草(cao)豆蔻(kou)探(tan)針(zhen)法(fa)PCR鑒(jian)定(ding)試劑盒(he)保存

儲(chu)存條(tiao)件(jian)：
14℃或－20℃樣(yang)品收集、處(chu)理及(ji)保存方(fang)法(fa)
1. 血(xue)清：使用(yong)不(bu)含熱原和內(nei)毒素(su)的試管，操(cao)作過程中避(bi)免(mian)任(ren)何細胞(bao)刺激(ji)，收(shou)集(ji)血液後(hou)，3000 轉(zhuan)離心10 分(fen)鐘(zhong)將血清和紅(hong)細胞(bao)迅速(su)小心地(di)分(fen)離(li)。
2. 血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬酸(suan)鹽或肝素(su)抗(kang)凝(ning)。3000 轉(zhuan)離心30 分(fen)鐘(zhong)取上(shang)清。
3. 細胞(bao)上(shang)清液：3000 轉(zhuan)離心10 分(fen)鐘(zhong)去除(chu)顆粒(li)和(he)聚(ju)合(he)物。
4. 組(zu)織勻漿：將(jiang)組織加入(ru)適(shi)量生理(li)鹽水(shui)搗(dao)碎(sui)。3000 轉(zhuan)離心10 分(fen)鐘(zhong)取上(shang)清。
5. 保存：如(ru)果(guo)樣(yang)本收集後不(bu)及時檢測(ce)，請按(an)壹(yi)次用(yong)量分(fen)裝(zhuang)，凍(dong)存於-20℃，避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融，在室(shi)溫(wen)下(xia)解凍(dong)並確保樣(yang)品均勻地(di)充分(fen)解(jie)凍(dong)。

特點：
1. 即開即用，用戶(hu)只(zhi)需要提(ti)供病毒樣(yang)品。
2. 根(gen)據(ju)地(di)黃(huang)保守(shou)序(xu)列(lie)設計(ji)的專壹性(xing)引物(wu)，與相關病毒無交(jiao)叉反(fan)應。
3. 靈(ling)敏(min)度(du)可以(yi)達到(dao)幾(ji)百(bai)拷(kao)貝(bei)/反(fan)應。
4. 壹(yi)管式(shi)熒光(guang)定(ding)量 PCR 檢(jian)測(ce)，避(bi)免(mian)後(hou)續(xu)汙(wu)染。
5. 本(ben)試劑盒(he)足夠 50 次(ci) 20μL 反(fan)應體系(xi)的熒光(guang)定(ding)量 PCR。
6. 本(ben)產(chan)品只(zhi)適用(yong)於科(ke)研(yan)，不(bu)能用(yong)於臨床診斷(duan)。

使(shi)用(yong)方法(fa)：
壹(yi)、樣(yang)品采集：
1、食(shi)品樣(yang)品：樣(yang)品的采集(ji)與預(yu)培(pei)養(yang)按照(zhao)樣(yang)品的采集(ji)與預(yu)培(pei)養(yang)按照(zhao)《食(shi)品衛生微生物學檢驗(yan)阪崎腸桿菌檢(jian)驗(yan)要(yao)求進(jin)行。
2、血(xue)液樣(yang)品：用無菌註射(she)器抽(chou)取(qu)受(shou)檢(jian)者靜(jing)脈(mai)血(xue)2mL，註入無(wu)菌EDTA2Na(或檸(ning)檬酸(suan)鈉(na))抗(kang)凝(ning)管，立即混勻。
3、糞便樣(yang)品：取糞便置(zhi)於滅(mie)菌的收集(ji)管中送(song)檢。
4、病竈(zao)部(bu)位(wei)樣(yang)品：取發病部(bu)位(wei)新(xin)鮮滲出物(wu)、粘(zhan)液膿(nong)血送(song)檢。
壹(yi)、稀釋 PCR 陽(yang)性對(dui)照(zhao)（以(yi) 10E2-10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 這(zhe) 6 個 10 倍(bei)稀釋度(du)為(wei)例(li)）
1. 註意(yi)：由於標(biao)準(zhun)品(pin)濃度(du)非常(chang)高，因此下(xia)列(lie)稀釋操(cao)作壹定(ding)要(yao)在獨立的區域進(jin)行，千(qian)萬(wan)不(bu)能汙(wu)染樣(yang)品或本(ben)試劑盒(he)的其(qi)他(ta)成分(fen)）。為(wei)增(zeng)加(jia)產(chan)品穩定(ding)性(xing)和(he)避(bi)免(mian)擴(kuo)散傳染(ran)性病原，本產(chan)品不(bu)提供活體樣(yang)品做陽(yang)性對(dui)照(zhao)，只(zhi)提供可以直(zhi)接(jie)使(shi)用(yong)的 DNA段(duan)作(zuo)為(wei)陽(yang)性對(dui)照(zhao)。
2. 標(biao)記(ji) 6 個離心管，分(fen)別為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶芯槍(qiang)頭(tou)分(fen)別加入(ru) 45 μL 熒(ying)光(guang) PCR 模(mo)板(ban)稀釋液（用(yong)帶芯槍(qiang)頭(tou)，下同）。
4. 在 7 號(hao)管中加入 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)，充分(fen)震蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de)1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)。放(fang)冰上(shang)待(dai)用。
5. 換(huan)槍(qiang)頭，在 6 號(hao)管中加入 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)(上(shang)步(bu)稀釋所(suo)得(de))，充分(fen)震蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)。放(fang)冰上(shang)待(dai)用。
6. 換(huan)槍(qiang)頭，在 5 號(hao)管中加入 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)到(dao) 5 號(hao)管中，充分(fen)震蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E5 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性對(dui)照(zhao)。放(fang)冰上(shang)待(dai)用。
7. 重復上(shang)面(mian)的操(cao)作直(zhi)到(dao)得(de)到(dao) 6 個稀釋度(du)的陽(yang)性對(dui)照(zhao)。放(fang)冰上(shang)待(dai)用。
註：上(shang)述樣(yang)品建議經過增(zeng)菌後(hou)，收(shou)集(ji)培(pei)養(yang)物用(yong)於檢測(ce)。 
二(er)、DNA提(ti)取(qu)：
可(ke)采(cai)用PCR試劑盒(he)配備(bei)的DNA抽(chou)提(ti)液，按(an)以下說(shuo)明進(jin)行DNA核(he)酸(suan)的粗提(ti)。也(ye)可(ke)采購(gou)上(shang)海(hai)澤(ze)葉生(sheng)物(wu)科(ke)技(ji)有限公司生產(chan)的DNA提(ti)取(qu)試劑盒(he)(過(guo)柱法(fa)-熒(ying)光(guang)配套)或其(qi)他(ta)合(he)適的商(shang)業化產(chan)品，並按(an)照(zhao)相應試劑盒(he)說(shuo)明進(jin)行操(cao)作。
1、液體培(pei)養(yang)物：取(qu)液體培(pei)養(yang)物100μL加(jia)到(dao)1.5mL無(wu)菌離(li)心管中，8000rpm離(li)心3min，盡(jin)量吸(xi)棄(qi)上(shang)清，加入(ru)50μL DNA抽(chou)提(ti)液充分(fen)混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心3min，取(qu)上(shang)清5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
2、固(gu)體培(pei)養(yang)物：挑取單(dan)克(ke)隆菌落與50μL DNA抽(chou)提(ti)液充分(fen)混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心3min，取(qu)上(shang)清5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
3、糞便樣(yang)品：挑取米(mi)粒(li)大小糞便於滅(mie)菌離(li)心管中，加入0.5mL生(sheng)理(li)鹽水(shui)，振(zhen)蕩(dang)混勻，13000rpm離(li)心3分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)上(shang)清，沈(chen)澱中(zhong)加入50μL DNA抽(chou)提(ti)液充分(fen)混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心3min取(qu)上(shang)清5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
4、其(qi)他(ta)液體標(biao)本(ben)：取(qu)標(biao)本(ben)2-3mL，13000rpm離(li)心3min，棄(qi)上(shang)清，沈(chen)澱中(zhong)加入50μL DNA抽(chou)提(ti)液充分(fen)混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心3min取(qu)上(shang)清5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
註：陽(yang)性對(dui)照(zhao)和(he)陰(yin)性對(dui)照(zhao)為(wei)已(yi)經抽(chou)提(ti)好(hao)的核酸(suan)(無(wu)需提取(qu))，直(zhi)接(jie)取(qu)5μL加(jia)入(ru)到(dao)反(fan)應體系(xi)中(zhong)即可。由於陽(yang)性對(dui)照(zhao)濃(nong)度(du)較高，建議(yi)在樣(yang)品制(zhi)備(bei)區域加入陽(yang)性對(dui)照(zhao)。 
HMGB1 Others Human 人(ren) HMGB1 / HMG1 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照(zhao)) 血(xue)紅(hong)素(su)(>95%,BR)Hematin質(zhi)量規格：>95%,BR

敘(xu)利(li)亞倉(cang)鼠皮(pi)膚(fu)細胞(bao);GH-S1聚(ju)乙二(er)醇800PEG 800質(zhi)量規格：BR

OPTN Others Human 人(ren) Optineurin / OPTN 桿(gan)狀病毒-昆(kun)蟲(chong)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照(zhao)) 炔雌(ci);環(huan)戊Quinestrol質(zhi)量規格：USP

卵(luan)巢微(wei)血(xue)管內皮(pi)細胞(bao)Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105方(fang)(1ml)1酸(suan)二(er)酯(zhi)酶 (比(bi)活(huo)度(du)：>20 U/mg，BC)Phosphodiesterase I from Crotalus adamanteus Venom質(zhi)量規格：比(bi)活(huo)度(du)：>20 U/mg，BC

人(ren)臍(qi)靜(jing)脈(mai)平滑(hua)肌(ji)細胞(bao) 人(ren)胚肺(fei)細胞(bao)，NCI-H1563[H1563]細胞(bao) MLTC-1(間(jian)質(zhi)細胞(bao)瘤(liu)細胞(bao))化丙啶(ding)(>95% (HPLC),BC)Propidium iodide質(zhi)量規格：>95% (HPLC),BC
HA Others H9N2 甲(jia)型流(liu)感(gan) H9N2 (A/Hong Kong/1073/99) 血(xue)凝(ning)素(su) (Hemagglutinin / HA) 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照(zhao)) 6α-羥(qiang)基(ji)6α-Hydroxy Paclitaxel質(zhi)量規格：美國進(jin)口

人(ren)惡性(xing)多(duo)發性(xing)畸(ji)胎瘤(liu)細胞(bao);ERA-2α-腺(xian)苷(gan)α-Adenosine 質(zhi)量規格：美國進(jin)口

Spike Others Human coronavirus 人(ren) spike glycoprotein (aa 1-760) 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照(zhao)) 腺(xian)苷(gan) 3’-單(dan)1酸(suan)鈉(na)鹽Adenosine 3'-monophosphate  salt 質(zhi)量規格：美國進(jin)口

FaDu 人(ren)咽鱗癌(ai)細胞(bao)腺(xian)苷(gan) 3',5'-二(er)1酸(suan)鈉(na)鹽Adenosine 3',5'-diphosphate  salt 質(zhi)量規格：美國進(jin)口

Caco-2人(ren)結(jie)直(zhi)腸腺(xian)癌(ai)細胞(bao) Caco-2 human colorectal adenocarcinoma cells MEM+20% FBS腺(xian)苷(gan) 2',5'-二(er)1酸(suan)鈉(na)鹽Adenosine 2',5'-diphosphate  salt 質(zhi)量規格：美國進(jin)口
人(ren)腦(nao)動(dong)脈血(xue)管平滑(hua)肌(ji)細胞(bao)*培(pei)養(yang)基 100mL潮(chao)黴(mei)素(su)B(羅(luo)氏原裝(zhuang))Hygromycin B質(zhi)量規格：羅氏原裝(zhuang),濃(nong)度(du)50mg/ml

COS-6細胞(bao)，非洲綠(lv)猴腎(shen)細胞(bao) A375(人(ren)類惡性(xing)色(se)素(su)瘤(liu)) 中(zhong)國(guo)倉(cang)鼠卵(luan)巢細胞(bao)(亞(ya)系(xi)克隆);DUKXB11 carrying pDEF202-hTPO-P1芹(qin)菜(cai)苷(gan); 芹(qin)黃(huang)苷(gan)Apiin 質(zhi)量規格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

EFNA5 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋(dan)白(bai) (Fc 標(biao)簽)(Fc 標(biao)簽)柯(ke)伊利(li)素(su)-7-O-葡(pu)萄糖(tang)苷(gan),野(ye)決(jue)明苷(gan)Chrysoeriol 7-O-glucoside質(zhi)量規格：HPLC≥97%，標(biao)準(zhun)品(pin)

BC-021(人(ren)癌(ai)細胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 綠(lv)色(se)熒光(guang)蛋白標(biao)記(ji)小鼠子(zi)細胞(bao);U14-GFP山(shan)柰酚-3-O-蕓(yun)香(xiang)糖苷(gan)(標(biao)準(zhun)品(pin))Kaempferol-3-O-rutinoside質(zhi)量規格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

人(ren)間(jian)充質(zhi)幹細胞(bao)-肝臟(zang)總(zong)RNAHMSC-hp NA鈉(na)壹(yi)水物(wu)Pantoprazole 質(zhi)量規格：>98%,BR
草(cao)豆蔻(kou)探(tan)針(zhen)法(fa)PCR鑒(jian)定(ding)試劑盒(he)保存腦(nao)動(dong)脈血(xue)管內皮(pi)細胞(bao)Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105方(fang)(1ml)wo7iumBORATEBUFFER硼(peng)酸(suan)鈉(na)緩(huan)沖(chong)液超(chao)級白色(se)精(jing)細結晶粉末RTsigma

AIM2 Others Human 人(ren) AIM2 桿(gan)狀病毒-昆(kun)蟲(chong)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照(zhao)) 3-肖(xiao)基(ji)本(ben)安(an)(易(yi)制(zhi)暴(bao)) 3-nitnocnilinq 1999-9-

小鼠垂(chui)體瘤(liu)細胞(bao)(分(fen)泌(mi)促生長(chang)激素(su)分(fen)泌(mi)激素(su));AtT-20谷(gu)草(cao)轉(zhuan)酶測(ce)試盒(he)10個

293T/17[HEK 293T/17]細胞(bao)，人胚腎(shen)細胞(bao) 人(ren)膽(dan)管細胞(bao)型肝癌(ai)細胞(bao),HCCC-9810細胞(bao)
實(shi)驗(yan)流(liu)程：
1. 整個檢測(ce)過程應嚴格按照本說(shuo)明書要求分(fen)別在試劑準(zhun)備(bei)區、樣(yang)本處(chu)理區(qu)和PCR擴(kuo)增(zeng)區進(jin)行操(cao)作，各區實(shi)驗(yan)服、儀器 、耗(hao)材應獨立使用，不(bu)能混用；實(shi)驗(yan)用吸(xi)頭(tou)采(cai)用(yong)帶濾(lv)芯(xin)吸(xi)頭(tou)；樣(yang)本處(chu)理區(qu)應配有生物(wu)安(an)全(quan)櫃(gui)，樣(yang)本處(chu)理在生(sheng)物(wu)安(an)全(quan)櫃(gui)中(zhong)進(jin)行操(cao)作；三(san)個區應該配有(you)紫外線殺菌裝(zhuang)置(zhi)。
2. 為(wei)避(bi)免(mian)RNA降(jiang)解(jie)，樣(yang)本處(chu)理過(guo)程應在0-4℃條(tiao)件(jian)下(xia)操(cao)作，且完成實(shi)驗(yan)後立即上(shang)機(ji)檢測(ce)；樣(yang)本處(chu)理過(guo)程中使(shi)用的器具耗(hao)材應經過無(wu)核(he)酶處(chu)理。

3. 每(mei)次(ci)實(shi)驗(yan)應該設置(zhi)陰(yin)、陽(yang)性對(dui)照(zhao)。
4. 試劑盒(he)所有(you)試劑在使(shi)用(yong)前(qian)應該在常(chang)溫下(xia)充分(fen)融化混勻，並應瞬時離心。
5. 試劑盒(he)內所(suo)配(pei)陰(yin)性和(he)陽(yang)性對(dui)照(zhao)在壹(yi)次(ci)使(shi)用(yong)前應全部(bu)轉(zhuan)移至標(biao)本(ben)準(zhun)備(bei)區，並單(dan)獨存放(fang)。
6. 為(wei)防止(zhi)熒(ying)光幹擾，應避(bi)免(mian)裸手(shou)直(zhi)接(jie)接(jie)觸PCR反(fan)應管，並應避(bi)免(mian)在PCR反(fan)應管上(shang)進(jin)行任(ren)何標(biao)記(ji)。
7. 儀(yi)器 擴(kuo)增(zeng)相關參(can)數(shu)應按照本說(shuo)明書相關要(yao)求進(jin)行設(she)置(zhi)；不(bu)同批號(hao)試劑不(bu)能混用。
8. ABI系(xi)列(lie)熒光(guang)定(ding)量PCR儀(yi)參(can)數(shu)設置(zhi)中(zhong)不(bu)選(xuan)ROX校正，淬(cui)滅(mie)基因選(xuan)擇(ze)None。
9. 實(shi)驗(yan)過程中產(chan)品的廢(fei)棄(qi)物應該進(jin)行無(wu)害(hai)化處(chu)理後(hou)方可丟棄(qi)。