制川(chuan)烏(wu)探(tan)針(zhen)法PCR鑒定(ding)試(shi)劑盒(he)保存

實(shi)驗(yan)流程：
1. 整個(ge)檢測(ce)過(guo)程應嚴格按照本(ben)說明書要(yao)求分(fen)別(bie)在試(shi)劑準(zhun)備區(qu)、樣(yang)本(ben)處理區(qu)和PCR擴增(zeng)區(qu)進行操作，各(ge)區(qu)實(shi)驗(yan)服、儀器(qi) 、耗材應獨立使(shi)用，不能混用；實(shi)驗(yan)用吸(xi)頭采用帶(dai)濾芯(xin)吸(xi)頭；樣(yang)本(ben)處理區(qu)應配有生物安全櫃(gui)，樣(yang)本(ben)處理在生物安全櫃(gui)中(zhong)進(jin)行操作；三(san)個(ge)區(qu)應該(gai)配有紫外線殺(sha)菌(jun)裝置(zhi)。
2. 為避免(mian)RNA降(jiang)解，樣(yang)本(ben)處理過程應在0-4℃條件下(xia)操(cao)作，且(qie)完(wan)成(cheng)實(shi)驗(yan)後立即上(shang)機檢測(ce)；樣(yang)本(ben)處理過程中使(shi)用的(de)器(qi)具耗材應經(jing)過無核酶(mei)處理。
3. 每次(ci)實(shi)驗(yan)應該(gai)設置陰(yin)、陽(yang)性對(dui)照。
4. 試(shi)劑盒(he)所有試(shi)劑在(zai)使(shi)用前應該(gai)在常(chang)溫下充(chong)分(fen)融(rong)化(hua)混(hun)勻(yun)，並(bing)應瞬時(shi)離心。
5. 試(shi)劑盒(he)內(nei)所配陰(yin)性和陽(yang)性(xing)對照在(zai)壹次(ci)使(shi)用前應全部(bu)轉(zhuan)移(yi)至(zhi)標(biao)本(ben)準(zhun)備區(qu)，並單獨存放。
6. 為防止(zhi)熒(ying)光(guang)幹(gan)擾，應避免(mian)裸(luo)手(shou)直(zhi)接(jie)接(jie)觸PCR反(fan)應管，並(bing)應避免(mian)在PCR反(fan)應管上(shang)進(jin)行任(ren)何(he)標記。
7. 儀器(qi) 擴增(zeng)相(xiang)關(guan)參數(shu)應按照本(ben)說明書相(xiang)關(guan)要求(qiu)進行設置；不同批(pi)號(hao)試(shi)劑不能混用。
8. ABI系(xi)列熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR儀參(can)數(shu)設(she)置(zhi)中(zhong)不選ROX校正，淬(cui)滅(mie)基(ji)因(yin)選擇(ze)None。
9. 實(shi)驗(yan)過程中產(chan)品的廢棄(qi)物應該(gai)進行無害化處理後方(fang)可丟(diu)棄(qi)。

特點：
1. 即開即(ji)用，用戶(hu)只需(xu)要(yao)提供病毒樣(yang)品。
2. 根據(ju)地(di)黃保(bao)守序(xu)列(lie)設計(ji)的專(zhuan)壹性(xing)引(yin)物，與相(xiang)關(guan)病毒(du)無交(jiao)叉(cha)反(fan)應。
3. 靈敏度可以達(da)到(dao)幾(ji)百拷貝(bei)/反(fan)應。
4. 壹管式(shi)熒(ying)光(guang)定(ding)量 PCR 檢測(ce)，避免(mian)後續(xu)汙染。
5. 本(ben)試(shi)劑盒(he)足夠(gou) 50 次(ci) 20μL 反(fan)應體(ti)系(xi)的熒(ying)光(guang)定(ding)量 PCR。
6. 本(ben)產(chan)品只適(shi)用於(yu)科研(yan)，不能用於(yu)臨(lin)床診斷(duan)。
使(shi)用方(fang)法：
壹、樣(yang)品采集(ji)：
1、食品樣(yang)品：樣(yang)品的(de)采集(ji)與(yu)預培養按(an)照樣(yang)品的(de)采集(ji)與(yu)預培養按(an)照《食品衛(wei)生微生物學檢驗(yan)阪崎(qi)腸桿菌(jun)檢驗(yan)要求(qiu)進行。
2、血液(ye)樣(yang)品：用無(wu)菌(jun)註射器(qi)抽(chou)取(qu)受檢者(zhe)靜脈血(xue)2mL，註入無(wu)菌(jun)EDTA2Na(或檸檬(meng)酸(suan)鈉(na))抗凝管，立即混(hun)勻(yun)。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品：取(qu)糞(fen)便(bian)置於(yu)滅(mie)菌(jun)的收(shou)集(ji)管中(zhong)送(song)檢。
4、病竈部(bu)位(wei)樣(yang)品：取(qu)發病部位新鮮(xian)滲(shen)出(chu)物、粘液(ye)膿(nong)血送(song)檢。
壹、稀釋 PCR 陽性對(dui)照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(ge) 10 倍稀釋度為例(li)）
1. 註意：由(you)於(yu)標(biao)準(zhun)品濃(nong)度非(fei)常(chang)高(gao)，因此下(xia)列稀釋操作壹(yi)定(ding)要在獨立的區(qu)域進(jin)行，千萬(wan)不能汙染樣(yang)品或(huo)本(ben)試(shi)劑盒(he)的其他成(cheng)分(fen)）。為增(zeng)加產品(pin)穩(wen)定(ding)性和避免(mian)擴散傳染性(xing)病(bing)原，本(ben)產(chan)品不提供活體(ti)樣(yang)品做(zuo)陽性對照，只(zhi)提供可以直(zhi)接(jie)使(shi)用的(de) DNA段(duan)作為陽(yang)性(xing)對照。
2. 標記 6 個(ge)離(li)心管，分(fen)別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭分(fen)別(bie)加入 45 μL 熒(ying)光(guang) PCR 模(mo)板稀釋液(ye)（用帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭，下同）。
4. 在 7 號(hao)管中(zhong)加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性(xing)對(dui)照，充(chong)分(fen)震蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de)1×10E7 拷貝/μL 的陽性(xing)對(dui)照。放(fang)冰(bing)上待用。
5. 換槍(qiang)頭，在 6 號(hao)管中(zhong)加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性(xing)對(dui)照(上步稀(xi)釋所得(de))，充(chong)分(fen)震蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E6 拷貝/μL 的陽性(xing)對(dui)照。放(fang)冰(bing)上待用。
6. 換槍(qiang)頭，在 5 號(hao)管中(zhong)加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性(xing)對(dui)照到(dao) 5 號(hao)管中(zhong)，充(chong)分(fen)震蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E5 拷貝/μL 的陽性(xing)對(dui)照。放(fang)冰(bing)上待用。
7. 重(zhong)復(fu)上面(mian)的操(cao)作直(zhi)到(dao)得(de)到 6 個(ge)稀(xi)釋度的(de)陽(yang)性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上待用。
註：上述(shu)樣(yang)品建(jian)議經(jing)過增(zeng)菌(jun)後，收(shou)集(ji)培養物用於(yu)檢測(ce)。 
二、DNA提取(qu)：
可采用PCR試(shi)劑盒(he)配備(bei)的DNA抽(chou)提液(ye)，按(an)以下(xia)說明進行DNA核酸的(de)粗提。也可采購(gou)上海澤葉生物科技(ji)有限公司生產的(de)DNA提取(qu)試(shi)劑盒(he)(過柱法-熒(ying)光(guang)配(pei)套(tao))或其他合適(shi)的(de)商(shang)業化產(chan)品，並(bing)按(an)照相(xiang)應試(shi)劑盒(he)說明進行操作。
1、液(ye)體(ti)培養物：取(qu)液(ye)體(ti)培養物100μL加到1.5mL無菌(jun)離心管中(zhong)，8000rpm離心3min，盡(jin)量(liang)吸(xi)棄(qi)上清，加入50μL DNA抽(chou)提液(ye)充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心3min，取(qu)上(shang)清(qing)5μL進行PCR反(fan)應。
2、固體(ti)培養物：挑取(qu)單克(ke)隆菌(jun)落與(yu)50μL DNA抽(chou)提液(ye)充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心3min，取(qu)上(shang)清(qing)5μL進行PCR反(fan)應。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品：挑取(qu)米(mi)粒(li)大(da)小糞(fen)便(bian)於(yu)滅(mie)菌(jun)離心管中(zhong)，加入0.5mL生理鹽水(shui)，振蕩(dang)混(hun)勻(yun)，13000rpm離心3分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)上清，沈澱中加入50μL DNA抽(chou)提液(ye)充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心3min取(qu)上(shang)清(qing)5μL進行PCR反(fan)應。
4、其他液(ye)體(ti)標本(ben)：取(qu)標(biao)本(ben)2-3mL，13000rpm離心3min，棄(qi)上清，沈澱中加入50μL DNA抽(chou)提液(ye)充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心3min取(qu)上(shang)清(qing)5μL進行PCR反(fan)應。
註：陽性(xing)對(dui)照和陰(yin)性(xing)對照為已(yi)經(jing)抽(chou)提好的核酸(無需提取(qu))，直(zhi)接(jie)取(qu)5μL加入到(dao)反(fan)應體(ti)系(xi)中即(ji)可。由(you)於(yu)陽(yang)性對照濃(nong)度較(jiao)高(gao)，建議在樣(yang)品制(zhi)備區(qu)域加入陽(yang)性(xing)對照。 
小耳(er)豬(zhu)肺細胞;SEP-L1女貞(zhen)苷(gan)（標(biao)準(zhun)品）Ligustroflavone質量規(gui)格：HPLC≥98%，標準(zhun)品

A-427細胞，人肺癌細胞 小鼠成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞,L929細胞 CM-R103大(da)鼠腦(nao)靜脈血(xue)管平(ping)滑(hua)肌(ji)細胞*培養基(ji)100mL夏佛(fo)塔苷(gan)（標(biao)準(zhun)品）Schaftoside質量規(gui)格：HPLC≥98%，標準(zhun)品

RM-1(小鼠前列腺(xian)癌細胞) 5×106cells/瓶×2二氫小檗(bo)堿（標準(zhun)品）9,10-Dimethoxy-2,3-(methylenedioxy)-13,13a-didehydrob質量規(gui)格：HPLC≥98%，標準(zhun)品

Gibco 10486025 EXPRESS FIVE SFM..昆蟲(chong)培養基(ji) 1000ml桔紅素(su);桔皮素(su)(標準(zhun)品)Tangeretin質量規(gui)格：HPLC≥98%，標準(zhun)品

人支氣(qi)管上(shang)皮(pi)細胞cDNAHBEpiC cDNA桔紅素(su);桔皮素(su)Tangeretin質量規(gui)格：HPLC≥98%,BR
人內(nei)膜腺癌(ai)細胞;HEC-1-B2,3,6,7,10,11-六(liu)乙酰(xian)氧基(ji)三(san)亞苯(>98.0%(HPLC))2,3,6,7,10,11-Hexaacetoxytriphenylene質量規(gui)格：>98.0%(HPLC)

SiHa細胞，子(zi)細胞 人鼻(bi)咽(yan)癌(ai)母(mu)系(xi)細胞,CNE-2Z細胞 CL-0240V79(倉鼠肺細胞)5×106cells/瓶×22,3,6,7,10,11-六(liu)溴(xiu)三(san)亞苯(>98.0%(T))2,3,6,7,10,11-Hexabromotriphenylene質量規(gui)格：>98.0%(T)

中國(guo)倉(cang)鼠卵巢細胞(亞系(xi)克隆);CHO-HCV-p71-溴(xiu)-4-正辛基(ji)苯(>90.0%(GC))1-Bromo-4-n-octylbenzene質量規(gui)格：>90.0%(GC)

FIGF Others Human 人 VEGF-D / VEGFD / FIGF 人細胞裂解液(ye) (陽性對(dui)照) 1-溴(xiu)-4-癸基(ji)苯(>88.0%(GC))1-Bromo-4-decylbenzene質量規(gui)格：>88.0%(GC)

肺血管平(ping)滑(hua)肌(ji)細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)1-溴(xiu)-4-十二烷(wan)基(ji)苯(>90.0%(GC))1-Bromo-4-dodecylbenzene質量規(gui)格：>90.0%(GC)
LYVE1 Others Mouse 小鼠 LYVE1 / LYVE-1 人細胞裂解液(ye) (陽性對(dui)照) 舒馬曲(qu)坦-d6琥(hu)珀酸(suan)鹽(yan)質(zhi)量規格：美(mei)國(guo)進(jin)口(kou)Sumatriptan-d6 Succinate

大(da)鼠肺大(da)靜脈平(ping)滑肌(ji)細胞*培養基(ji) 100mL雙氯芬(fen)酸甲酯(zhi)質量規格：美(mei)國(guo)進(jin)口(kou)Diclofenac Methyl Ester

FRhK-4細胞，恒(heng)河猴(hou)胚(pei)腎(shen)細胞 EB-3 [EB3](人樣(yang)Butt瘤細胞) CM-H026人內(nei)皮細胞*培養基(ji)100mL雙氯芬(fen)酸酰胺質量規(gui)格：美(mei)國(guo)進(jin)口(kou)Diclofenac Amide

BTC Protein Human 重(zhong)組(zu)人(ren) BTC / Betacellulin 蛋白(bai)芴(wu)甲(jia)氧(yang)羰(tang)基(ji)-質量規(gui)格：美(mei)國(guo)進(jin)口(kou)Fmoc-Gabapentin

MKN45(人胃癌(ai)細胞) 5×106cells/瓶×2 皮下脂(zhi)肪(fang)細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)舒巴坦酸(suan)(標準(zhun)品)質量規(gui)格：≥98%,標準(zhun)品Sulbactam Acid
制川(chuan)烏(wu)探(tan)針(zhen)法PCR鑒定(ding)試(shi)劑盒(he)保存U-2 OS細胞，骨肉(rou)瘤細胞 系(xi),KMB-17細胞 小鼠胚(pei)胎(tai)成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞;NIH/3T3膠(jiao)原酶(mei)shēng huà shì jì容量(liang)：25克

小鼠T瘤細胞(雞(ji)OVA基(ji)因(yin)修飾);E.G7-OVA2,3-環氧炳(bing)基(ji)-4-氧基(ji)本(ben)基(ji)迷(mi) 2,3-qPOXYPROPYL-4-MqTHOXYPHqNYL qtqr 11-94-1

FZD1 Others Mouse 小鼠 FZD1 人細胞裂解液(ye) (陽性對(dui)照) 透析袋3500shēng huà shì jì容量(liang)：1000u

人脈絡叢成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞HCPF癸二酸(suan)二丁(ding)酯(zhi)sh
儲存條件(jian)：
14℃或－20℃樣(yang)品收(shou)集、處理及保存方法
1. 血清：使(shi)用不含熱(re)原和內(nei)毒素的(de)試(shi)管，操(cao)作過(guo)程中避免(mian)任(ren)何(he)細胞刺激(ji)，收(shou)集血液(ye)後，3000 轉(zhuan)離(li)心10 分(fen)鐘(zhong)將血清和紅(hong)細胞迅速小心地分(fen)離(li)。
2. 血漿：EDTA、檸檬(meng)酸(suan)鹽(yan)或肝(gan)素(su)抗凝。3000 轉(zhuan)離(li)心30 分(fen)鐘(zhong)取(qu)上(shang)清(qing)。
3. 細胞上清液(ye)：3000 轉(zhuan)離(li)心10 分(fen)鐘(zhong)去(qu)除顆(ke)粒和聚(ju)合(he)物。
4. 組(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)：將組(zu)織(zhi)加入適(shi)量(liang)生理鹽水(shui)搗(dao)碎。3000 轉(zhuan)離(li)心10 分(fen)鐘(zhong)取(qu)上(shang)清(qing)。
5. 保存：如果樣(yang)本(ben)收(shou)集後不及時(shi)檢測(ce)，請按壹(yi)次(ci)用量(liang)分(fen)裝(zhuang)，凍(dong)存於(yu)-20℃，避免(mian)反(fan)復(fu)凍融(rong)，在室(shi)溫下解凍(dong)並確(que)保(bao)樣(yang)品均(jun)勻(yun)地(di)充(chong)分(fen)解(jie)凍(dong)。