垂盆草探針(zhen)法PCR鑒(jian)定試劑盒*

儲存條(tiao)件：
14℃或－20℃樣品(pin)收集(ji)、處(chu)理(li)及(ji)保存方法
1. 血清：使用不含熱(re)原和(he)內毒素的(de)試管，操作(zuo)過(guo)程中避免任(ren)何細胞(bao)刺(ci)激(ji)，收集(ji)血(xue)液後(hou)，3000 轉離(li)心10 分鐘(zhong)將(jiang)血清和紅(hong)細(xi)胞迅(xun)速小心(xin)地分離(li)。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或(huo)肝素抗(kang)凝。3000 轉離(li)心30 分鐘(zhong)取(qu)上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離(li)心10 分鐘(zhong)去除顆(ke)粒(li)和聚(ju)合(he)物(wu)。
4. 組織勻(yun)漿：將(jiang)組(zu)織加(jia)入適(shi)量生(sheng)理(li)鹽水(shui)搗(dao)碎(sui)。3000 轉離(li)心10 分鐘(zhong)取(qu)上清。
5. 保存：如果(guo)樣(yang)本收集(ji)後(hou)不及(ji)時(shi)檢測，請按(an)壹(yi)次用量(liang)分裝，凍存於(yu)-20℃，避免反復(fu)凍融，在(zai)室(shi)溫下(xia)解凍並確(que)保樣品(pin)均勻(yun)地充分解(jie)凍。

特(te)點：
1. 即(ji)開(kai)即(ji)用，用戶只(zhi)需(xu)要(yao)提供病毒樣品(pin)。
2. 根(gen)據(ju)地(di)黃(huang)保守序(xu)列設計(ji)的專壹(yi)性(xing)引物，與(yu)相(xiang)關(guan)病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以(yi)達(da)到幾百拷貝/反應。
4. 壹(yi)管式熒(ying)光定量(liang) PCR 檢測，避免後(hou)續汙(wu)染。
5. 本試劑盒足夠(gou) 50 次 20μL 反應體(ti)系的(de)熒(ying)光定量(liang) PCR。
6. 本產品(pin)只(zhi)適(shi)用於(yu)科(ke)研(yan)，不能用於(yu)臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷(duan)。

使用方(fang)法：
壹(yi)、樣(yang)品(pin)采集(ji)：
1、食品(pin)樣品(pin)：樣品(pin)的采(cai)集(ji)與(yu)預培養按(an)照樣品(pin)的采(cai)集(ji)與(yu)預培養按(an)照《食品(pin)衛生(sheng)微生(sheng)物(wu)學(xue)檢驗阪(ban)崎(qi)腸桿菌(jun)檢驗要(yao)求進(jin)行。
2、血液樣品(pin)：用無菌(jun)註射(she)器(qi)抽取(qu)受(shou)檢者靜(jing)脈(mai)血(xue)2mL，註入無菌(jun)EDTA2Na(或檸檬酸鈉(na))抗凝管，立即(ji)混(hun)勻(yun)。
3、糞(fen)便樣品(pin)：取(qu)糞(fen)便置(zhi)於(yu)滅(mie)菌的收集(ji)管中送(song)檢。
4、病竈(zao)部位樣品(pin)：取(qu)發病部位新鮮滲(shen)出物(wu)、粘(zhan)液膿血送(song)檢。
壹(yi)、稀(xi)釋 PCR 陽性(xing)對(dui)照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀(xi)釋度為(wei)例(li)）
1. 註意：由(you)於(yu)標準(zhun)品(pin)濃度非(fei)常高，因此(ci)下(xia)列稀(xi)釋操作(zuo)壹(yi)定要(yao)在(zai)獨(du)立的(de)區域進(jin)行，千(qian)萬(wan)不能汙(wu)染樣(yang)品(pin)或本試劑盒的其他成分）。為(wei)增(zeng)加(jia)產品(pin)穩(wen)定性(xing)和避免擴散傳(chuan)染(ran)性(xing)病原(yuan)，本產品(pin)不提供活體(ti)樣(yang)品(pin)做(zuo)陽(yang)性(xing)對(dui)照，只(zhi)提供可以(yi)直(zhi)接(jie)使用的(de) DNA段作(zuo)為(wei)陽性(xing)對(dui)照。
2. 標記(ji) 6 個離(li)心管，分別(bie)為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶(dai)芯(xin)槍頭(tou)分別(bie)加(jia)入 45 μL 熒(ying)光 PCR 模板稀(xi)釋液（用帶(dai)芯(xin)槍頭(tou)，下(xia)同）。
4. 在 7 號管中加(jia)入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性(xing)對(dui)照，充分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得(de)1×10E7 拷貝/μL 的陽性(xing)對(dui)照。放冰上待(dai)用。
5. 換槍頭(tou)，在(zai) 6 號管中加(jia)入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性(xing)對(dui)照(上步稀(xi)釋所得)，充分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得(de) 1×10E6 拷貝/μL 的陽性(xing)對(dui)照。放冰上待(dai)用。
6. 換槍頭(tou)，在(zai) 5 號管中加(jia)入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性(xing)對(dui)照到 5 號管中，充分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得(de) 1×10E5 拷貝/μL 的陽性(xing)對(dui)照。放冰上待(dai)用。
7. 重復(fu)上面的操(cao)作(zuo)直到得(de)到 6 個稀(xi)釋度的陽(yang)性(xing)對(dui)照。放冰上待(dai)用。
註：上述樣品(pin)建(jian)議(yi)經過(guo)增(zeng)菌(jun)後(hou)，收集(ji)培養物用於(yu)檢測。 
二、DNA提取(qu)：
可采用PCR試劑盒配(pei)備(bei)的DNA抽提液，按(an)以(yi)下(xia)說明進(jin)行DNA核酸的(de)粗(cu)提。也可采(cai)購上海(hai)澤(ze)葉生(sheng)物(wu)科(ke)技有限(xian)公(gong)司(si)生(sheng)產的(de)DNA提取(qu)試劑盒(過(guo)柱法-熒(ying)光配(pei)套(tao))或其他合(he)適(shi)的(de)商(shang)業化(hua)產品(pin)，並按(an)照相應試劑盒說明進(jin)行操(cao)作(zuo)。
1、液體培養物：取(qu)液體培養物100μL加(jia)到1.5mL無菌(jun)離(li)心管中，8000rpm離(li)心3min，盡量吸棄(qi)上清，加(jia)入50μL DNA抽提液充分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離(li)心3min，取(qu)上清5μL進(jin)行PCR反應。
2、固體培養物：挑取(qu)單克隆(long)菌(jun)落(luo)與(yu)50μL DNA抽提液充分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離(li)心3min，取(qu)上清5μL進(jin)行PCR反應。
3、糞(fen)便樣品(pin)：挑取(qu)米(mi)粒(li)大小(xiao)糞(fen)便於(yu)滅(mie)菌離(li)心管中，加(jia)入0.5mL生(sheng)理(li)鹽水(shui)，振蕩(dang)混勻(yun)，13000rpm離(li)心3分鐘(zhong)，棄(qi)上清，沈澱中加(jia)入50μL DNA抽提液充分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離(li)心3min取(qu)上清5μL進(jin)行PCR反應。
4、其他液體標本：取(qu)標本2-3mL，13000rpm離(li)心3min，棄(qi)上清，沈澱中加(jia)入50μL DNA抽提液充分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離(li)心3min取(qu)上清5μL進(jin)行PCR反應。
註：陽性(xing)對(dui)照和陰(yin)性(xing)對(dui)照為(wei)已經抽提好的核酸(無需(xu)提取(qu))，直接取(qu)5μL加(jia)入到(dao)反應體(ti)系中即(ji)可(ke)。由(you)於(yu)陽(yang)性(xing)對(dui)照濃度較高，建(jian)議(yi)在樣品(pin)制備(bei)區域加(jia)入陽(yang)性(xing)對(dui)照。 
腎近(jin)曲(qu)管狀上皮(pi)細(xi)胞(bao)Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)(分析(xi)標準(zhun)品(pin),pestizides≤1 ppm) sulfate anhydrous質量規(gui)格(ge)：分析(xi)標準(zhun)品(pin),pestizides≤1 ppm

白鰱尾(wei)鰭(qi)細(xi)胞(bao)系;SCF 人成纖(xian)維(wei)細胞，Hs 578T細胞 Acc-3(涎腺腺(xian)樣囊(nang)性(xing)癌(ai)細胞(bao))甲嘧磺隆(long)(標準(zhun)品(pin))Sulfometuron-methyl質量規(gui)格(ge)：分析(xi)標準(zhun)品(pin)

人腎上腺皮(pi)質癌(ai)細胞(bao);SW-13西草凈(jing)(分析(xi)標準(zhun)品(pin),97%)Simetryne質量規(gui)格(ge)：分析(xi)標準(zhun)品(pin),97%

GFRA3 Others Human 人 GFRA3 / GFR-alpha-3 人細胞(bao)裂解液 (陽性(xing)對(dui)照) 喹禾(he)靈(分析(xi)標準(zhun)品(pin),96%)Quizalofop-ethyl質量規(gui)格(ge)：分析(xi)標準(zhun)品(pin),96%

雙位點HC-kit受(shou)體細(xi)胞(bao)株(zhu);DMF7精(jing)喹(kui)禾(he)靈(分析(xi)標準(zhun)品(pin)，98%)Quizalofop-p-ethyl質量規(gui)格(ge)：分析(xi)標準(zhun)品(pin)，98%
F81 貓(mao)腎(shen)細(xi)胞4-酮基13-順式-4-Keto 13-cis-Retiic Acid質量規(gui)格(ge)：美國進(jin)口

CM-M046小鼠腸上皮(pi)細(xi)胞(bao)*培養基100mL4-酮基9-順式4-Keto 9-cis Retiic Acid質量規(gui)格(ge)：美國進(jin)口

HUVEC-12, 人臍靜(jing)脈(mai)血(xue)管內皮(pi)細(xi)胞(bao)系4-叔丁基(ji)鄰苯(ben)二甲腈(>98.0%(GC)(N))4-tert-Butylphthalonitrile質量規(gui)格(ge)：>98.0%(GC)(N)

EB病毒轉化(hua)的(de)人B細胞;KMY0905 胎兒成纖(xian)維(wei)細胞*培養基 100mL4-丁氧(yang)基鄰(lin)苯(ben)二甲腈(>95.0%(GC))4-Butoxyphthalonitrile質量規(gui)格(ge)：>95.0%(GC)

間(jian)充質幹(gan)細胞(bao)培養基MSCM1,3-二亞(ya)氨基(ji)異吲(yin)哚(duo)啉(>98.0%(T))1,3-Diimiisoindoline質量規(gui)格(ge)：>98.0%(T)
PNLIPRP1 Others Human 人 PNLIPRP1 / PLRP1 人細胞(bao)裂解液 (陽性(xing)對(dui)照) (R)-質量規(gui)格(ge)：美國進(jin)口(R)-Ibuprofen

CL-0037BNL CL.2(小鼠胚胎肝細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶×2(S)-質量規(gui)格(ge)：美國進(jin)口(S)-Ibuprofen

BI U-87細胞，膀(pang)胱癌(ai)細胞(bao) 總T細胞,OKT3細胞 大鼠(shu)嗜堿(jian)性(xing)粒(li)細胞(bao)性(xing)白血病細(xi)胞(bao);RBL-1依那(na)普利(li)質量規(gui)格(ge)：美國進(jin)口Enalapril

BRL(大鼠(shu)肝(gan)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×21,3-二芐(bian)基-5-氟質量規(gui)格(ge)：美國進(jin)口1,3-Dibenzyl-5-fluorouracil

CPA2 Others Human 人 CPA2 / Carboxypeptidase-A2 人細胞(bao)裂解液 (陽性(xing)對(dui)照) 外(wai)消旋5-羧基(ji)托(tuo)特(te)羅定質量規(gui)格(ge)：美國進(jin)口rac 5-Carboxy Tolterodine
垂盆草探針(zhen)法PCR鑒(jian)定試劑盒*QGY-7703細胞，肝(gan)癌(ai)細胞(bao) 表皮(pi)癌(ai)細胞(bao)系(xi),A431細胞 小鼠網(wang)織細(xi)胞(bao)肉瘤(liu);M5076PBSBUFFERWITH0.05%TWEEN20,pH7.4PBS溶液含0.05% 吐溫20蛋白組學(xue)級(ji)白色(se)顆粒(li)粉末RTsigma

小鼠樹(shu)突狀細(xi)胞(bao)肉(rou)瘤(liu)低(di)轉移(yi)細胞(bao)(VAP33-GFP融合(he)蛋(dan)白穩(wen)定過(guo)表達(da));DG6-VAP33-GFP甜(tian)菜(cai)減(jian);甘(gan)安醋(cu)三(san)安內鹽;三銨內鹽 Bqtcinq;Lycinq;Glycocoll bqtcinq;Glycinq bqtcinq;TriMqthyl glycocoll cnhydridq;O
實(shi)驗(yan)流(liu)程：
1. 整個檢測過(guo)程應(ying)嚴格(ge)按(an)照本說明書(shu)要(yao)求分別(bie)在(zai)試劑準備(bei)區、樣本處(chu)理(li)區和PCR擴增(zeng)區進(jin)行操(cao)作(zuo)，各區實(shi)驗(yan)服、儀(yi)器(qi) 、耗(hao)材應(ying)獨(du)立使用，不能混(hun)用；實(shi)驗(yan)用吸頭(tou)采(cai)用帶(dai)濾(lv)芯(xin)吸頭(tou)；樣(yang)本處(chu)理(li)區應配(pei)有生(sheng)物(wu)安全櫃，樣本處(chu)理(li)在(zai)生(sheng)物(wu)安全櫃中進(jin)行操(cao)作(zuo)；三個區應該(gai)配(pei)有紫(zi)外(wai)線(xian)殺(sha)菌裝置(zhi)。
2. 為(wei)避免RNA降解，樣(yang)本處(chu)理(li)過(guo)程應(ying)在(zai)0-4℃條(tiao)件下(xia)操作(zuo)，且完(wan)成實(shi)驗(yan)後(hou)立即(ji)上機檢測；樣本處(chu)理(li)過(guo)程中使用的(de)器(qi)具耗(hao)材應(ying)經過(guo)無核酶(mei)處(chu)理(li)。

3. 每次實(shi)驗(yan)應該(gai)設置(zhi)陰(yin)、陽性(xing)對(dui)照。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應該在(zai)常溫下(xia)充分融化(hua)混(hun)勻(yun)，並應瞬時(shi)離(li)心。
5. 試劑盒內所配(pei)陰(yin)性(xing)和陽性(xing)對(dui)照在壹(yi)次使用前應全部轉移(yi)至標本準備(bei)區，並單獨(du)存放。
6. 為(wei)防(fang)止(zhi)熒(ying)光幹(gan)擾(rao)，應避免裸手(shou)直接(jie)接(jie)觸PCR反應管，並應避(bi)免在PCR反應管上進(jin)行任(ren)何標記(ji)。
7. 儀器(qi) 擴增(zeng)相(xiang)關(guan)參數應按(an)照本說明書(shu)相(xiang)關(guan)要(yao)求進(jin)行設置(zhi)；不同批(pi)號試劑不能混(hun)用。
8. ABI系列熒(ying)光定量(liang)PCR儀參數設置(zhi)中不選ROX校正，淬(cui)滅(mie)基因選(xuan)擇(ze)None。
9. 實(shi)驗(yan)過(guo)程中產品(pin)的廢棄(qi)物(wu)應(ying)該(gai)進(jin)行無害化(hua)處(chu)理(li)後(hou)方(fang)可(ke)丟(diu)棄(qi)。