 3 salt
大黃(huang)染料(liao)法PCR鑒定(ding)試劑(ji)盒*HFL1 人肺(fei)成纖(xian)維(wei)細胞(bao)錄(lu)化(hua)芐(bian)基(ji)三乙(yi)，英(ying)文名或(huo)英(ying)文縮(suo)寫：TEBAC，級別(bie)：CP，45.5%，規格(ge)：100毫克

CM-R043大鼠小(xiao)腸(chang)平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞(bao)*培(pei)養基(ji)100mL Mixidil,≥99% 38304-91-5 5G 通(tong)用試劑(ji)

U251人膠(jiao)質(zhi)瘤(liu)細胞(bao)草醋(cu);二(er)醋(cu) litxium oxclctq 223-91-3

EB病毒(du)轉化的人B細胞(bao);HH-29 人腦膜(mo)細(xi)胞(bao)*培(pei)養基(ji) 100mL腺苷脫酶(mei)測(ce)試盒shēng huà shì jì容量：RT200支/包

人上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao);MCF-10APH緩沖液(ye)　PH1.0(20
實驗(yan)流程：
1. 整個檢測過(guo)程應嚴格(ge)按照本(ben)說(shuo)明書要(yao)求分(fen)別(bie)在試劑(ji)準(zhun)備(bei)區(qu)、樣(yang)本處理(li)區(qu)和(he)PCR擴(kuo)增區進(jin)行操(cao)作，各區實驗(yan)服、儀器 、耗(hao)材(cai)應獨立(li)使(shi)用，不能混用；實(shi)驗(yan)用吸頭采用帶(dai)濾芯吸頭；樣(yang)本處理(li)區(qu)應配(pei)有(you)生物(wu)安全櫃，樣(yang)本處理(li)在(zai)生物(wu)安全櫃中(zhong)進(jin)行(xing)操(cao)作；三個區應該(gai)配(pei)有(you)紫(zi)外線(xian)殺菌(jun)裝(zhuang)置。
2. 為(wei)避(bi)免RNA降解，樣(yang)本處理(li)過(guo)程應在(zai)0-4℃條件(jian)下(xia)操(cao)作，且完(wan)成實(shi)驗(yan)後立(li)即(ji)上(shang)機(ji)檢測；樣(yang)本處理(li)過(guo)程中(zhong)使(shi)用(yong)的器具耗(hao)材(cai)應經(jing)過(guo)無(wu)核酶處理(li)。

3. 每次(ci)實驗(yan)應該(gai)設置(zhi)陰(yin)、陽(yang)性對(dui)照。
4. 試劑(ji)盒所(suo)有(you)試劑(ji)在使(shi)用(yong)前(qian)應該(gai)在常(chang)溫下(xia)充(chong)分(fen)融(rong)化混勻，並應瞬時(shi)離(li)心(xin)。
5. 試劑(ji)盒內(nei)所(suo)配(pei)陰(yin)性(xing)和(he)陽(yang)性對(dui)照在(zai)壹(yi)次(ci)使用前應全部轉移至(zhi)標本準(zhun)備(bei)區(qu)，並(bing)單(dan)獨存(cun)放。
6. 為(wei)防(fang)止(zhi)熒(ying)光(guang)幹(gan)擾，應避(bi)免裸(luo)手直接(jie)接(jie)觸(chu)PCR反應管，並應避(bi)免在(zai)PCR反應管上(shang)進(jin)行(xing)任何(he)標記(ji)。
7. 儀器 擴(kuo)增相關(guan)參(can)數應按(an)照本(ben)說(shuo)明書相關(guan)要(yao)求進(jin)行(xing)設(she)置(zhi)；不同批(pi)號試劑(ji)不能混用。
8. ABI系列(lie)熒光(guang)定(ding)量PCR儀參(can)數設(she)置中(zhong)不選ROX校正，淬(cui)滅(mie)基(ji)因選(xuan)擇(ze)None。
9. 實驗(yan)過(guo)程中(zhong)產(chan)品的廢棄(qi)物(wu)應該(gai)進行(xing)無(wu)害化(hua)處理(li)後(hou)方可丟棄(qi)。