使君子(zi)探(tan)針法(fa)PCR鑒定(ding)試(shi)劑(ji)盒*

儲(chu)存(cun)條(tiao)件：
14℃或－20℃樣(yang)品(pin)收集(ji)、處(chu)理(li)及(ji)保(bao)存(cun)方(fang)法
1. 血(xue)清(qing)：使用不(bu)含熱原和(he)內毒(du)素(su)的(de)試(shi)管，操(cao)作過(guo)程中(zhong)避免任(ren)何(he)細胞刺(ci)激(ji)，收集(ji)血(xue)液後(hou)，3000 轉離心(xin)10 分鐘(zhong)將(jiang)血(xue)清(qing)和紅(hong)細胞迅(xun)速小(xiao)心(xin)地(di)分離。
2. 血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬(meng)酸(suan)鹽(yan)或肝素(su)抗凝(ning)。3000 轉離心(xin)30 分鐘(zhong)取(qu)上清(qing)。
3. 細胞上(shang)清(qing)液：3000 轉離心(xin)10 分鐘(zhong)去除(chu)顆(ke)粒(li)和聚(ju)合(he)物(wu)。
4. 組織勻漿(jiang)：將(jiang)組織加(jia)入(ru)適(shi)量(liang)生(sheng)理(li)鹽(yan)水搗(dao)碎(sui)。3000 轉離心(xin)10 分鐘(zhong)取(qu)上清(qing)。
5. 保(bao)存(cun)：如(ru)果(guo)樣(yang)本收(shou)集後(hou)不(bu)及(ji)時(shi)檢(jian)測，請按壹次(ci)用(yong)量(liang)分裝，凍(dong)存(cun)於(yu)-20℃，避免反(fan)復凍融(rong)，在(zai)室(shi)溫(wen)下解(jie)凍並確(que)保(bao)樣(yang)品(pin)均勻地(di)充(chong)分解(jie)凍。

特點(dian)：
1. 即開即用(yong)，用(yong)戶只(zhi)需(xu)要提(ti)供病毒(du)樣(yang)品(pin)。
2. 根據地(di)黃(huang)保(bao)守(shou)序列(lie)設計的(de)專(zhuan)壹性(xing)引(yin)物(wu)，與相關病毒(du)無(wu)交(jiao)叉(cha)反(fan)應。
3. 靈敏度(du)可以達到(dao)幾(ji)百(bai)拷(kao)貝/反(fan)應。
4. 壹管(guan)式(shi)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang) PCR 檢(jian)測，避免後(hou)續(xu)汙染(ran)。
5. 本(ben)試(shi)劑(ji)盒足夠 50 次(ci) 20μL 反應體系(xi)的(de)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang) PCR。
6. 本產品(pin)只(zhi)適(shi)用(yong)於(yu)科(ke)研(yan)，不(bu)能(neng)用(yong)於(yu)臨(lin)床(chuang)診斷(duan)。

使(shi)用(yong)方(fang)法：
壹、樣(yang)品(pin)采集(ji)：
1、食品(pin)樣(yang)品(pin)：樣(yang)品(pin)的(de)采(cai)集(ji)與預培養按(an)照(zhao)樣(yang)品(pin)的(de)采(cai)集(ji)與預培養按(an)照(zhao)《食(shi)品(pin)衛生(sheng)微(wei)生(sheng)物(wu)學(xue)檢(jian)驗(yan)阪崎(qi)腸桿(gan)菌(jun)檢(jian)驗(yan)要求(qiu)進行。
2、血(xue)液樣(yang)品(pin)：用無(wu)菌(jun)註射器(qi)抽取受檢(jian)者靜(jing)脈血(xue)2mL，註入(ru)無(wu)菌(jun)EDTA2Na(或檸檬(meng)酸(suan)鈉)抗(kang)凝(ning)管，立(li)即混勻。
3、糞(fen)便樣(yang)品(pin)：取糞(fen)便置於(yu)滅(mie)菌的(de)收(shou)集(ji)管中(zhong)送檢(jian)。
4、病竈部位(wei)樣(yang)品(pin)：取發(fa)病部位(wei)新(xin)鮮滲(shen)出(chu)物(wu)、粘液膿(nong)血(xue)送檢(jian)。
壹、稀(xi)釋(shi) PCR 陽性(xing)對(dui)照(zhao)（以 10E2-10E7 拷(kao)貝/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍(bei)稀(xi)釋(shi)度(du)為(wei)例(li)）
1. 註意：由(you)於(yu)標準品(pin)濃度(du)非常(chang)高，因(yin)此下(xia)列(lie)稀(xi)釋(shi)操(cao)作壹定(ding)要在(zai)獨(du)立的(de)區域(yu)進(jin)行，千萬不(bu)能(neng)汙染(ran)樣(yang)品(pin)或本試(shi)劑(ji)盒的(de)其他(ta)成(cheng)分）。為(wei)增(zeng)加產品(pin)穩定(ding)性(xing)和(he)避免擴(kuo)散(san)傳(chuan)染(ran)性(xing)病原，本(ben)產品(pin)不(bu)提(ti)供活(huo)體樣(yang)品(pin)做陽性(xing)對(dui)照(zhao)，只(zhi)提(ti)供可以直接(jie)使(shi)用(yong)的(de) DNA段作為(wei)陽性(xing)對(dui)照(zhao)。
2. 標記 6 個(ge)離心(xin)管(guan)，分別(bie)為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍(qiang)頭(tou)分別(bie)加入(ru) 45 μL 熒(ying)光(guang) PCR 模板(ban)稀(xi)釋(shi)液(ye)（用(yong)帶芯槍(qiang)頭(tou)，下(xia)同(tong)）。
4. 在(zai) 7 號管(guan)中(zhong)加入(ru) 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性(xing)對(dui)照(zhao)，充(chong)分震蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得(de)1×10E7 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性(xing)對(dui)照(zhao)。放冰上待(dai)用(yong)。
5. 換(huan)槍(qiang)頭(tou)，在(zai) 6 號管(guan)中(zhong)加入(ru) 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性(xing)對(dui)照(zhao)(上步稀(xi)釋(shi)所(suo)得(de))，充分震蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得(de) 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性(xing)對(dui)照(zhao)。放冰上待(dai)用(yong)。
6. 換(huan)槍(qiang)頭(tou)，在(zai) 5 號管(guan)中(zhong)加入(ru) 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性(xing)對(dui)照(zhao)到(dao) 5 號管(guan)中(zhong)，充分震蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得(de) 1×10E5 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性(xing)對(dui)照(zhao)。放冰上待(dai)用(yong)。
7. 重復上面(mian)的(de)操(cao)作直到(dao)得到(dao) 6 個(ge)稀(xi)釋(shi)度(du)的(de)陽性(xing)對(dui)照(zhao)。放冰上待(dai)用(yong)。
註：上述(shu)樣(yang)品(pin)建議(yi)經(jing)過(guo)增(zeng)菌後，收(shou)集(ji)培養物(wu)用(yong)於(yu)檢(jian)測。 
二、DNA提(ti)取(qu)：
可采用(yong)PCR試(shi)劑(ji)盒配備的(de)DNA抽提液，按以下說(shuo)明(ming)進(jin)行DNA核(he)酸的(de)粗(cu)提(ti)。也(ye)可采購(gou)上海(hai)澤(ze)葉生(sheng)物(wu)科(ke)技(ji)有(you)限(xian)公(gong)司生(sheng)產(chan)的(de)DNA提取試(shi)劑(ji)盒(過柱(zhu)法(fa)-熒(ying)光(guang)配套(tao))或其他(ta)合(he)適的(de)商業化產品(pin)，並按(an)照(zhao)相(xiang)應試(shi)劑(ji)盒說(shuo)明(ming)進(jin)行操(cao)作。
1、液(ye)體培養物(wu)：取(qu)液(ye)體(ti)培養物(wu)100μL加(jia)到(dao)1.5mL無菌離心(xin)管(guan)中(zhong)，8000rpm離心(xin)3min，盡量吸(xi)棄上(shang)清(qing)，加入(ru)50μL DNA抽提液充分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取上(shang)清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
2、固體(ti)培養物(wu)：挑(tiao)取(qu)單克隆(long)菌(jun)落與50μL DNA抽提液充分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取上(shang)清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
3、糞(fen)便樣(yang)品(pin)：挑取(qu)米粒大小(xiao)糞(fen)便於(yu)滅(mie)菌離心(xin)管(guan)中(zhong)，加入(ru)0.5mL生(sheng)理(li)鹽(yan)水，振蕩(dang)混(hun)勻，13000rpm離心(xin)3分鐘(zhong)，棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加入(ru)50μL DNA抽提液充分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取上(shang)清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
4、其他(ta)液(ye)體標本：取(qu)標本2-3mL，13000rpm離心(xin)3min，棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加入(ru)50μL DNA抽提液充分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取上(shang)清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
註：陽性(xing)對(dui)照(zhao)和(he)陰(yin)性(xing)對(dui)照(zhao)為(wei)已經(jing)抽提好的(de)核(he)酸(suan)(無需(xu)提取(qu))，直接(jie)取(qu)5μL加入(ru)到(dao)反應體系(xi)中(zhong)即可。由於(yu)陽性(xing)對(dui)照(zhao)濃(nong)度(du)較高，建議(yi)在(zai)樣(yang)品(pin)制備區域(yu)加(jia)入(ru)陽性(xing)對(dui)照(zhao)。 
Calu-3 人肺腺癌(ai)細胞(胸膜(mo)滲出液)順(shun)式-α-羥基它(ta)莫(mo)西(xi)芬(fen)cis-α-Hydroxy Tamoxifen質(zhi)量規(gui)格(ge)：美(mei)國(guo)進(jin)口

BGC-823-EGFP-puro人胃(wei)癌(ai)細胞 Human gasic cancer cells BGC-823-EGFP-puro 1640+10% Hyclone滅活(huo)血(xue)清(qing)+2ug/ml puromycinN-氧(yang)基它(ta)莫(mo)西(xi)芬(fen)Tamoxifen-N-oxide質(zhi)量規(gui)格(ge)：美(mei)國(guo)進(jin)口

BMP2 Protein Human 重組人 BMP-2 蛋(dan)白(bai) (Fc 標簽)α-羥基它(ta)莫(mo)西(xi)芬(fen)α-Hydroxy Tamoxifen質(zhi)量規(gui)格(ge)：美(mei)國(guo)進(jin)口

人心(xin)臟(zang)微(wei)血(xue)管內(nei)皮細胞 (HCMEC)( 5×105 ) SF9, 昆蟲卵(luan)巢細胞 其它(ta)N-去甲(jia)基-4'-羥(qiang)基它(ta)莫(mo)西(xi)芬(fen)N-Desmethyl-4'-hydroxy Tamoxifen質(zhi)量規(gui)格(ge)：美(mei)國(guo)進(jin)口

小(xiao)鼠(shu)紅(hong)白(bai)血(xue)病細胞;MELN-去甲(jia)基它(ta)莫(mo)西(xi)芬(fen)鹽(yan)酸鹽(yan)N-Desmethyl Tamoxifen 質(zhi)量規(gui)格(ge)：美(mei)國(guo)進(jin)口
綠色(se)熒(ying)光(guang)蛋(dan)白(bai)標記小(xiao)鼠(shu)子(zi)細胞;U14-GFPN-甲基-D-天(tian)N-Methyl-d-Aspartic Acid質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%,BR

中(zhong)國倉(cang)鼠(shu)卵(luan)巢細胞(亞(ya)系(xi)克隆(long));CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ1 cDNA 腹水瘤細胞，SAC-IIB2細胞 VMR106細胞，大鼠(shu)骨(gu)肉(rou)瘤細胞D-四氫(qing)藥(yao)根堿（標準品(pin)）(R)-(+)-Corypalmine質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標準品(pin)

人(ren)胚肺二倍體(ti)細胞;2BSD-醇（標準品(pin)）D-Pinitol質(zhi)量規(gui)格(ge)：95%，標準品(pin)

CLEC4A Others Human 人(ren) DCIR / CLEC4A / CLECSF6 人細胞裂(lie)解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) 果(guo)菊(ju)苷(gan)（標準品(pin)）Echinacoside質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標準品(pin)

破(po)骨(gu)細胞Many types of cells包(bao)裝：5 × 105方(fang)(1ml)蘿酸(標準品(pin))Usnic acid質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標準品(pin)
大鼠(shu)腸巨噬(shi)細胞*培養基 100mLAG490,AG-490質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%,BRAG 490(Tyrphostin B42)

R 1610倉(cang)鼠(shu)肺細胞 R 1610 hamster lung cells DMEM+10%FBS靈芝(zhi)酸F(標準品(pin))質(zhi)量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標準品(pin)Gaderic acid F

FGF10 Protein Human 重組人 FGF10 蛋(dan)白(bai)(UDCA)標準品(pin)質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%,標準品(pin)Ursodeoxycholic acid

Chang liver (CCL13) (人(ren)張(zhang)氏肝細胞) 5×106cells/瓶×2 人心(xin)臟(zang)微(wei)血(xue)管內(nei)皮細胞HCMEC(UDCA)質(zhi)量規(gui)格(ge)：>98%,BRUrsodeoxycholic acid

直腸癌(ai)組織源性(xing)原代(dai)細胞Many types of cells包(bao)裝：5 × 105方(fang)(1ml)/1ml質(zhi)量規(gui)格(ge)：UV 80%；雙(shuang)賓(bin)30%Silymarin
使(shi)君子(zi)探(tan)針法(fa)PCR鑒定(ding)試(shi)劑(ji)盒*MDA-MB-453(人癌(ai)細胞) 5×106cells/瓶×2Ursolicacid3-羥基-(3β)-烏索(suo)12-1-28-酸5克BR，85%

Promocell C-22162 Smooth Muscle Cell GrowthMedium 2 KIT, 平滑(hua)肌(ji)細胞生(sheng)長培養基2型(xing)套(tao)裝 500ml3-基-2-本(ben)並噻坐(zuo)啉(lin)同 3-MqTHYL-2-BqNZOTHIcZOLINq HYDRcZONq xy7CHLORIDq 4338-98-1

人脈絡(luo)叢內(nei)皮(pi)細胞裂(lie)解(jie)物(wu)HCPECLToluidinepule胺(an)蘭(lan)10
實(shi)驗(yan)流(liu)程：
1. 整個(ge)檢(jian)測過程應嚴格(ge)按(an)照(zhao)本(ben)說(shuo)明(ming)書(shu)要求(qiu)分別(bie)在(zai)試(shi)劑(ji)準備區、樣(yang)本處(chu)理(li)區和(he)PCR擴(kuo)增(zeng)區進(jin)行操(cao)作，各(ge)區實(shi)驗(yan)服(fu)、儀(yi)器(qi) 、耗材應獨立(li)使(shi)用，不(bu)能(neng)混(hun)用(yong)；實(shi)驗(yan)用(yong)吸頭(tou)采(cai)用帶濾(lv)芯吸(xi)頭(tou)；樣(yang)本處(chu)理(li)區應配有生(sheng)物(wu)安全櫃(gui)，樣(yang)本處(chu)理(li)在(zai)生(sheng)物(wu)安全櫃(gui)中(zhong)進行操(cao)作；三(san)個(ge)區應該(gai)配有紫(zi)外(wai)線殺菌裝置(zhi)。
2. 為(wei)避免RNA降(jiang)解(jie)，樣(yang)本處(chu)理(li)過(guo)程(cheng)應在(zai)0-4℃條(tiao)件下操(cao)作，且(qie)完成(cheng)實驗後立即上機(ji)檢(jian)測；樣(yang)本處(chu)理(li)過(guo)程(cheng)中(zhong)使用(yong)的(de)器(qi)具耗材應經(jing)過(guo)無核(he)酶處(chu)理(li)。

3. 每(mei)次(ci)實(shi)驗(yan)應該(gai)設置陰、陽性(xing)對(dui)照(zhao)。
4. 試(shi)劑(ji)盒所有試(shi)劑(ji)在(zai)使(shi)用前應該(gai)在(zai)常(chang)溫下充分融(rong)化混勻，並應瞬時(shi)離心(xin)。
5. 試(shi)劑(ji)盒內所配陰性(xing)和(he)陽性(xing)對(dui)照(zhao)在(zai)壹次(ci)使(shi)用(yong)前應全部轉移至標本準備區，並(bing)單獨(du)存(cun)放。
6. 為(wei)防(fang)止(zhi)熒(ying)光(guang)幹擾(rao)，應避免裸(luo)手(shou)直接(jie)接(jie)觸PCR反應管，並(bing)應避免在(zai)PCR反應管上(shang)進(jin)行任何標記。
7. 儀器(qi) 擴(kuo)增(zeng)相關參(can)數(shu)應按照(zhao)本(ben)說(shuo)明(ming)書(shu)相關要求(qiu)進行設置；不(bu)同(tong)批(pi)號試(shi)劑(ji)不(bu)能(neng)混(hun)用(yong)。
8. ABI系(xi)列(lie)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)PCR儀(yi)參(can)數(shu)設置中(zhong)不(bu)選(xuan)ROX校(xiao)正，淬滅(mie)基因(yin)選擇(ze)None。
9. 實(shi)驗(yan)過程(cheng)中(zhong)產品(pin)的(de)廢(fei)棄物(wu)應該(gai)進行無害(hai)化處(chu)理(li)後(hou)方(fang)可丟棄。