草烏(wu)探針法PCR鑒定試劑盒*

特(te)點(dian)：
1. 即(ji)開(kai)即(ji)用，用戶(hu)只(zhi)需要(yao)提(ti)供病毒樣品(pin)。
2. 根(gen)據(ju)地黃保守序列(lie)設(she)計的專(zhuan)壹(yi)性(xing)引(yin)物(wu)，與(yu)相關(guan)病毒無交叉(cha)反(fan)應(ying)。
3. 靈(ling)敏(min)度可以(yi)達(da)到幾百拷(kao)貝/反(fan)應(ying)。
4. 壹(yi)管(guan)式熒光(guang)定量 PCR 檢(jian)測(ce)，避(bi)免(mian)後(hou)續汙染。
5. 本(ben)試(shi)劑盒足夠 50 次 20μL 反應(ying)體(ti)系(xi)的熒光(guang)定量 PCR。
6. 本(ben)產品(pin)只(zhi)適(shi)用於科(ke)研(yan)，不能用於臨(lin)床診斷(duan)。

使用方法(fa)：
壹(yi)、樣(yang)品采集：
1、食(shi)品(pin)樣(yang)品(pin)：樣品的采集與(yu)預培養按(an)照樣(yang)品的采集與(yu)預培養按(an)照《食(shi)品(pin)衛(wei)生(sheng)微生(sheng)物(wu)學(xue)檢(jian)驗(yan)阪崎(qi)腸(chang)桿(gan)菌(jun)檢(jian)驗(yan)要(yao)求(qiu)進(jin)行。
2、血液樣品(pin)：用無菌註(zhu)射器(qi)抽取受檢(jian)者(zhe)靜脈血2mL，註(zhu)入無菌EDTA2Na(或檸(ning)檬酸(suan)鈉)抗(kang)凝(ning)管，立即(ji)混勻。
3、糞便(bian)樣品(pin)：取糞便(bian)置於(yu)滅(mie)菌的收集管中送檢(jian)。
4、病竈部(bu)位樣(yang)品：取發病部位新(xin)鮮滲(shen)出(chu)物(wu)、粘液膿血送檢(jian)。
壹(yi)、稀(xi)釋 PCR 陽(yang)性對(dui)照（以(yi) 10E2-10E7 拷(kao)貝/μL 這(zhe) 6 個 10 倍(bei)稀(xi)釋度為(wei)例）
1. 註(zhu)意：由(you)於標(biao)準品(pin)濃(nong)度非常(chang)高，因(yin)此下列(lie)稀(xi)釋操(cao)作壹(yi)定要在(zai)獨(du)立的區(qu)域進行，千(qian)萬(wan)不能汙染樣品或(huo)本(ben)試(shi)劑盒的其(qi)他(ta)成(cheng)分）。為(wei)增加產品(pin)穩定性和(he)避(bi)免(mian)擴(kuo)散傳染性病原(yuan)，本(ben)產品(pin)不提(ti)供活(huo)體樣品(pin)做陽(yang)性對(dui)照，只(zhi)提(ti)供可以(yi)直接使用的 DNA段(duan)作(zuo)為(wei)陽(yang)性對(dui)照。
2. 標(biao)記 6 個(ge)離心管(guan)，分別(bie)為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯(xin)槍(qiang)頭(tou)分別(bie)加入 45 μL 熒光(guang) PCR 模(mo)板(ban)稀(xi)釋液（用帶芯(xin)槍(qiang)頭(tou)，下同(tong)）。
4. 在(zai) 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照，充(chong)分震(zhen)蕩 1 分鐘，得(de)1×10E7 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照。放(fang)冰上待(dai)用。
5. 換(huan)槍(qiang)頭，在 6 號(hao)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照(上步稀(xi)釋所(suo)得)，充分震(zhen)蕩 1 分鐘，得(de) 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照。放(fang)冰上待(dai)用。
6. 換(huan)槍(qiang)頭，在 5 號(hao)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照到 5 號(hao)管中，充分震(zhen)蕩 1 分鐘，得(de) 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yang)性對(dui)照。放(fang)冰上待(dai)用。
7. 重(zhong)復上面的操作(zuo)直(zhi)到得到 6 個(ge)稀(xi)釋度的陽(yang)性對(dui)照。放(fang)冰上待(dai)用。
註(zhu)：上述樣(yang)品(pin)建(jian)議經(jing)過增菌後(hou)，收集培養物(wu)用於檢(jian)測(ce)。 
二、DNA提(ti)取：
可采用PCR試(shi)劑盒配備(bei)的DNA抽(chou)提(ti)液，按(an)以(yi)下說(shuo)明(ming)進(jin)行(xing)DNA核(he)酸(suan)的粗提(ti)。也可采購(gou)上海澤(ze)葉(ye)生(sheng)物(wu)科技有(you)限公(gong)司(si)生(sheng)產的DNA提(ti)取試劑盒(過柱法(fa)-熒(ying)光(guang)配套)或(huo)其(qi)他(ta)合適(shi)的商業化(hua)產品(pin)，並按(an)照相(xiang)應試劑盒說明(ming)進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo)。
1、液體培(pei)養物(wu)：取液體培(pei)養物(wu)100μL加到1.5mL無菌離心管(guan)中，8000rpm離(li)心3min，盡(jin)量吸(xi)棄(qi)上清(qing)，加(jia)入50μL DNA抽提(ti)液充分混勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心3min，取上清(qing)5μL進(jin)行PCR反應(ying)。
2、固(gu)體培(pei)養物(wu)：挑取單(dan)克(ke)隆菌(jun)落(luo)與(yu)50μL DNA抽(chou)提(ti)液充分混勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心3min，取上清(qing)5μL進(jin)行PCR反應(ying)。
3、糞便(bian)樣品(pin)：挑(tiao)取米粒(li)大(da)小(xiao)糞便(bian)於滅(mie)菌(jun)離心管(guan)中，加入0.5mL生(sheng)理鹽水(shui)，振(zhen)蕩混勻，13000rpm離(li)心3分鐘，棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱中加入50μL DNA抽提(ti)液充分混勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心3min取上清(qing)5μL進(jin)行PCR反應(ying)。
4、其(qi)他(ta)液體標(biao)本(ben)：取標(biao)本(ben)2-3mL，13000rpm離心3min，棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱中加入50μL DNA抽提(ti)液充分混勻，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心3min取上清(qing)5μL進(jin)行PCR反應(ying)。
註(zhu)：陽(yang)性對(dui)照和(he)陰性對照(zhao)為(wei)已經抽(chou)提(ti)好(hao)的核(he)酸(suan)(無需提(ti)取)，直接取5μL加入到反應體(ti)系中即(ji)可。由於(yu)陽(yang)性對(dui)照濃(nong)度較(jiao)高(gao)，建(jian)議在(zai)樣(yang)品(pin)制(zhi)備(bei)區(qu)域加入陽(yang)性對(dui)照。 
實(shi)驗(yan)流程：
1. 整(zheng)個檢(jian)測(ce)過程應嚴(yan)格(ge)按(an)照本(ben)說(shuo)明(ming)書要求(qiu)分別(bie)在試劑準備(bei)區(qu)、樣本(ben)處理區(qu)和(he)PCR擴(kuo)增區(qu)進行操作，各(ge)區(qu)實驗(yan)服(fu)、儀器(qi) 、耗材(cai)應獨(du)立使用，不能混用；實驗(yan)用吸(xi)頭(tou)采用帶濾芯(xin)吸(xi)頭(tou)；樣(yang)本(ben)處理區(qu)應配有(you)生(sheng)物(wu)安全櫃，樣本(ben)處理在生(sheng)物(wu)安全櫃中進行(xing)操(cao)作；三個(ge)區(qu)應該(gai)配有(you)紫外(wai)線殺菌(jun)裝(zhuang)置(zhi)。
2. 為(wei)避(bi)免(mian)RNA降(jiang)解(jie)，樣(yang)本(ben)處理過程應在(zai)0-4℃條件(jian)下操(cao)作，且(qie)完成(cheng)實驗(yan)後(hou)立即(ji)上機檢(jian)測(ce)；樣(yang)本(ben)處理過程中使用的器(qi)具耗(hao)材(cai)應經(jing)過無核(he)酶處理。
3. 每次實驗(yan)應(ying)該(gai)設(she)置陰(yin)、陽(yang)性對(dui)照。
4. 試(shi)劑盒所有(you)試劑在(zai)使用前(qian)應(ying)該(gai)在(zai)常(chang)溫下充(chong)分融(rong)化(hua)混勻，並應(ying)瞬(shun)時(shi)離心。
5. 試劑盒內(nei)所配陰性和(he)陽(yang)性對(dui)照在(zai)壹(yi)次使用前(qian)應(ying)全部轉(zhuan)移至(zhi)標(biao)本(ben)準備(bei)區(qu)，並單(dan)獨(du)存(cun)放。
6. 為(wei)防(fang)止(zhi)熒(ying)光幹(gan)擾(rao)，應(ying)避(bi)免(mian)裸(luo)手直接接觸(chu)PCR反應管(guan)，並應(ying)避(bi)免(mian)在PCR反應(ying)管上進(jin)行(xing)任(ren)何標(biao)記。
7. 儀(yi)器(qi) 擴(kuo)增相關(guan)參數應按(an)照本(ben)說(shuo)明(ming)書相關(guan)要(yao)求(qiu)進(jin)行設(she)置；不同(tong)批(pi)號試劑不能混用。
8. ABI系(xi)列(lie)熒光(guang)定量PCR儀(yi)參數設(she)置中不選(xuan)ROX校正，淬滅(mie)基因(yin)選(xuan)擇None。
9. 實(shi)驗(yan)過程中產品(pin)的廢(fei)棄(qi)物(wu)應該(gai)進(jin)行無害化(hua)處理後(hou)方可丟棄(qi)。
儲存(cun)條件(jian)：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存(cun)方法
1. 血清：使用不含熱(re)原(yuan)和(he)內(nei)毒素(su)的試管(guan)，操(cao)作過程中避(bi)免(mian)任(ren)何細胞(bao)刺(ci)激，收集血液後(hou)，3000 轉(zhuan)離(li)心10 分鐘將(jiang)血清和(he)紅細胞(bao)迅(xun)速(su)小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸(ning)檬酸(suan)鹽或(huo)肝素(su)抗(kang)凝(ning)。3000 轉(zhuan)離(li)心30 分鐘取上清(qing)。
3. 細胞(bao)上清(qing)液：3000 轉(zhuan)離(li)心10 分鐘去(qu)除顆粒(li)和(he)聚(ju)合物(wu)。
4. 組織勻漿：將(jiang)組(zu)織加入適(shi)量生(sheng)理鹽水(shui)搗碎。3000 轉(zhuan)離(li)心10 分鐘取上清(qing)。
5. 保存(cun)：如果(guo)樣(yang)本(ben)收集後(hou)不及(ji)時檢(jian)測(ce)，請按(an)壹(yi)次用量分裝(zhuang)，凍存(cun)於-20℃，避(bi)免(mian)反復凍融(rong)，在(zai)室(shi)溫下解(jie)凍並確(que)保樣品(pin)均(jun)勻(yun)地充分解(jie)凍。
HSCT6 大(da)鼠(shu)肝星狀細胞(bao)鈉1.5水合物(wu)Pantoprazole Sesquihydrate質(zhi)量(liang)規格：>98%,BR

CM-R003大(da)鼠(shu)Ⅱ型肺泡上皮細胞(bao)*培養基100mL鈉1.5水(shui)合物(wu)(標(biao)準品(pin))Pantoprazole Sesquihydrate質(zhi)量(liang)規格：HPLC≥99%，標(biao)準品(pin)

KM3, 人(ren)多發(fa)性骨(gu)髓瘤(liu)細胞(bao)(S)-10-;10-(s)-10-hydroxycamptothecin質(zhi)量(liang)規格：>98%,BR

細胞(bao) 人(ren)腦微血管內(nei)皮細胞(bao)*培養基 100mL10-(標(biao)準品(pin))(s)-10-hydroxycamptothecin質(zhi)量(liang)規格：HPLC>98%,S構型，標(biao)準品(pin)

人(ren)脂肪(fang)微血管內(nei)皮細胞(bao)HAMEC甘草素(su)（消旋(xuan)）Liquiritigenin質(zhi)量(liang)規格：HPLC≥98%，標(biao)準品(pin)
人(ren)惡(e)性色素瘤(liu)細胞(bao);A-375 [A375]賓(bin)雪德拉(la)氏(shi)綠(lv)隱色堿(>98.0%(HPLC)(T))Bindschedler's Green Leuco Base質(zhi)量(liang)規格：>98.0%(HPLC)(T)

RBL-2H3細胞(bao)，白血病細胞(bao) 永生(sheng)化(hua)鼻(bi)咽上皮細胞(bao)系,NP69-SV40T細胞(bao) CL-0232TF-1(人(ren)血液白血病細胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×2雙(shuang)(4-苯基)胺(an)(>98.0%(GC))Bis(4-iodophenyl)amine質(zhi)量(liang)規格：>98.0%(GC)

中國倉(cang)鼠(shu)卵巢(chao)細胞(bao)(亞系(xi)克(ke)隆);CHO-HCV-E21-溴芘(bi)(>94.0%(GC))1-Bromopyrene質(zhi)量(liang)規格：>94.0%(GC)

TGFBI Others Human 人(ren) BIGH3 / BIG-H3 / TGFBI 人(ren)細胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照) 4-溴芘(bi)(>95.0%(GC))4-Bromopyrene質(zhi)量(liang)規格：>95.0%(GC)

肝(gan)動(dong)脈平滑肌(ji)細胞(bao)Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105方(fang)(1ml)1,6-二氨基芘(bi)(>98.0%(HPLC)(N))1,6-Diamipyrene質(zhi)量(liang)規格：>98.0%(HPLC)(N)
MC38小(xiao)鼠(shu)結腸(chang)癌細胞(bao) MC38 mouse colon cancer cells DMEM+10%FBS吲(yin)哚(duo)-4-羧(suo)酸(suan)甲(jia)酯(>98%，BR)質(zhi)量(liang)規格：>98%，BRMethyl indole-4-carboxylate

HBEGF Protein Human 重(zhong)組(zu)人(ren) HBEGF / D 蛋(dan)白甲(jia)基綠(lv)(~65%,BS)質(zhi)量(liang)規格：~65%,BSMethylene green zinc chloride double salt

TE-13(人(ren)食(shi)管(guan)癌細胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 心肌(ji)成(cheng)纖(xian)維細胞(bao)Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105方(fang)(1ml)亞甲(jia)紫3RAX(>90%，BS)質(zhi)量(liang)規格：>90%，BSMethylene violet 3RAX

小鼠(shu)垂體(ti)瘤(liu)細胞(bao);GT1-12-甲(jia)基琥(hu)珀(po)酸(suan)(>98%,BR)質(zhi)量(liang)規格：>98%,BRMethylsuccinic acid

人(ren)表皮微血管內(nei)皮細胞(bao)(HDMEC)( 5×105 )二氫-D-赤(chi)-鞘(qiao)氨醇質(zhi)量(liang)規格：美(mei)國進(jin)口(kou)Dihydro-D-erythro-Sphingosine
草烏(wu)探針法PCR鑒(jian)定試劑盒*EM2 Others Mouse 小鼠(shu) EM2 人(ren)細胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照) 半木(mu)質(zhi)，英(ying)文(wen)名或英(ying)文(wen)縮(suo)寫：Xylan，級(ji)別(bie)：超，98%，規格(ge)：0.25UN

人(ren)表皮色素細胞(bao)-HEM-a2-磺基本(ben)加(jia)醋，水(shui)合 2-Sulfobqnzoic ccid 1963/2/7

DAPK1 Others Human 人(ren) DAPK1 / DAP Kinase 1 (aa 1-363) 桿(gan)狀病毒-昆(kun)蟲細胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照) HexyleneGlycol己(ji)二醇美(mei)國國(guo)家(jia)處方集級透明(ming)無色液體RT不sigma

兔(tu)角(jiao)膜(mo)後(hou)基質(zhi)層成纖維(wei)細胞(bao);